Fatty acid composition analysisThe

Fatty acid composition analysis
The hindquarter muscle samples from dead transgenic positive and negative calves were used for fatty acid analysis according to the procedures from Kang and Wang (2005). Briefly, tissue homogenate from muscle was mixed with 1 mL hexane and 1 mL 14 % BF3/ MeOH reagent in a glass methylationtube and evaporated with nitrogen. Then, the mixtures were incubated in a boiling water bath for 1 h. After cooled down to room temperature, the mixtures were blended with 1 mL H2O and centrifuged for 1 min. And then the upper hexane layer was reserved and concentrated under nitrogen. Fatty acid methyl esters were analyzed by gas chromatography (Agilent 7890A). The peak area was calculated by the peak height and width. Identification of components was determined by comparison of retention times with those of authentic standards (Sigma).
Results
Embryo transfer and production of mfat1 transgenic cattle
A total of 209 recipients cattle were synchronized before embryo transfer and the estrus synchronization rate were 68.1 and 53.8 % (Table 1). Ninety-foursynchronized recipients were transplanted with mfat1 transgenic embryos, and 20 calves were obtained by caesareansection.Threemfat1transgeniccattlestayed alive, and other seventeen cattle died after birth to 111 days (Table 2).
Anatomical analysis of the dead cloned cattle
Anatomical analysis of 17 dead cloned cattle showed that inflammation and hemorrhagic septicemia were the main causes of death (Table 2).
Mfat1 gene insertion analysis
Totally twenty cloned calves were obtained and 14 calves were transgenic positive identified by PCR (Figs. 2, 3). The PCR products were also verified by DNA sequencing and amino acid sequence alignment, whichwere consistent withtheaminoacid sequence of C. elegans fat1gene(data not shown).
Expression analysis of mfat1 gene
RT-PCR results showed that the mfat1 gene was expressed in liver, muscle, kidney and lung of the fat1
transgenicpositive calf(fat1-1),butnotinthenegative one (fat1-4) (Fig. 3). RNA as a template was also performedto exclude genomicDNA residues(datanot shown).
Fatty acid composition analysis
Muscle tissues from bovine hindquarter parts of fat11, fat1-2, fat1-10, fat1-15 (transgenic positive calves) and fat1-4 (transgenic negative calf, as a control) were subjected to fatty acids composition analysis. As shown in Table 3, the n-6/n-3 PUFAs ratio of fat1-10 was 82.2 % decreased, from 5.33: 1 to 0.95: 1 as compared with fat1-4. Meanwhile, the ratio of fat1-1, fat1-2 and fat1-15 were decreased by 78.8, 76 and 70.4 %, respectively (Table 3).
Discussion
Accumulating evidence has demonstrated that reducing the n-6/n-3 PUFAs ratio in daily diet by increasing n-3 PUFAs contents is beneficial to human health (Calder 2014). However, a high n-6/n-3 PUFAs ratio dietary has been reported in both western countries

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์องค์ประกอบของกรดไขมันตัวอย่างกล้ามเนื้อ hindquarter จากถั่วเหลืองตายวัวค่าบวก และค่าลบถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์กรดไขมันตามขั้นตอนจาก Kang Wang (2005) Briefly, homogenate เนื้อเยื่อจากกล้ามเนื้อถูกผสมกับโพลี 1 mL 1 mL 14% BF3 / ทานอรีเอเจนต์ใน methylationtube แก้ว และหายไปกับไนโตรเจน แล้ว ส่วนผสมถูก incubated ในน้ำน้ำเดือดสำหรับ 1 h หลังจากระบายความร้อนด้วยลงอุณหภูมิห้อง ส่วนผสมได้ผสมกับ 1 mL H2O และ centrifuged ใน 1 นาที และชั้นบนโพลีถูกจอง แล้วเข้มข้นภายใต้ไนโตรเจน มีวิเคราะห์กรดไขมัน methyl esters โดย chromatography ก๊าซ (Agilent 7890A) ตั้งสูงสุดได้ตามความสูงสูงสุดและความกว้าง Identification ของส่วนประกอบที่ถูกกำหนด โดยเวลาเก็บข้อมูลเปรียบเทียบกับมาตรฐานอาหาร (ซิกมา)ผลลัพธ์ถ่ายฝากตัวอ่อนและการผลิตของวัวถั่วเหลือง mfat1จำนวน 209 รับวัวถูกซิงโครไนส์ก่อนถ่ายฝากตัวอ่อนและอัตราการซิงโครไนส์ estrus ได้ 68.1 และ 53.8% (ตาราง 1) 90 foursynchronized ผู้รับได้ transplanted กับ mfat1 ถั่วเหลืองโคลน และวัว 20 ได้รับ โดย caesareansection Threemfat1transgeniccattlestayed มีชีวิตอยู่ และอื่น ๆ 17 วัวควายเสียชีวิตหลังคลอดวัน 111 (ตาราง 2)กายวิภาควิเคราะห์วัวโคลนตายวัวควายตายโคลน 17 กายวิภาควิเคราะห์พบว่า inflammation และบริการเลือดออกมีสาเหตุหลักของการเสียชีวิต (ตารางที่ 2)วิเคราะห์การแทรกยีน Mfat1ทั้งหมดยี่สิบโคลนวัวมีวัวที่ได้รับ และ 14 ได้บวก identified ถั่วเหลือง โดย PCR (Figs. 2, 3) ผลิตภัณฑ์ PCR ได้ยัง verified โดย DNA ลำดับและกรดอะมิโนลำดับตำแหน่ง ลำดับสอดคล้อง withtheaminoacid whichwere ของ C. elegans fat1gene (ข้อมูลไม่แสดง)นิพจน์การวิเคราะห์ยีน mfat1RT-PCR ผลพบว่า ยีน mfat1 ที่แสดงในตับ กล้ามเนื้อ ไต และปอดของ fat1transgenicpositive calf(fat1-1), butnotinthenegative หนึ่ง (fat1-4) (Fig. 3) อาร์เอ็นเอเป็นแม่แบบยังเป็น performedto แยก genomicDNA residues(datanot shown)วิเคราะห์องค์ประกอบของกรดไขมันเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อจาก fat11, fat1-10, fat1-15, fat1-2 ส่วน hindquarter วัว (วัวถั่วเหลืองบวก) และ fat1-4 (ถั่วเหลืองลบลูก เป็นตัวควบคุม) ถูกต้องวิเคราะห์องค์ประกอบของกรดไขมัน ดังแสดงในตาราง 3 อัตราส่วน PUFAs n-6/n-3 fat1-10 ถูก 82.2% ลดลง จาก 5.33:1 0.95: 1 เป็น compared กับ fat1-4 ในขณะเดียวกัน อัตราส่วนของ fat1-1, fat1-2 และ fat1 15 ถูกลด 78.8, 76 และ 70.4% ตามลำดับ (ตาราง 3)สนทนาหลังหลักฐานได้แสดงว่า ลดอัตรา PUFAs n-6/n-3 ในอาหารประจำวัน โดยการเพิ่มเนื้อหา PUFAs n-3 เป็น beneficial ต่อสุขภาพมนุษย์ (คาลเด 2014) อย่างไรก็ตาม ความสูง n-6/n-3 PUFAs อัตราส่วนอาหารสำหรับผู้มีการรายงานในประเทศตะวันตก

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์องค์ประกอบของกรดไขมัน
กล้ามเนื้อส่วนหลังของสัตว์สี่ขาตัวอย่างจากน่องบวกและลบตายพันธุ์ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์กรดไขมันตามขั้นตอนจากคังและวัง (2005) Brie ชั้น Y, homogenate เนื้อเยื่อจากกล้ามเนื้อผสมกับเฮกเซนมิลลิลิตร 1 และ 1 มิลลิลิตร 14% น้ำยา BF3 / เมธานอลใน methylationtube แก้วและระเหยที่มีไนโตรเจน จากนั้นผสมถูกบ่มในอ่างน้ำเดือดเป็นเวลา 1 ชั่วโมง หลังจากที่เย็นลงที่อุณหภูมิห้องผสมถูกผสมกับ 1 มิลลิลิตร H2O และปั่นเป็นเวลา 1 นาที แล้วชั้นบนเฮกเซนถูกสงวนไว้และเข้มข้นภายใต้ไนโตรเจน ไขมันเมทิลเอสเตอร์ของกรดวิเคราะห์แก๊ส chromatography (Agilent 7890A) พื้นที่สูงสุดที่คำนวณได้จากยอดเขาความสูงและความกว้าง ไอออนบวกสายระบุชิ้นส่วนถูกกำหนดโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษากับผู้ที่มาตรฐานของแท้ (ซิกม่า).
ผล
การโอนตัวอ่อนและการผลิตของโคพันธุ์ mfat1
รวม 209 ผู้รับวัวตรงกันก่อนที่จะย้ายตัวอ่อนและอัตราการประสานเป็นสัดเป็น 68.1 และ 53.8% ( ตารางที่ 1) เก้าสิบ foursynchronized ผู้รับได้รับการปลูกถ่ายตัวอ่อนที่มียีน mfat1 20 และน่องที่ได้รับจาก caesareansection.Threemfat1transgeniccattlestayed มีชีวิตอยู่และอื่น ๆ วัวเจ็ดเสียชีวิตหลังคลอด 111 วัน (ตารางที่ 2).
การวิเคราะห์ทางกายวิภาคของวัวที่ตายแล้วโคลน
วิเคราะห์กายวิภาค 17 ตายโคลน วัวแสดงให้เห็นว่าในชั้น ammation และโรคโลหิตเป็นพิษเป็นสาเหตุหลักของการเสียชีวิต (ตารางที่ 2).
การวิเคราะห์ Mfat1 แทรกยีน
ทั้งหมดยี่สิบน่องโคลนที่ได้รับและ 14 น่องเป็นสายพันธุ์ระบุบวกเอ็ดโดยวิธี PCR (มะเดื่อ. 2, 3) ผลิตภัณฑ์ PCR นั้นยังมีเอ็ดสาย Veri โดยลำดับดีเอ็นเอและการจัดตำแหน่งลำดับกรดอะมิโน whichwere ลำดับ withtheaminoacid ที่สอดคล้องกันของ C. elegans fat1gene (ไม่ได้แสดงข้อมูล).
การวิเคราะห์การแสดงออกของ mfat1 ยีน
ผล RT-PCR พบว่ายีน mfat1 ได้แสดงออกในตับกล้ามเนื้อ ไตและปอดของ FAT1
transgenicpositive ลูกวัว (fat1-1) butnotinthenegative หนึ่ง (fat1-4) (รูป. 3) อาร์เอ็นเอเป็นแม่แบบก็ยังไม่รวม performedto ตกค้าง genomicDNA (แสดง datanot).
การวิเคราะห์องค์ประกอบของกรดไขมัน
เนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อส่วนหลังของสัตว์สี่ขาจากส่วนวัวของ fat11, fat1-2, fat1-10, fat1-15 (น่องบวกพันธุ์) และ fat1-4 (ดัดแปรพันธุกรรม ลูกวัวลบเป็นตัวควบคุม) ถูกยัดเยียดให้กรดไขมันวิเคราะห์องค์ประกอบ ดังแสดงในตารางที่ 3, n-6 / n-3 PUFAs อัตราส่วนของ fat1-10 เป็น 82.2% ลดลงจาก 5.33: 1-0.95: 1 เมื่อเทียบกับ fat1-4 ในขณะที่อัตราส่วนของ fat1-1, fat1-2 fat1-15 และลดลง 78.8, 76 และ 70.4% ตามลำดับ (ตารางที่ 3).
การอภิปราย
หลักฐานสะสมได้แสดงให้เห็นว่าการลด n-6 / n-3 PUFAs ในอัตราส่วน อาหารประจำวันโดยการเพิ่มเนื้อหา n-3 PUFAs เป็นประโยชน์ทางการสายต่อสุขภาพของมนุษย์ (คาลเดอ 2014) แต่สูง n-6 / n-3 PUFAs อัตราส่วนการบริโภคอาหารที่ได้รับรายงานในทั้งสองประเทศตะวันตก