Spot-on-lawn (halo) assay for scree

Spot-on-lawn (halo) assay for screening enrichment cultures and
isolates for viruses—This protocol is based on Schleper et al.
(1992) as modified by Stedman et al. (2003). Gelrite plates are
preincubated ca. 10 min at 80°C to dry, then 10 mL of Sulfolobus
medium with ca. 0.2 % (w/v) Gelrite is boiled to dissolve
the Gelrite. This “softlayer” is allowed to cool slightly (to
ca. 80°C). Approximately 3 mL of softlayer are added to ca. 0.2
mL of exponentially growing host cells, generally Sulfolobus solfataricus,
and spread on a plate by swirling. After the Gelrite
solidifies, 1–2 μL of culture or supernatant to be screened is
spotted on the plate. For a positive control, 1 μL of a 0.01%
(v/v) Triton X-100 solution is spotted. Plates are incubated as
above for 2–3 d and plates examined for clearing around spots

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Spot-on-สนามหญ้า (halo) วิเคราะห์คัดกรองวัฒนธรรมโดดเด่น และไวรัสที่แยกได้ – โพรโทคอลนี้อยู่ใน Schleper et al(1992) แก้ไขโดย Stedman และ al. (2003) แผ่น Gelrite มีpreincubated ca. 10 นาทีที่ 80° C แห้ง Sulfolobus แล้ว 10 mLปานกลางกับ ca 0.2% (w/v) Gelrite มีต้มให้ละลายGelrite "Softlayer" นี้ได้รับการอนุญาตให้เย็นเล็กน้อย (เพื่อca. 80 ° C) ประมาณ 3 mL ของ softlayer จะเพิ่มให้ ca 0.2mL ของเซลล์โฮสต์ โดยทั่วไป Sulfolobus solfataricus การเจริญเติบโตขยายตัวอย่างมากและกระจายตัวบนจาน โดยการหมุนรอบ หลังจาก Gelritesolidifies, 1 – 2 เป็น μL ของ supernatant จะมีฉายหรือวัฒนธรรมด่างในจาน สำหรับตัวควบคุมบวก μL 1 0.01% การ(v/v) ไตรตั้น X 100 โซลูชันเป็นด่าง แผ่นที่ incubated เป็นข้างต้นสำหรับ 2 – 3 d และแผ่นตรวจสอบสำหรับการหักบัญชีรอบจุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

จุดบนสนามหญ้า (รัศมี) ในการตรวจวัฒนธรรมการเพิ่มคุณค่าการตรวจคัดกรองและ
แยกสำหรับไวรัสโปรโตคอลนี้จะขึ้นอยู่กับ Schleper et al.
(1992) ในขณะที่การแก้ไขโดยสเตดแมนและคณะ (2003) แผ่น Gelrite มี
preincubated แคลิฟอร์เนีย 10 นาทีที่ 80 ° C ถึงแห้งแล้ว 10 มลของ Sulfolobus
กลางแคลิฟอร์เนีย 0.2% (w / v) Gelrite ต้มให้ละลาย
Gelrite นี้ "SOFTLAYER" ที่ได้รับอนุญาตให้เย็นเล็กน้อย (เพื่อ
แคลิฟอร์เนีย 80 ° C) ประมาณ 3 มิลลิลิตร SOFTLAYER มีการเพิ่มแคลิฟอร์เนีย 0.2
มิลลิลิตรชี้แจงการเจริญเติบโตของเซลล์โฮสต์ทั่วไป Sulfolobus solfataricus,
และการแพร่กระจายบนจานโดยการหมุน หลังจาก Gelrite
แข็งตัว 1-2 ไมโครลิตรของวัฒนธรรมหรือสารละลายที่จะได้รับการคัดเลือกจะได้
เห็นบนแผ่น สำหรับการควบคุมบวก 1 ไมโครลิตรของ 0.01%
(v / v) Triton X-100 เป็นด่างแก้ปัญหา แผ่นจะฟักเป็น
ข้างต้นสำหรับ 2-3 งและแผ่นตรวจสอบสำหรับการล้างรอบจุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จุดบนสนามหญ้า ( รัศมี ) การทดสอบการคัดกรองเสริมวัฒนธรรมและ
สายพันธุ์ไวรัสพิธีสารนี้จะขึ้นอยู่กับ schleper et al .
( 1992 ) แก้ไขโดย สเต็ดแมน และคณะ ( 2003 ) gelrite จาน
preincubated ประมาณ 10 นาทีที่ 80 ° C แห้ง แล้ว 10 มิลลิลิตร sulfolobus
ขนาดกลางประมาณ 0.2% ( w / v ) gelrite ต้มให้ละลาย
gelrite . " softlayer " ได้รับอนุญาตให้เย็นเล็กน้อย (
. 80 ° C )ประมาณ 3 มล. ของ softlayer จะเพิ่มประมาณ 0.2 มิลลิลิตร ชี้แจงการเติบโตของเซลล์โฮสต์

sulfolobus solfataricus , โดยทั่วไป , และการแพร่กระจายบนจานโดยการหมุน . หลังจาก gelrite
รวมตัวกัน 1 – 2 μ L ของวัฒนธรรมหรือสูงจะคัดเป็น
ด่างบนจาน สำหรับการควบคุมบวก 1 μ L ของ 0.01 %
( v / v ) Triton X-100 สารละลายเป็นด่าง แผ่น ) เป็น
ข้างบน 2 – 3 D และแผ่นตรวจสอบสำหรับการล้างรอบจุด