2.4. Enzyme activity analysis2.4.1.

2.4. Enzyme activity analysis
2.4.1. Fructose-1,6-bisphosphatase activities
To measure the activity of fructose-1.6-bisphosphatase (FBPase; EC
3.1.3.11), a frozen sample of soft bodywas homogenized (dilution 1/10)
in ice-cold buffer (85 mM imidazole-HCl, pH 7.7, 5 mM MgCl2,0.5mM
NADP, 12 mM 2-mercaptoethanol, 0.05 mM fructose-1,6-bisphosphate,
2.5 U ml
−12.4.3. 6-phosphofructokinase activities
Formeasurement of 6-phosphofrutokinase (PFK; EC 2.7.1.11) activity,
a frozen sample of soft body was homogenized (dilution 1/10) in ice-
cold buffer (100 mM Tris–HCl, pH 8.25, 5 mM MgCl2, 50 mM KCl,
0.15 mM ammonium sulfate, 4 mM 2-mercaptoethanol, 10 mM fruc-
tose-6-phosphate, 30 mMglucose-6-phosphate, 0.675 Uml
−1
aldolase,
5Uml
−1
triose phosphate isomerase, 2 U ml
−1
glycerol 3-phosphate
dehydrogenase). The homogenate was centrifuged at 20,000×g for
30min at 4 °C with the assay performed as previously described (Foste
and Moon, 1985; Bonamusa et al., 1992) using a Boi-Tek µ-Quart
Microplate Spectrophotometer.
All enzyme activities were expressed per mg of total protein
(specific activity). The total protein content in crude extracts was
determined at 30 °C using bovine serum albumin as a standard based
on the method of Bradford (1976). One unit of enzyme activity was
defined as the amount of NADH or NADPH generated by per mg
protein per minute at 30 °C.
phosphate glucose isomerase, 0.48 U ml
−1
G6PDH). The
homogenate was centrifuged at 20,000×g for 30 min at 4 °C (Metón
et al.,1999, 2003). Enzyme assaywas performed as previously described
(Foste and Moon, 1985; Bonamusa et al., 1992) using a Boi-Tek µ-Quart
Microplate Spectrophotometer.
2.4.2. Glucose-6-phosphate dehydrogenase activities
To analyze the glucose-6-phosphate dehydrogenase activity
(G6PD; EC 1.1.1.49), a frozen sample of soft body was homogenized
(dilution 1/10) in ice-cold buffer (8 mM imidazole-HCl, pH 7.7, 5 mM
MgCl2, 1 mM NADP and 1 mM glucose-6-phosphate). The homoge-
nate was centrifuged at 20,000×g for 30 min at 4 °C (Metón et al.,
1999, 2003). The assay was performed as previously described (Foste
and Moon, 1985; Bonamusa et al., 1992) using a Boi-Tek µ-Quart
Microplate Spectrophotometer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. Enzyme activity analysis2.4.1. Fructose-1,6-bisphosphatase activitiesTo measure the activity of fructose-1.6-bisphosphatase (FBPase; EC3.1.3.11), a frozen sample of soft bodywas homogenized (dilution 1/10)in ice-cold buffer (85 mM imidazole-HCl, pH 7.7, 5 mM MgCl2,0.5mMNADP, 12 mM 2-mercaptoethanol, 0.05 mM fructose-1,6-bisphosphate,2.5 U ml−12.4.3. 6-phosphofructokinase activitiesFormeasurement of 6-phosphofrutokinase (PFK; EC 2.7.1.11) activity,a frozen sample of soft body was homogenized (dilution 1/10) in ice-cold buffer (100 mM Tris–HCl, pH 8.25, 5 mM MgCl2, 50 mM KCl,0.15 mM ammonium sulfate, 4 mM 2-mercaptoethanol, 10 mM fruc-tose-6-phosphate, 30 mMglucose-6-phosphate, 0.675 Uml−1aldolase,5Uml−1triose phosphate isomerase, 2 U ml−1glycerol 3-phosphatedehydrogenase). The homogenate was centrifuged at 20,000×g for30min at 4 °C with the assay performed as previously described (Fosteand Moon, 1985; Bonamusa et al., 1992) using a Boi-Tek µ-QuartMicroplate Spectrophotometer.All enzyme activities were expressed per mg of total protein(specific activity). The total protein content in crude extracts wasdetermined at 30 °C using bovine serum albumin as a standard basedon the method of Bradford (1976). One unit of enzyme activity wasdefined as the amount of NADH or NADPH generated by per mgprotein per minute at 30 °C.phosphate glucose isomerase, 0.48 U ml−1G6PDH). Thehomogenate ถูก centrifuged ที่ 20, 000 ซื้อ g ใน 30 นาทีที่ 4 ° C (Metónร้อยเอ็ด al., 1999, 2003) เอนไซม์ assaywas ทำอธิบายไว้ก่อนหน้านี้(Foste และมูน 1985 Bonamusa et al., 1992) โดยใช้เขต Boi-Tek ควอร์ตเครื่องทดสอบกรดด่าง Microplate2.4.2 กิจกรรมที่กลูโคส-6-ฟอสเฟต dehydrogenaseการวิเคราะห์กิจกรรม dehydrogenase กลูโคส-6-ฟอสเฟต(G6PD EC 1.1.1.49), ตัวอย่างตัวอ่อนแช่แข็งถูก homogenized เป็นกลุ่ม(เจือจาง 1/10) ในบัฟเฟอร์ฉ่ำ (8 มม.อิมิดาโซล-HCl, pH 7.7, 5 มม.MgCl2, NADP 1 มม.และ 1 มม.กลูโคส-6-ฟอสเฟต) Homoge-เนตรมี centrifuged ที่ 20, 000 ซื้อ g ใน 30 นาทีที่ 4 ° C (Metón et al.,1999, 2003) ทำการทดสอบที่เป็นการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Fosteและดวง จันทร์ 1985 Bonamusa et al., 1992) โดยใช้เขต Boi-Tek ควอร์ตเครื่องทดสอบกรดด่าง Microplate

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 การวิเคราะห์กิจกรรมของเอนไซม์
2.4.1 กิจกรรมฟรักโทส-1,6-bisphosphatase
การวัดกิจกรรมของฟรุกโตส-1.6 bisphosphatase (FBPase; EC
3.1.3.11) เป็นตัวอย่างของการแช่แข็ง bodywas นุ่มปั่น (เจือจาง 1/10)
ในบัฟเฟอร์เย็น (85 มิลลิ imidazole- HCl, pH 7.7, 5 มิลลิ MgCl2,0.5mM
NADP 12 มิลลิ 2 mercaptoethanol, 0.05 มิลลิฟรุกโตส-1,6-bisphosphate,
2.5 U
มล. -12.4.3 กิจกรรม 6 phosphofructokinase
Formeasurement 6 phosphofrutokinase (PFK; EC 2.7.1.11)
กิจกรรมตัวอย่างแช่แข็งของตัวอ่อนได้รับการปั่น(เจือจาง 1/10) ในน้ำแข็งบัฟเฟอร์เย็น (100 มิลลิ Tris-HCl, pH 8.25, 5 มิลลิ MgCl2 50 มิลลิ KCl, 0.15 มิลลิแอมโมเนียมซัลเฟต 4 มิลลิ 2-mercaptoethanol 10 มิลลิ fruc- Tose-6-ฟอสเฟต 30 mMglucose-6-ฟอสเฟต 0.675 UML -1 aldolase, 5Uml -1 isomerase triose ฟอสเฟต 2 U มล. -1 กลีเซอรอล 3 ฟอสเฟตdehydrogenase). homogenate ที่ได้รับการหมุนเหวี่ยง 20,000 ×กรัมสำหรับ30 นาทีที่ 4 ° C ที่มีการทดสอบการดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Foste และดวงจันทร์, 1985. Bonamusa et al, 1992) โดยใช้บีโอไอเต็กμ-Quart. ไมโคร Spectrophotometer เอนไซม์ทั้งหมดถูกแสดงต่อมิลลิกรัม โปรตีนรวม(กิจกรรมค speci FI) ปริมาณโปรตีนรวมในสารสกัดหยาบที่ถูกกำหนดวันที่ 30 องศาเซลเซียสโดยใช้ซีรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐานตามวิธีการของแบรดฟอ(1976) หนึ่งหน่วยของเอนไซม์เป็นนิยามเป็นปริมาณของ NADH หรือ NADPH ที่สร้างขึ้นโดยต่อมก. โปรตีนต่อนาทีที่ 30 ° C. isomerase กลูโคสฟอสเฟต 0.48 U มล. -1 G6PDH) homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 20,000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C (Meton et al., 1999, 2003) เอนไซม์ assaywas ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้า(Foste และดวงจันทร์, 1985. Bonamusa et al, 1992) โดยใช้บีโอไอเต็กμ-Quart ไมโคร Spectrophotometer. 2.4.2 กิจกรรม dehydrogenase กลูโคส -6- ฟอสเฟตเพื่อวิเคราะห์กิจกรรมdehydrogenase กลูโคส -6- ฟอสเฟต(G6PD; EC 1.1.1.49) ตัวอย่างแช่แข็งของตัวอ่อนได้รับการปั่น(เจือจาง 1/10) ในบัฟเฟอร์เย็น (8 มิลลิ imidazole- HCl, pH 7.7, 5 มิลลิMgCl2 1 มิลลิ NADP 1 มิลลิกลูโคส -6- ฟอสเฟต) ลักษณะเหมือนกันเนทได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 20,000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C (Meton et al., 1999, 2003) ผลการวิเคราะห์ที่ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Foste และดวงจันทร์, 1985. Bonamusa et al, 1992) โดยใช้บีโอไอเต็กμ-Quart ไมโคร Spectrophotometer

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . การวิเคราะห์กิจกรรมของเอนไซม์
เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . fructose-1,6-bisphosphatase กิจกรรม
วัดกิจกรรมของ fructose-1.6-bisphosphatase ( fbpase ; EC
3.1.3.11 ) แช่แข็งตัวอย่าง bodywas นุ่มบด ( เจือจาง 1 / 10 )
น้ำแข็งในบัฟเฟอร์เย็น ( 85 มม. อิมิดาโซลกรดไฮโดรคลอริก pH 7.7 , 5 มม. mgcl2,0.5mm
nadp 12 mm อย่างเดียว , 0.05 มม. fructose-1,6-bisphosphate
U
− , 2.5 มล. 12.4.3 . 6-phosphofructokinase กิจกรรม
formeasurement ของ 6-phosphofrutokinase ( PFK ; EC 2.7.1.11 ) กิจกรรม
แช่แข็งตัวอย่างเนื้อนุ่มถูกบด ( เจือจาง 1 / 10 ) ในน้ำแข็ง -
หนาวบัฟเฟอร์ ( 100 มม. นอกจากนี้ –กรดไฮโดรคลอริก pH 8.25 , 5 มม. ชุด 50 มม. KCl
0.15 มิลลิเมตร แอมโมเนียม ซัลเฟต , 4 มม. อย่างเดียว fruc - 10 มม.
tose-6-phosphate 30 mmglucose-6-phosphate สอดคล้องกัน UML

− 1 , − 1 5uml ลโดเลส
,

ไตรโอสฟอสเฟตไอโซเมอเรส 2 u +
− 1 3-phosphate

รอลเนส ) โดยแยกเป็นระดับที่ 20 , 000 × g
30 นาทีที่ 4 ° C ( ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( foste
และดวงจันทร์ , 1985 ; bonamusa et al . , 1992 ) โดยใช้เทคµบีโอไอ - วอร์

กิจกรรมพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยวัสดุ เอนไซม์ทั้งหมดถูกแสดงออกต่อมิลลิกรัมโปรตีนรวม ( กาจึง C
กิจกรรม ) ปริมาณโปรตีนทั้งหมดในสารสกัดถูก
ที่กำหนด 30 องศา C โดยใช้อัลบูมินเป็นมาตรฐานที่ใช้ในวิธีการของ Bradford
( 1976 ) หนึ่งหน่วยของเอนไซม์คือ
de จึงเน็ดเป็นยอดเงินของการสร้างโปรตีนหรือ nadph ต่อลิตรต่อนาทีที่ 30 ° C .

ฟอสเฟตกลูโคสไอโซเมอเรส , 0.48 มล.
U
g6pdh − 1 )
แยกเป็นระดับที่ 20 , 000 × G สำหรับ 30 นาทีที่ 4 ° C ( เจอเลออง
et al . , 1999 , 2003 )เอนไซม์ assaywas ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้
( foste และดวงจันทร์ , 1985 ; bonamusa et al . , 1992 ) โดยใช้เทคµบีโอไอ - Quart เครื่องพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย
.
2.4.2 . กิจกรรมดี glucose-6-phosphate
วิเคราะห์ glucose-6-phosphate dehydrogenase กิจกรรม
( G6PD ; EC 1.1.1.49 ) แช่แข็งตัวอย่างเนื้อนุ่มถูกบด
( ( 1 / 10 ) ในบัฟเฟอร์น้ำแข็งเย็น ( 8 มม. อิมิดาโซลกรดไฮโดรคลอริก pH 7.7 ,
5 มม.ชุด nadp , 1 มม. และ 1 มิลลิเมตร glucose-6-phosphate ) การ homoge -
เนทที่ระดับที่ 20 , 000 × G สำหรับ 30 นาทีที่ 4 ° C ( เจอเลออง et al . ,
1999 , 2003 ) ( กำลังดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( foste
และดวงจันทร์ , 1985 ; bonamusa et al . , 1992 ) โดยใช้เทคµบีโอไอ - Quart
พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทยวัสดุ