An overnight culture of S. cerevisi

An overnight culture of S. cerevisiae was diluted 1:20 into 250 mL of fresh media and incubated for 3 h. The culture was divided into 40 mL aliquots and dosed with various concentrations of DCOIT or with other isothiazolones. After a 30 min incubation, viable counts were determined by the most probable number (MPN) method in media containing 500 mg kg sodium thioglycollate. 40 mL of the sample was centrifuged at 5 000 revolutions per minute for 5 min and resuspended in ice-cold media supplemented with 500 mg kg sodium thioglycollate. The samples were washed twice by centrifugation, each time being resuspended in 10 mL of ice-cold suppiemented media. After the final wash, cell pellets were resuspended in 1 mL of ice-cold 10% trichloroacetic acid and incubated on ice for 30 min. At this time, the samples were centrifuged at 14 000 revolutions per minute in a microcentrifuge for 2 min. The supernatant was decanted and saved. The pellet was resuspended in 1 mL of 0.4 M Tris-EDTA (pH 8.9). Samples (200 HL) of both the acid soluble extract and insoluble material were added to 1 mL of Tris-EDTA buffer, then 20 HL of dithiobisnitrobenzoic acid (DTNB)/methanol (99 mg/25 mL solution was added. After 5 min incubation of this mixture, the absorbance at 412 nm was measured. Thiol concentrations in the samples were determined from a linear equation derived from a standard curve of glutathione spiked into both the acid soluble and insoluble material samples. Acid soluble and insoluble thiols were determined using Ellman's reagent (dithiobisni-trobenzoic acid, DTNB) to react with available thiol.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัฒนธรรมการคืนของ S. cerevisiae เป็นเจือจาง 1:20 เป็นสื่อสด 250 mL และรับการกก 3 ชม วัฒนธรรมแบ่งออกเป็น 40 มล. aliquots และยา กับความเข้มข้นต่าง ๆ ของ DCOIT หรือ isothiazolones อื่น ๆ หลังจากบ่มใน 30 นาที นับได้ดำเนินการ โดยวิธี (MPN) เลขสุดน่าเป็นสื่อที่ประกอบด้วย 500 มก.กก.โซเดียม thioglycollate 40 มล.ของตัวอย่างผลิตภัณฑ์ที่ 5 000 รอบต่อนาที 5 นาที และ resuspended ในฉ่ำสื่อเสริม ด้วย 500 มก.กก.โซเดียม thioglycollate ตัวอย่างถูกล้างสองครั้ง โดยแต่ละครั้งที่ถูก resuspended 10 ml ของสื่อ suppiemented ฉ่ำ หมุนเหวี่ยง หลังจากการล้างขั้นสุดท้าย เซลล์ขี้ resuspended ใน 1 มิลลิลิตรของกรด trichloroacetic 10% ฉ่ำ และรับการกกบนน้ำแข็ง 30 นาที ตอนนี้ ตัวอย่างได้จากที่รอบ 14 000 ต่อนาทีในแบบไมโครสำหรับ 2 นาที Supernatant การดีแคนติ้ง และบันทึก เม็ดถูก resuspended ใน 1 มิลลิลิตรของ 0.4 M ทริ-EDTA (pH 8.9) ตัวอย่าง (200 HL) สารสกัดกรดละลายและไม่ละลายน้ำวัสดุเพิ่ม 1 มล.ของทริสเรทติ้ง EDTA บัฟเฟอร์ แล้ว 20 HL dithiobisnitrobenzoic กรด (DTNB) / เมทานอล (ถูกโซลูชัน 99 มิลลิกรัม/25 mL หลังจาก 5 นาทีบ่มผสมนี้ ค่าที่ 412 nm โดยวัด Thiol ความเข้มข้นในตัวอย่างถูกกำหนดจากสมการเชิงเส้นที่มาจากเส้นโค้งมาตรฐานของกลูตาไธโอนที่ได้ถูกแทงเข้าทั้งสองตัวกรดละลายน้ำ และไม่ละลายน้ำวัสดุอย่าง Thiols ละลาย และไม่ละลายน้ำกรดถูกใช้รีเอเจนต์ของ Ellman (กรด dithiobisni-trobenzoic, DTNB) ทำปฏิกิริยากับมี thiol

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของ S. cerevisiae ถูกเจือจาง 01:20 เข้า 250 มิลลิลิตรของสื่อสดและบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมง วัฒนธรรมแบ่งออกเป็น 40 มล aliquots และยาที่มีความเข้มข้นต่างๆของ DCOIT หรือ isothiazolones อื่น ๆ หลังจากบ่ม 30 นาทีนับทำงานได้ถูกกำหนดโดยจำนวนน่าจะเป็นที่สุด (MPN) วิธีการในสื่อที่มี 500 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมโซเดียม Thioglycollat​​e 40 มลของกลุ่มตัวอย่างได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 5 000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 5 นาทีและ resuspended ในสื่อเย็นเสริมด้วย 500 มิลลิกรัมโซเดียม Thioglycollat​​e กก. กลุ่มตัวอย่างถูกล้างครั้งที่สองโดยการหมุนเหวี่ยงทุกครั้งที่ถูก resuspended ใน 10 มิลลิลิตรของสื่อ suppiemented เย็น หลังจากที่ซักสุดท้ายเม็ดเซลล์ถูก resuspended ใน 1 มิลลิลิตร 10% กรดไตรคลอโรเย็นและบ่มบนน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาที ในเวลานี้กลุ่มตัวอย่างถูกหมุนเหวี่ยงที่ 14 000 รอบต่อนาทีในไมโครสำหรับ 2 นาที ใสถูก decanted และบันทึก เม็ดถูก resuspended ใน 1 มิลลิลิตร 0.4 M Tris-EDTA (pH 8.9) ตัวอย่าง (200 HL) ของทั้งกรดสารสกัดที่ละลายน้ำได้และวัสดุที่ไม่ละลายน้ำถูกเพิ่มเข้าไปใน 1 มิลลิลิตรของ Tris-EDTA บัฟเฟอร์แล้ว 20 HL ของกรด dithiobisnitrobenzoic (DTNB) / เมทานอล (99 มก. / 25 การแก้ปัญหามิลลิลิตรเพิ่ม. หลังจาก 5 นาทีบ่ม ส่วนผสมนี้การดูดกลืนแสงที่ 412 นาโนเมตรวัด. ความเข้มข้น Thiol ในตัวอย่างได้รับการพิจารณาจากสมการเชิงเส้นที่ได้มาจากเส้นโค้งมาตรฐานของกลูตาไธโอนถูกแทงทั้งกรดตัวอย่างละลายน้ำและวัสดุที่ไม่ละลายน้ำ. กรด thiols ที่ละลายน้ำและไม่ละลายน้ำได้รับการพิจารณาโดยใช้ Ellman ของ น้ำยา (dithiobisni-trobenzoic กรด DTNB) เพื่อทำปฏิกิริยากับ thiol ใช้ได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนของ S . cerevisiae เจือจาง 1 : 20 เป็นสื่อสด 250 มิลลิลิตรและบ่มเป็นเวลา 3 ชั่วโมง วัฒนธรรมแบ่งออกเป็น 40 ml เฉยๆและ dosed ที่มีความเข้มข้นต่าง ๆ ของ dcoit หรือ isothiazolones อื่น ๆ หลังจาก 30 นาทีระยะเวลาได้นับถูกกำหนดโดยตัวเลขที่น่าจะเป็น ( MPN ) ในสื่อที่มี 500 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมโซเดียม thioglycollate . 40 มิลลิลิตร จำนวนระดับที่ 5 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 5 นาที และ resuspended ในสื่อเย็น 500 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมอาหารที่มีโซเดียม thioglycollate . ทำการล้างสองครั้งโดยการเหวี่ยงแยก แต่ละครั้งที่ถูก resuspended 10 ml เย็น suppiemented สื่อ หลังจากล้างสุดท้าย เซลล์เม็ด resuspended ใน 1 มิลลิลิตร ) เย็น 10 % กรดไตรคลอโรอะซิติก และ บ่มในน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาที ในช่วงเวลานี้ ตัวอย่าง ( ระดับที่ 14 000 รอบต่อนาทีในไมโครเซนตริฟิวจ์ 2 นาที และน่านคือรินและบันทึก เม็ดเป็น resuspended ใน 1 มิลลิลิตร หรือ 0.4 M EDTA pH 8.0 ) ตัวอย่าง ( 200 HL ) ของทั้งกรดและวัสดุที่ไม่ละลายน้ำที่สกัดได้เพิ่ม 1 มิลลิลิตร ซึ่ง EDTA บัฟเฟอร์แล้ว 20 HL ของ dithiobisnitrobenzoic acid ( dtnb ) เมทานอล ( 99 มิลลิกรัม / 25 ml ในสารละลายเพิ่ม หลังจาก 5 นาทีบ่มส่วนผสมนี้ , การดูดกลืนแสงที่ 412 นาโนเมตรคือวัด ขนาดความเข้มข้นในตัวอย่างจากสมการที่ได้จากกราฟมาตรฐานของกลูตาไธโอนถูกแทง เป็นทั้งกรดและละลายไม่ละลายตัวอย่างวัสดุ ไม่ละลายในกรดและละลาย thiols ตัดสินใจใช้เอลเมิ่นเป็นรีเอเจนต์ ( dithiobisni trobenzoic กรด dtnb ) โต้กลับพร้อมขนาด .