2.2. Construction of plasmidsFor ho

2.2. Construction of plasmids
For homologous expression of the native genes involved in PHB
biosynthesis inSynechocystis, constructs of plasmids were created.
The 2.1-kb of native phaA and phaB operon (phaAB Region, Chr:
1437373–1439426) and 2.2-kb of native phaE and phaC operon
(phaEC Region, Chr: 932071–934294) of Synechocystis sp. PCC
6803 (Kaneko et al., 1996) were amplified by PCR with specific primers
pairs of phaAB_F: 5’ TAGAGATCTAGAGTTAATGGCCGCC
CATCC-3’ and phaAB_R: 5’ TAGAGACTGCAGACTAGTGTACCG
CAAAAGTTAGG-3’, phaEC_F: 5’ TAGAGAACTAGTATG GAATCGA
CAAATAAAACCTGGA-3’ and phaEC_R: 5’ TAGAGACTGCAGT
CACTGTCGTTCCGATA-3’ for phaAB and phaEC genes respectively.
PCR products were ligated into the cloning vector pEERM
(Englund et al., 2015) at XbaI and SpeI sites to generate
pEERM_phaAB plasmid and at SpeI and PstI sites to create
pEERM_phaEC plasmid. In addition, the phaEC fragment was
digested and inserted into pEERM_phaAB at SpeI and PstI sites to
generate pEERM_phaABEC. The pEERM plasmids contained a
chloramphenicol resistance cassette and the flanking region of
psbA2 used for introducing the respective gene into the psbA2 gene
and thereby replacing the native psbA2 via double homologous
recombination (Table 1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. สร้าง plasmidsสำหรับเซทจะมีนิพจน์ของยีนดั้งเดิมที่เกี่ยวข้องใน PHBinSynechocystis สังเคราะห์ สร้างโครงสร้างของ plasmids2.1-kb ของ operon phaA และ phaB ดั้งเดิม (phaAB ภูมิภาค Chr:1437373 – 1439426) และ 2.2 กิโลของเจ้าของแพและใกล้ภาคฮัทปา operon(phaEC ภูมิภาค Chr: 932071 – 934294) ของ Synechocystis sp. PCC6803 (พุด et al. 1996) ถูกขยาย โดย PCR ด้วยไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงคู่ของ phaAB_F: 5' TAGAGATCTAGAGTTAATGGCCGCCCATCC-3' และ phaAB_R: 5' TAGAGACTGCAGACTAGTGTACCGCAAAAGTTAGG-3', phaEC_F: TAGAGAACTAGTATG GAATCGA 5'CAAATAAAACCTGGA-3' และ phaEC_R: 5' TAGAGACTGCAGTCACTGTCGTTCCGATA-3' สำหรับยีน phaAB และ phaEC ตามลำดับผลิตภัณฑ์ PCR ถูกกเดี่ยวใน pEERM เวกเตอร์การ cloning(Englund et al. 2015) ที่เว็บไซต์ XbaI และ SpeI เพื่อสร้างpEERM_phaAB plasmid และ SpeI และ PstI เว็บไซต์เพื่อสร้างpEERM_phaEC plasmid นอกจากนี้ ส่วน phaEC คือpEERM_phaAB เจ่า และแทรกลงในเว็บไซต์ SpeI และ PstI เพื่อสร้าง pEERM_phaABEC Plasmids pEERM ที่มีอยู่ในเทปทนคคัสและแคว้น flankingpsbA2 ใช้สำหรับแนะนำยีนเกี่ยวข้องลงในยีน psbA2และจึงแทน psbA2 พื้นเมืองผ่านสองเซทจะมีรวมตัวกันอีกรอบ (ตาราง 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การก่อสร้างของพลาสมิด
สำหรับการแสดงออกของยีนที่คล้ายคลึงกันพื้นเมืองที่เกี่ยวข้องในการ PHB
สังเคราะห์ inSynechocystis, โครงสร้างของพลาสมิดที่ถูกสร้างขึ้น.
2.1 กิโลไบต์ของ phaA พื้นเมืองและ phaB operon (phaAB ภาค Chr:
1,437,373-1,439,426) และ 2.2 กิโลไบต์พื้นเมืองและท่าแพ phaC operon
(phaEC ภาค Chr: 932,071-934,294) ของไซยาโนแบคทีเรีย SP PCC
(. Kaneko, et al, 1996) 6803 ถูกขยายโดยวิธี PCR กับไพรเมอร์โดยเฉพาะ
คู่ของ phaAB_F: 5 'TAGAGATCTAGAGTTAATGGCCGCC
CATCC-3' และ phaAB_R: 5 'TAGAGACTGCAGACTAGTGTACCG
CAAAAGTTAGG-3', phaEC_F: 5 'TAGAGAACTAGTATG GAATCGA
CAAATAAAACCTGGA-3' และ phaEC_R: 5 'TAGAGACTGCAGT
. CACTGTCGTTCCGATA-3' สำหรับ phaAB และ phaEC ยีนตามลำดับ
ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกผูกเข้าสู่ pEERM โคลนเวกเตอร์
(. Englund et al, 2015) ที่ XbaI และ Spei เว็บไซต์เพื่อสร้าง
pEERM_phaAB พลาสมิดและ Spei และ PstI เว็บไซต์ในการสร้าง
pEERM_phaEC พลาสมิด นอกจากนี้ในส่วน phaEC ถูก
ย่อยและแทรกเข้าไปใน pEERM_phaAB ที่ Spei และ PstI เว็บไซต์เพื่อ
สร้าง pEERM_phaABEC พลาสมิด pEERM บรรจุ
ต้านทาน chloramphenicol เทปและภาคขนาบของ
psbA2 ใช้สำหรับการแนะนำการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องเข้าไปในยีน psbA2
และจึงเปลี่ยน psbA2 พื้นเมืองผ่านคล้ายคลึงคู่
รวมตัวกัน (ตารางที่ 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การสร้างพลาสมิดการเปรียบเทียบการแสดงออกของยีนที่เกี่ยวข้องใน PHB พื้นเมืองใน insynechocystis โครงสร้างของพลาสมิดที่ถูกสร้างขึ้น .การ 2.1-kb ผาพื้นเมืองและโอเปอรอน ( ภาพ phaab Chr : ภูมิภาค1437373 – 1439426 ) และ 2.2-kb แพ phac พื้นเมืองและโอเปอรอน( phaec ภูมิภาค , Chr : 932071 – 934294 synechocystis sp . ) หรือ6803 ( คาเนโกะ et al . , 1996 ) โดยขยาย PCR ไพรเมอร์ที่จำเพาะกับคู่ของ phaab_f : 5 " tagagatctagagttaatggccgcccatcc-3 " และ 5 " tagagactgcagactagtgtaccg phaab_r :caaaagttagg-3 " , 5 " tagagaactagtatg gaatcga phaec_f :caaataaaacctgga-3 " และ 5 " tagagactgcagt phaec_r :cactgtcgttccgata-3 " และ phaab phaec ยีนตามลำดับผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกผูกลงในโคลน peerm เวกเตอร์( งลันด์ et al . , 2015 ) และเพื่อสร้าง xbai spei เว็บไซต์peerm_phaab พลาสมิดและ spei โคลนและเว็บไซต์เพื่อสร้างpeerm_phaec พลาสมิด นอกจากนี้ phaec เบสคือเข้าใจ และแทรกลงในเว็บไซต์และ peerm_phaab spei โคลนสร้าง peerm_phaabec . การ peerm ) ประกอบด้วยเทปและ flanking region ของความต้านทานคลอแรมเฟนิคอลpsba2 ใช้เพื่อแนะนำตัวใน psba2 ยีนแต่ละยีนและจึงเปลี่ยน psba2 พื้นเมืองผ่านคู่โฮโมโลกัสการ ( ตารางที่ 1 )