2. Materials and methods2.1. Microo

2. Materials and methods
2.1. Microorganism and growth conditions
The strain of the pathogen used in this study was S. reilianum
isolated from teliospores obtained from corn crops in the state of
Hidalgo, central Mexico, in 2008.
The fungal strain was grown in Petri dishes containing potato
dextrose agar medium (PDA Difco™) and YEPD solid medium (1%
yeast extract, 2% peptone, 2% dextrose, and 2% agar). The plates
were maintained at 28 C for 8 days. The fungus was stored in
tubes with PDA and mineral oil at ambient temperature.
B. subtilis strain isolate numbers 13, 35, 55, 135 and 160 were
isolated from soil samples taken from cornfields in Hidalgo, Mexico,
where the disease is present. The isolation and identification
of these strains is described in a study reported previously by
Petatán-Sagahón et al. (2011).
The following media were used to grow the bacterial strains:
potato dextrose agar medium (PDA Difco™), and potato dextrose
broth medium (PDB), which were obtained by boiling 240 g of
potato in 1 L of water for 20 min and then filtering, before supplementing
this infusion with 2% glucose. The solid media were incubated
at 28 C and the liquid medium was incubated in a rotary
shaker at 200 rpm and 28 C. Each strain was then stored in 25%
glycerol at 80 C.
2.2. Selection of B. subtilis strains with anti-fungal activity
The B. subtilis strains were tested in vitro for antifungal activity
as follows: plates of YEPD were inoculated onto the surface with
3 mL of a diluted YEPD overlay (0.5% yeast extract, 1% peptone,
1% dextrose, and 0.6% agar) containing 0.1 mL of S. reilianum, and
cultivated for 18 h at 28 C and 180 rpm. Then B. subtilis was sown
with a sterile stick. The plates were incubated at 28 C for 72 h and
observed every 12 h. The B. subtilis strains that showed the capacity
to inhibit proliferation of the fungus were selected.
2.3. Antifungal activity of extracellular fractions from cultures of
B. subtilis
To obtain extracellular filtrates with antifungal activity, 500 mL
of PDB were inoculated to obtain an absorbance of 0.2 at 600 nm
with an overnight culture of each strain in PDB, and then incubated
at 28 C and 180 rpm. Samples of 5 mL were taken at 12, 24 and
60 h, which corresponds to the logarithmic, stationary, and late
stationary phases of growth of each strain, and were centrifuged
at 8000 rpm. The supernatants (extracellular fraction) were sterilized
in an autoclave. Then 200 ll was added to small bottomless
tubes placed on the surface overlaid with S. reilianum, and inoculated
in YEPD plates as described above. The plates were incubated
at 28 C for 120 h and observed every 12 h. The filtrates with antifungal
activity were those that inhibited the development of the
fungus. In this case, inhibition halos were observed, which were
measured in mm. For the control, 200 ll of PDB medium ware
added.
2.4. Field test
The application of B. subtilis was conducted in the first week of
May 2010 and the last week of April in 2012 near Mixquiahuala
Hidalgo, Mexico, where a history of corn smut exists. The commercial
corn hybrid AS150, known to be susceptible to head smut treated
with the insecticide Poncho 600 FS (clothianidin), was used
for the test.
Seed treatment was done using a suspension of B. subtilis (strain
160) at 1  108 cells/mL, obtained from a 60 h PDB culture by infiltration
into the seeds using a vacuum. The control seeds were infiltrated
with an equal volume of PDB without the bacteria, diluted in
water at the same proportion as the suspension of B. subtilis. The
sensitivity of B. subtilis to the insecticide Poncho 600 FS was
tested as follows: 5 seeds treated with insecticide and B. subtilis
were sown in plates with PDA and incubated at 28 C for 48 h.
Development of the bacteria was observed.
The evaluation was carried out on experimental plots. A completely
randomized design was used that involved 6 repetitions
containing 4 furrows 5 m in length with 80 cm of separation
between each one; the experiments were established randomly.
Two seeds were sown at a separation of 17.5 cm, such that 58 were

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. เงื่อนไขจุลินทรีย์และการเจริญเติบโตสายพันธุ์ของการศึกษาที่ใช้ในการศึกษานี้มี S. reilianumแยกต่างหากจาก teliospores ที่ได้รับจากพืชข้าวโพดในรัฐHidalgo กลางเม็กซิโก 2008สายพันธุ์เชื้อราเติบโตในจาน Petri ประกอบด้วยมันฝรั่งขึ้นกลาง agar (PDA Difco ™) และ YEPD แข็งปานกลาง (1%ยีสต์สกัด peptone 2%, 2% ขึ้น และ agar 2%) แผ่นถูกรักษาไว้ที่ 28 C ได้ 8 วัน เชื้อราถูกเก็บไว้ในท่อน้ำมันที่อุณหภูมิและพีดีเอB. subtilis ต้องใช้แยกหมายเลข 13, 35, 55, 135 และ 160 ได้แยกต่างหากจากตัวอย่างดินที่นำมาจาก cornfields ใน Hidalgo เม็กซิโกโรคที่เป็นอยู่ การแยกและระบุของสายพันธุ์เหล่านี้ได้อธิบายไว้ในการศึกษาที่รายงานก่อนหน้านี้โดยPetatán Sagahón et al. (2011)สื่อต่อไปนี้ใช้ในการขยายสายพันธุ์แบคทีเรีย:มันฝรั่งขึ้น agar ปานกลาง (™ PDA Difco), และมันฝรั่งขึ้นสื่อซุป (PDB), ซึ่งได้รับมา โดยต้ม 240 g ของมันฝรั่งใน 1 L น้ำ 20 นาทีและกรองแล้ว ก่อนใช้คอนกรีตนี้ มีน้ำตาลกลูโคส 2% สื่อเป็นของแข็งถูก incubatedที่ 28 C และขนาดกลางของเหลวถูก incubated ในแบบโรตารี่เชคเกอร์ที่ 200 rpm และ c 28 ต้องใช้แต่ละที่นั้น 25%กลีเซอรที่ 80 c2.2. การเลือกเงีย subtilis เกิดกิจกรรมต้านเชื้อราสายพันธุ์ subtilis เกิดทดสอบการเพาะเลี้ยงสำหรับกิจกรรมต้านเชื้อราต่อไปนี้: แผ่นของ YEPD มี inoculated บนพื้นผิวด้วย3 mL ของซ้อนทับ YEPD แตกออก (สารสกัดจากยีสต์ 0.5%, 1% peptone1% ขึ้น และ 0.6% agar) ประกอบด้วย 0.1 mL ของ S. reilianum และcultivated ใน 18 h 28 C และ 180 รอบต่อนาที แล้วเกิด subtilis ถูกหว่านด้วยไม้กระบอกนั้น แผ่นก็ incubated ที่ 28 C สำหรับ 72 h และสังเกตทุก h 12 สายพันธุ์ subtilis เกิดที่แสดงกำลังการผลิตยับยั้งการงอกของเห็ดราถูกเลือก2.3 การกิจกรรมต้านเชื้อราของ extracellular เศษจากวัฒนธรรมของSubtilis เกิดรับ extracellular filtrates กับกิจกรรมต้านเชื้อรา ขนาด 500 มล.ของ PDB ได้ inoculated รับการ absorbance 0.2 ที่ 600 nmมีวัฒนธรรมเป็นบัตรกำนัลของแต่ละสายพันธุ์ใน PDB และ incubated แล้วที่ 28 C และ 180 รอบต่อนาที ตัวอย่างของ 5 mL ที่ถ่ายที่ 12, 24 และh 60 ซึ่งสอดคล้องกับลอการิทึม เครื่องเขียน การล่าช้าเครื่องเขียนขั้นตอนของการเจริญเติบโตของแต่ละสายพันธุ์ และถูก centrifugedที่ 8000 รอบต่อนาที Supernatants (extracellular เศษ) ถูก sterilizedในด้วย 200 แล้วจะถูกเพิ่มเข้าไปเล็ก bottomlessท่อที่วางอยู่บนพื้นผิว overlaid กับ S. reilianum และ inoculatedในแผ่น YEPD ที่อธิบายข้างต้น แผ่นที่ incubatedที่ 28 C สำหรับ 120 h และสังเกตทุก h 12 Filtrates กับอาการกิจกรรมได้ที่ห้ามการพัฒนาเชื้อรา ในกรณีนี้ halos ยับยั้งสุภัค ซึ่งวัดเป็นมิลลิเมตร สำหรับตัวควบคุม 200 จะ PDB พัสดุกลางเพิ่ม2.4 การฟิลด์ทดสอบวิธีการใช้ subtilis เกิดในสัปดาห์แรกของ53 พ.ค.และสัปดาห์สุดท้ายของเดือนเมษายน 2555 ใกล้ MixquiahualaHidalgo เม็กซิโก ที่อยู่ประวัติ smut ข้าวโพด เชิงพาณิชย์ข้าวโพดผสม AS150 รู้จักควบคู่ smut ใหญ่ถือว่าในยาฆ่าแมลง ด้วย FS 600 ปอนโช (clothianidin), ใช้สำหรับการทดสอบกระทำการรักษาเมล็ดใช้ระงับ subtilis เกิด (ต้องใช้160) ที่ 1 108 เซลล์/mL รับจาก 60 h PDB วัฒนธรรม โดยการแทรกซึมเป็นเมล็ดที่ใช้สุญญากาศ เมล็ดพันธุ์ควบคุมได้ถูกแทรกซึมมีปริมาตรการเท่ากันของ PDB โดยแบคทีเรีย ยกเว้นในน้ำในสัดส่วนเดียวกันเป็นการระงับ subtilis เกิด ที่มีความไวของ subtilis เกิดเพื่อกำจัดแมลง FS 600 ปอนโชทดสอบต่อไปนี้: เมล็ด 5 รับยาฆ่าแมลงและ subtilis เกิดหว่านในแผ่นกับ PDA และ incubated ที่ 28 C สำหรับ 48 hพัฒนาของแบคทีเรียถูกสังเกตการประเมินถูกดำเนินบนผืนทดลอง A ทั้งหมดออกแบบ randomized ใช้ที่เกี่ยวข้องกับการทำซ้ำ 6ประกอบด้วย furrows 4 5 เมตรความยาว 80 ซม.มีของการแยกระหว่างแต่ละหนึ่ง การทดลองได้ก่อตั้งโดยการสุ่มสองเมล็ดถูกหว่านที่แบ่งแยก 17.5 ซม. ให้ได้ 58

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 จุลินทรีย์และเงื่อนไขการเจริญเติบโตของสายพันธุ์ของเชื้อโรคที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้เอส reilianum ที่แยกได้จาก teliospores ที่ได้จากพืชข้าวโพดในรัฐอีดัลโกเม็กซิโกกลางในปี2008 สายพันธุ์เชื้อราได้รับการปลูกในจานเลี้ยงเชื้อที่มีมันฝรั่งขนาดกลางวุ้นเดกซ์โทรส ( PDA Difco ™) และ YEPD สื่อที่เป็นของแข็ง (1% สารสกัดจากยีสต์, เปปโตน 2%, 2% เดกซ์โทรสและวุ้น% 2) แผ่นที่ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 8 วัน เชื้อราที่ถูกเก็บไว้ในหลอดกับ PDA และน้ำมันแร่ที่อุณหภูมิห้อง. บี subtilis สายพันธุ์แยกหมายเลข 13, 35, 55, 135 และ 160 ถูกแยกได้จากตัวอย่างดินที่นำมาจากข้าวโพดในอีดัลโกเม็กซิโกที่เป็นโรคที่เป็นปัจจุบัน การแยกและบัตรประจำตัวของสายพันธุ์เหล่านี้จะอธิบายไว้ในการศึกษาก่อนหน้านี้รายงานโดยPetatán-Sagahón et al, . (2011) สื่อต่อไปนี้ถูกใช้ในการปลูกสายพันธุ์แบคทีเรีย: มันฝรั่งขนาดกลางวุ้นเดกซ์โทรส (PDA Difco ™) และเดกซ์โทรสมันฝรั่งกลางน้ำซุป(PDB) ซึ่งได้รับโดยการต้ม 240 กรัมมันฝรั่งใน1 ลิตรน้ำ 20 นาทีแล้วกรองก่อนที่จะเสริมยานี้กับกลูโคส2% สื่อที่เป็นของแข็งถูกบ่มที่ 28 องศาเซลเซียสและอาหารเหลวถูกบ่มในหมุนปั่นที่200 รอบต่อนาทีและ 28 องศาเซลเซียส แต่ละสายพันธุ์ที่ถูกเก็บไว้ใน 25% กลีเซอรอลที่? 80? C. 2.2 การคัดเลือกสายพันธุ์บี subtilis มีฤทธิ์ต้านเชื้อราบีsubtilis สายพันธุ์ที่ได้รับการทดสอบในหลอดทดลองกิจกรรมต้านเชื้อราดังนี้แผ่นYEPD ถูกเชื้อลงบนพื้นผิวที่มี3 มิลลิลิตรซ้อนทับ YEPD เจือจาง (0.5% สารสกัดจากยีสต์, 1% เปปโตน, เดกซ์โทรส 1% และอาหารเลี้ยงเชื้อ 0.6%) ที่มี 0.1 มิลลิลิตร reilianum เอสและได้รับการปลูกฝัง18 ชั่วโมงที่ 28 องศาเซลเซียสและ 180 รอบต่อนาที จากนั้น B. subtilis หว่านด้วยไม้ผ่านการฆ่าเชื้อ แผ่นถูกบ่มที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 72 ชั่วโมงและสังเกตทุก12 ชั่วโมง สายพันธุ์บี subtilis ที่แสดงให้เห็นความสามารถในการยับยั้งการแพร่กระจายของเชื้อราได้รับการคัดเลือก. 2.3 กิจกรรมต้านเชื้อราเศษส่วน extracellular จากวัฒนธรรมของบี subtilis ที่จะได้รับ filtrates สารที่มีฤทธิ์ต้านเชื้อรา 500 มิลลิลิตรของPDB ถูกเชื้อจะได้รับการดูดกลืนแสง 0.2 ที่ 600 นาโนเมตรที่มีวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของแต่ละสายพันธุ์ในPDB และบ่มจากนั้นวันที่28 องศาเซลเซียสและ 180 รอบต่อนาที ตัวอย่าง 5 มิลลิลิตรถูกนำมาที่ 12, 24 และ60 ชั่วโมงซึ่งสอดคล้องกับลอการิทึมนิ่งและปลายเฟสของการเจริญเติบโตของแต่ละสายพันธุ์และได้รับการหมุนเหวี่ยงที่8000 รอบต่อนาที supernatants (ส่วนนอก) ได้รับการฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน 200 LL ถูกบันทึกอยู่ในลึกขนาดเล็กหลอดวางอยู่บนพื้นผิวที่บุด้วยเอสreilianum และเชื้อในจานYEPD ที่อธิบายข้างต้น แผ่นถูกบ่มที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 120 ชั่วโมงและสังเกตทุก 12 ชั่วโมง filtrates กับเชื้อรากิจกรรมเหล่านั้นที่ยับยั้งการพัฒนาของเชื้อรา ในกรณีนี้การยับยั้งรัศมีถูกตั้งข้อสังเกตซึ่งถูกวัดเป็นมิลลิเมตร สำหรับการควบคุม 200 LL PDB ของกลางเครื่องเพิ่ม. 2.4 การทดสอบภาคสนามการประยุกต์ใช้ subtilis บีได้ดำเนินการในสัปดาห์แรกของพฤษภาคม2010 และในสัปดาห์สุดท้ายของเดือนเมษายนในปี 2012 ใกล้ Mixquiahuala อีดัลโกเม็กซิโกที่มีประวัติของเขม่าข้าวโพดที่มีอยู่ การค้าข้าวโพดลูกผสม AS150, ที่รู้จักกันเป็นความเสี่ยงที่จะได้รับการรักษาหัวเขม่าที่มียาฆ่าแมลงPoncho หรือไม่ 600 FS (clothianidin) ถูกนำมาใช้สำหรับการทดสอบ. การรักษาเมล็ดพันธุ์ที่ได้กระทำโดยใช้การระงับการ subtilis บี (สายพันธุ์160) ณ วันที่ 1? 108 เซลล์ / มิลลิลิตรที่ได้รับจากวัฒนธรรม PDB 60 ชั่วโมงโดยการแทรกซึมเข้าไปในเมล็ดใช้สูญญากาศ เมล็ดพันธุ์ควบคุมถูกแทรกซึมเข้าไปอยู่กับปริมาณที่เท่ากันของ PDB โดยไม่ต้องแบคทีเรียเจือจางในน้ำที่มีสัดส่วนเดียวกับการระงับการsubtilis บี ความไวของ subtilis บียาฆ่าแมลงเพื่อ Poncho หรือไม่ 600 FS ได้รับการทดสอบดังต่อไปนี้: 5 เมล็ดรับการรักษาด้วยยาฆ่าแมลงและ subtilis บี?. ถูกหว่านในแผ่นกับ PDA และบ่มที่ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง. การพัฒนาของเชื้อแบคทีเรียพบว่าการประเมินผลการดำเนินการในแปลงทดลอง สมบูรณ์แบบสุ่มถูกนำมาใช้ที่เกี่ยวข้องกับการเกิดซ้ำ 6 มี 4 ร่อง 5 เมตรยาว 80 ซม. ของการแยกระหว่างแต่ละหนึ่ง การทดลองที่ถูกจัดตั้งขึ้นโดยการสุ่ม. สองถูกหว่านเมล็ดพันธุ์ที่แยกจาก 17.5 ซม. เช่นที่อยู่ 58

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . จุลินทรีย์และสภาวะการเจริญเติบโต
สายพันธุ์ของเชื้อที่ใช้ในการศึกษาครั้งนี้ คือ เอส reilianum
ที่แยกได้จาก teliospores ที่ได้จากข้าวโพดพืชในรัฐ
Hidalgo , กลางเม็กซิโก ใน 2008 .
สายพันธุ์เชื้อราโตในจานเลี้ยงเชื้อที่มีมันฝรั่ง
Dextrose Agar ( PDA ) difco ™ ) และอาหารเลี้ยงเชื้อแข็งปานกลาง ( 1 %
% extract สารสกัดจากยีสต์ , 2 2 % dextrose ,และ 2 % Agar ) จาน
ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 28  C เป็นเวลา 8 วัน เชื้อราที่ถูกเก็บไว้ในหลอดด้วย
PDA และน้ำมันแร่ที่อุณหภูมิห้อง .
B . subtilis สายพันธุ์แยกหมายเลข 13 , 35 , 55 , 135 และ 160 ) ที่แยกได้จากตัวอย่างดิน
ถ่ายจากไร่ข้าวโพดใน Hidalgo , เม็กซิโก ,
ที่โรคที่เป็นปัจจุบัน การแยกและจำแนก
สายพันธุ์ที่อธิบายไว้ในการศึกษานี้รายงานก่อนหน้านี้โดย
petat . kgm n-sagah เลออง et al . ( 2011 )
สื่อต่อไปนี้ที่ใช้ปลูกสายพันธุ์แบคทีเรีย :
อาหาร Potato Dextrose Agar ( PDA ) difco ™ ) และอาหาร potato dextrose broth medium
( PDB ) ซึ่งได้จากการต้ม 240 กรัมในน้ำ 1 ลิตร
มันฝรั่งสำหรับ 20 นาทีแล้วกรองก่อนเสริม
แช่นี้ กลูโคส 2 %สื่อที่เป็นของแข็งถูกบ่ม
ที่ 28  C และอาหารเหลวถูกบ่มในเครื่องปั่นหมุน
ที่ 200 รอบต่อนาทีและ 28  C แต่ละสายพันธุ์ก็เก็บไว้ใน 25 %
กลีเซอรอลที่  80  C .
2.2 . เลือก B . subtilis สายพันธุ์ที่มีกิจกรรมต่อต้านเชื้อรา
B . subtilis สายพันธุ์มาทดสอบในหลอดทดลองเพื่อป้องกันเชื้อราสำหรับกิจกรรม
ดังนี้ จานอาหารเลี้ยงเชื้อปลูกเชื้อลงบนพื้นผิวด้วย
3 มิลลิลิตรอาหารเลี้ยงเชื้อซ้อนทับเจือจาง ( 0.5% 1% extract สารสกัดจากยีสต์ , ,
1 % dextrose และ 0.6% วุ้น ) ที่มีสหรัฐอเมริกา reilianum 0.1 มิลลิลิตร และปลูก 18 H
ที่ 28  C 180 รอบ / นาที แล้ว B . subtilis หว่าน
กับติดเป็นหมัน แผ่นอุณหภูมิ 28 องศาเซลเซียส นาน 72 ชั่วโมง และ 
สังเกตทุก 12 ชั่วโมง B . subtilis สายพันธุ์พบว่าสามารถยับยั้งการแพร่กระจายของเชื้อรา

ถูกเลือก 2.3ฤทธิ์ต้านราของเศษส่วนและจากวัฒนธรรมของ B . subtilis

เพื่อให้ได้สารละลายนอกเซลล์ที่มีฤทธิ์ต้านรา , 500 ml
ของ PDB ปลูกเชื้อเพื่อขอรับค่า 0.2 ที่ 600 nm
กับวัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของแต่ละสายพันธุ์เส้นใยแล้วบ่ม
ที่ 28  C 180 รอบ / นาที ตัวอย่างของ 5 มิลลิลิตร ถ่ายที่ 12 , 24 และ
60 H ซึ่งสอดคล้องกับลอการิทึม , เครื่องเขียนและสาย
นิ่งระยะของการเจริญเติบโตของแต่ละสายพันธุ์ และที่ระดับ
ที่ 8 , 000 รอบต่อนาที การ supernatants ( Extracellular เศษส่วน ) ฆ่าเชื้อในหม้อนึ่งความดัน
. 200 แล้วจะถูกเพิ่มขนาดเล็กลึก
หลอดวางไว้บนพื้นผิวที่หุ้มด้วย . reilianum และเชื้อในอาหารเลี้ยงเชื้อ
แผ่นตามที่อธิบายไว้ข้างต้น จานถูกบ่ม
ที่ 28  C 120 H และสังเกตทุก 12 ชั่วโมงในสารละลายที่มีฤทธิ์ต้านรา
เป็นผู้ที่ยับยั้งการพัฒนา
เห็ดรา ในกรณีนี้ การประมาณจำนวนที่
วัดในมิลลิเมตร สำหรับการควบคุมของเครื่องขนาดกลาง 200 จะเพิ่มเส้นใย
.
2.4 . สนามทดสอบ
ใบสมัครของ B . subtilis การทดลองในสัปดาห์แรกของเดือนพฤษภาคม 2010 และ
สัปดาห์สุดท้ายของเดือนเมษายน 2012 ใกล้ mixquiahuala
Hidalgo , เม็กซิโกที่ประวัติของหนังโป๊ข้าวโพดอยู่ โฆษณา
ข้าวโพดลูกผสม as150 , ที่รู้จักกันเป็นเสี่ยงหัวก็ถือว่า
กับยาฆ่าแมลงปอนโช  600 FS ( clothianidin ) , ถูกใช้เพื่อทดสอบ
.
รักษาเมล็ดใช้ระงับ B . subtilis ( สายพันธุ์
160 ) ที่ 1  108 เซลล์ / มิลลิลิตร ที่ได้จากเส้นใย 60 ชม. วัฒนธรรมที่แทรกซึมเข้าไปในเมล็ด
ใช้สุญญากาศ . เมล็ดพันธุ์ควบคุมแทรกซึมอยู่
กับปริมาณของเส้นใยเท่ากับไม่มีแบคทีเรียในน้ำที่เจือจาง
สัดส่วนเช่นเดียวกับช่วงล่างของ B . subtilis .
ความไวของ B . subtilis กับยาฆ่าแมลงปอนโช  600 FS คือ
ทดสอบดังนี้ : 5 เมล็ดพันธุ์ที่ได้รับการรักษาด้วยยาฆ่าแมลงและ B . subtilis
ถูกหว่านลงในจานกับ PDA และบ่มที่อุณหภูมิ 28 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง  การพัฒนาของแบคทีเรีย
)การประเมินผลได้ดำเนินการในแปลงทดลอง ใช้แผนการทดลองแบบสุ่มสมบูรณ์

ที่เกี่ยวข้อง 6 repetitions ที่มี 4 ใน 5 เมตรยาว 80 ซม. แยก
ระหว่างแต่ละหนึ่ง ซึ่งสร้างแบบสุ่ม .
2 เมล็ดหว่านในการแยก 17.5 เซนติเมตร เช่น 58 คือ