2.2. Mass spectrometric analysis by

2.2. Mass spectrometric analysis by protein extraction
method and intact cell method
The bacterial pellet was dissolved in 1 mL of water and
centrifuged (all centrifugation steps were performed at
13,000  g for 2 minutes) in order to wash out the residue
of BHI.
According to the protein extraction method (PEM), 1 mL
of 75% ethanol solution was added to the pellet, and after
centrifugation, the supernatant was removed by carefully
pouring it from the microtube. A second centrifugation step
was performed, and the remaining liquid was carefully
removed with a pipette. The bacterial pellets were allowed
to air-dry at room temperature for 15 minutes. A solution of
70% formic acid was added to lyse bacterial cells and to
release the inner-cell proteins, which are predominantly
ribosomal proteins that produce diagnostic ions in MALDIMS
fingerprinting. The 70% formic acid solution was added
proportionally to the size of pellet to completely dissolve it.
Subsequently, 100% acetonitrile was added to each sample
in volumes equal to the 70% formic acid solution previously
added, thus producing a bacterial extract in a (1:1) ratio of
70% formic acid and acetonitrile. A final centrifugation step
was performed to separate the bacterial cell debris from the
supernatant containing the ribosomal proteins used for the
MALDI-MS identification.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. spectrometric โดยรวมวิเคราะห์ โดยการสกัดโปรตีนวิธีการและวิธีการเซลล์เหมือนเดิมเม็ดแบคทีเรียถูกละลายใน 1 มิลลิลิตรของน้ำ และcentrifuged (ทั้งหมด centrifugation ดำเนินขั้นตอนที่g 13000 2 นาที) เพื่อระวังการตกค้างของ BHIตามโปรตีนสกัดด้วยวิธีการ (PEM), 1 mL75% เอทานอลโซลูชั่นเพิ่มเม็ด และหลังจากcentrifugation, supernatant ถูกเอาออกโดยระมัดระวังเทจาก microtube ขั้นตอนที่สอง centrifugationทำ และของเหลวที่เหลืออย่างรอบคอบเอากับเปตต์เป็น ขี้แบคทีเรียได้รับอนุญาตการ air-dry ที่อุณหภูมิห้อง 15 นาที การแก้ปัญหาของ70% กรดถูกเพิ่ม lyse เซลล์แบคทีเรียและปล่อยโปรตีนภายในเซลล์ ซึ่งเป็นส่วนใหญ่โปรตีน ribosomal ที่วินิจฉัยกันใน MALDIMSลายพิมพ์ เพิ่มโซลูชั่นกรด 70%สัดส่วนกับขนาดของเม็ดจะละลายหมดในเวลาต่อมา acetonitrile 100% ถูกเพิ่มเข้าไปแต่ละอย่างในปริมาณเท่ากับ 70% กรดแก้ปัญหาก่อนหน้านี้เพิ่ม สารสกัดจากแบคทีเรีย (1:1) อัตราส่วนของการผลิตดังนั้น70% กรดและ acetonitrile ขั้นตอนสุดท้าย centrifugationทำการแยกเศษเซลล์แบคทีเรียจากการsupernatant ประกอบด้วยโปรตีน ribosomal ที่ใช้สำหรับการรหัส MALDI MS

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การวิเคราะห์ spectrometric มวลโดยการสกัดโปรตีน
วิธีการและวิธีการเหมือนเดิมเซลล์
เม็ดแบคทีเรียก็เลือนหายไปใน 1 มิลลิลิตรของน้ำและ
ปั่น (ทุกขั้นตอนการหมุนเหวี่ยงได้ดำเนินการที่
13,000? กรัมสำหรับ 2 นาที) เพื่อที่จะล้างออกสารตกค้าง
ของ BHI.
ตามที่ วิธีการสกัดโปรตีน (PEM) 1 มิลลิลิตร
ของการแก้ปัญหาเอทานอล 75% ถูกบันทึกอยู่ในเม็ดและหลังจาก
หมุนเหวี่ยงใสถูกลบออกโดยระมัดระวัง
เทจากจุลภาค ขั้นตอนการปั่นแยกที่สอง
ได้รับการดำเนินการและของเหลวที่เหลือได้รับการอย่างระมัดระวัง
ลบออกด้วยปิเปต เม็ดแบคทีเรียที่ได้รับอนุญาต
ไปในอากาศแห้งที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที การแก้ปัญหาของ
70% กรดฟอร์มิถูกบันทึกอยู่ในเซลล์แบคทีเรีย lyse และ
ปล่อยโปรตีนภายในเซลล์ซึ่งส่วนใหญ่เป็น
โปรตีนโซมอลที่ผลิตไอออนวินิจฉัยใน MALDIMS
พิมพ์ลายนิ้วมือ 70% สารละลายกรดฟอร์มิถูกบันทึกอยู่ใน
สัดส่วนกับขนาดของเม็ดที่สมบูรณ์ละลาย.
ต่อมา 100% acetonitrile ถูกบันทึกอยู่ในแต่ละตัวอย่าง
ในปริมาณเท่ากับ 70% สารละลายกรดฟอร์มิก่อนหน้านี้
เพิ่มจึงผลิตสารสกัดจากแบคทีเรียใน ( 1: 1) อัตราส่วน
70% กรดและ acetonitrile ขั้นตอนการหมุนเหวี่ยงสุดท้าย
ได้รับการดำเนินการที่จะแยกเศษเซลล์ของแบคทีเรียจาก
สารละลายที่มีโปรตีนโซมอลที่ใช้สำหรับ
การระบุ MALDI-MS

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . มวลความการวิเคราะห์โดยวิธีการสกัดโปรตีนและเซลล์เหมือนเดิม

วิธีเม็ดแบคทีเรียละลายใน 1 มิลลิลิตรของน้ำและไฟฟ้า (
3
) มีการทุกขั้นตอนที่ 13 , 000  G 2 นาที ) เพื่อที่จะล้างออกสารตกค้างของ BHI
.
ตามวิธีสกัดโปรตีน ( PEM ) , 1 มิลลิลิตรของสารละลายเอทานอล
75% ถูกเพิ่มเม็ดและ
3 หลัง ,ที่นำออกโดยรอบคอบ
เทจาก microtube . สองขั้นตอนการปั่น
และของเหลวที่เหลืออยู่ให้ดี
ลบออกด้วยหลอด เม็ดแบคทีเรียได้รับอนุญาต
อากาศแห้งที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที โซลูชั่นของ
70% กรดถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อทำให้เซลล์แบคทีเรียและเซลล์
ปล่อยภายในโปรตีนที่เด่น
โปรตีน Protein ที่ผลิตไอออนวินิจฉัยใน maldims
ลายนิ้วมือ 70% กรดในสารละลายเพิ่ม
ตามส่วนขนาดของเม็ดที่สมบูรณ์ยุบ .
ต่อมา 100% ไนเพิ่มตัวอย่าง
ในปริมาณเท่ากับ 70% กรดโซลูชั่นก่อนหน้านี้
เพิ่ม ดังนั้น การผลิตสารสกัดจากแบคทีเรีย ( 1 : 1 ) สัดส่วนของ
70% กรดและ ไน .สุดท้าย ขั้นตอนที่ 3
ได้แยกเศษเซลล์แบคทีเรียจาก
น่านที่มี Protein โปรตีนที่ใช้สำหรับ
maldi-ms ระบุ