sequences of the target organisms.

sequences of the target organisms. Further, their specificity
was thoroughly tested by both simplex PCR and multiplex
PCR, demonstrating their suitability for detecting
these five major pathogens.
For a multiplex PCR assay to be successful, the relative
concentrations of primers, PCR buffer concentration, the
balance between magnesium and DNA, cycling temperatures,
amounts of template DNA and Taq DNA polymerase
are very important (Markoulatos et al. 2002). In this
study, to develop an efficient multiplex PCR, reaction
conditions (Mg2+ concentration, concentration of primers
and annealing temperature) were optimized. The multiplex
PCR developed in this study yielded five bands
showing the specificity for each pathogen, thus confirming
the specificity of the five sets of primers.
A potential advantage of PCR is that it has a high level of
sensitivity. In this study, the sensitivity evaluation between
simplex PCR and multiplex PCR assay was performed. The
detection limit of simplex PCR was relatively lower than
that of multiplex PCR. However, the experiments still supported
the facts that the DNA extraction method could
successfully isolate DNA from PCR inhibitory components,
and the multiplex PCR assay developed in this study was
effective for the detection of target pathogens. Hereby, our
results demonstrated that amplification of the five sets of
primers was efficient with five clear bands.
During the naturally contaminated meat sample assays,
some of the multiplex PCR bands gave weak signals. We
applied simplex PCR to re-amplify the samples and
reconfirm the result. Results observed with multiplex PCR
and traditional cultures were highly consistent with the
exception of two samples. Beef sample number four gave
a positive result for L. monocytogenes by the traditional
culture method but was negative in the PCR method.
Analysis of the result may be that other Listeria species
like L. innocua, which is a nonpathogen and lacks the
hlyA gene, can also grow on the PALCAM agar as
L. monocytogenes. The suspicious colonies of Listeria further
detected by using PCR did not contain the hlyA
gene. Hence, the positive result by traditional culture
method should be combined with PCR methods to further
identify L. monocytogenes. Chicken sample number
two gave a positive result for Sh. flexneri by the PCR
method, but a negative result by the culture method. A
230-kb virulence-associated invasion plasmid, required for
entry into host cells, involving a cluster of genes, appears
in Shigella and enteroinvasive E. coli (EIEC) strains (Lan
et al. 2003; Vu et al. 2004; Hien et al. 2008). Consequently,
further investigation should be carried out with
respect to the potential virulence factors co-existing in
several species.
Taken together, this study reported a rapid multiplex
PCR assay using five primers sets for detection of multiple

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ลำดับของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย เพิ่มเติมที่เฉพาะเจาะจงของพวกเขา
ถูกทดสอบอย่างละเอียดโดยทั้งสอง pcr เริมและ multiplex PCR
แสดงให้เห็นถึงความเหมาะสมของพวกเขาสำหรับการตรวจสอบเหล่านี้ห้า
เชื้อโรคที่สำคัญ.
การทดสอบ pcr multiplex จะประสบความสำเร็จญาติ
ความเข้มข้นของไพรเมอร์ความเข้มข้นของบัฟเฟอร์ pcr ที่
ความสมดุลระหว่างแมกนีเซียมและ dna อุณหภูมิขี่จักรยาน
จำนวนเงินของแม่และ dna taq dna โพลิเมอร์
มีความสำคัญมาก (markoulatos et al,. 2002) ในการศึกษานี้
เพื่อพัฒนา multiplex PCR ที่มีประสิทธิภาพปฏิกิริยา
เงื่อนไข (ความเข้มข้นของ Mg2 ขณะเข้มข้นของไพรเมอร์
และอุณหภูมิการหลอม) มีการเพิ่มประสิทธิภาพ multiplex PCR
การพัฒนาในการศึกษาครั้งนี้ให้ผลห้าวง
แสดงความเฉพาะเจาะจงสำหรับแต่ละเชื้อโรคจึงยืนยัน
จำเพาะของห้าชุดของไพรเมอร์.
ประโยชน์ที่มีศักยภาพของ pcr ว่ามีระดับสูงของความไว
ในการศึกษาครั้งนี้การประเมินผลความไวระหว่าง
pcr เริมและทดสอบ pcr multiplex ได้ดำเนินการ
ขีด จำกัด ของการตรวจสอบของเริม pcr ค่อนข้างต่ำกว่า
ที่ multiplex PCR แต่การทดลองยังคงได้รับการสนับสนุน
ข้อเท็จจริงว่าวิธีการสกัดดีเอ็นเอได้
ประสบความสำเร็จในการแยกดีเอ็นเอจากองค์ประกอบยับยั้ง PCR,
และทดสอบ pcr multiplex การพัฒนาในการศึกษาครั้งนี้เป็น
ที่มีประสิทธิภาพสำหรับการตรวจสอบของเชื้อโรคเป้าหมาย ขอเรา
ผลแสดงให้เห็นว่าการขยายของห้าชุด
ไพรเมอร์มีประสิทธิภาพกับห้าวงชัดเจน.
ระหว่างการปนเปื้อนตามธรรมชาติการตรวจตัวอย่างเนื้อ
บางส่วนของวง multiplex PCR ให้สัญญาณอ่อนแอ เรา
pcr เริมประยุกต์ใหม่ขยายตัวอย่างและ
ยืนยันผล ผลพบกับ multiplex PCR
และวัฒนธรรมแบบดั้งเดิมได้อย่างสอดคล้องกับ
ยกเว้นสองตัวอย่าง ตัวอย่างเนื้อวัวเลขที่สี่ให้
ผลบวกต่อลิตร monocytogenes โดยวิธีการแบบดั้งเดิม
วัฒนธรรม แต่เป็นลบในวิธี PCR.
การวิเคราะห์ผลที่อาจเป็นไปได้ว่าสายพันธุ์อื่น ๆ Listeria
เช่นลิตรinnocua ซึ่งเป็น nonpathogen และขาด
hlya ยีนนอกจากนี้ยังสามารถเติบโตบนวุ้นอาหาร PALCAM เป็น l
monocytogenes อาณานิคมที่น่าสงสัยของ Listeria ต่อไป
ตรวจพบโดยใช้วิธี PCR ไม่ได้มี hlya
ยีน ดังนั้นผลบวกจากวัฒนธรรม
วิธีการแบบดั้งเดิมควรจะรวมกับวิธี PCR เพื่อ
ระบุลิตร monocytogenes จำนวนตัวอย่างไก่
สองให้ผลบวกสำหรับดวลจุดโทษflexneri โดยวิธี PCR
แต่ผลลบโดยวิธีการเพาะเลี้ยง
230 กิโลไบต์ความรุนแรงที่เกี่ยวข้องการบุกรุกพลาสมิด, ที่จำเป็นสำหรับการ
เข้าสู่เซลล์โฮสต์ที่เกี่ยวข้องกับกลุ่มของยีนที่ปรากฏใน
Shigella และ Enteroinvasive อี coli (eiec) สายพันธุ์ (lan
et al, 2003;.. วู et al, 2004;. Hien et al, 2008) ดังนั้น
ตรวจสอบต่อไปควรจะดำเนินการด้วย
ส่วนที่เกี่ยวกับความรุนแรงที่อาจเกิดขึ้นปัจจัยร่วมที่มีอยู่ในหลายชนิด
.
นำมารวมกันการศึกษานี้รายงาน multiplex PCR
ทดสอบอย่างรวดเร็วโดยใช้ห้าชุดไพรเมอร์สำหรับการตรวจสอบของหลาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ลำดับของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย เพิ่มเติม specificity การ
ถูกทำทดสอบ โดย PCR ทั้งมเพล็กซ์และล็ก
PCR เห็นความเหมาะสมสำหรับการตรวจสอบ
เหล่านี้ห้าหลักโรค.
สำหรับการ multiplex PCR assay จะประสบความสำเร็จ ญาติ
ความเข้มข้นของไพรเมอร์ PCR บัฟเฟอร์ความเข้มข้น
แมกนีเซียมและดีเอ็นเอ อุณหภูมิขี่จักรยาน,
จำนวนแม่แบบดีเอ็นเอและ Taq DNA พอลิเมอเรส
เป็นอย่างยิ่ง (Markoulatos et al. 2002) ใน
ศึกษา พัฒนา PCR multiplex มีประสิทธิภาพ ปฏิกิริยา
เงื่อนไข (ความเข้มข้นของ Mg2 ความเข้มข้นของไพรเมอร์
และอุณหภูมิการอบเหนียว) ถูกปรับให้เหมาะสม ล็ก
PCR พัฒนาในการศึกษานี้เต็มวง 5
แสดง specificity สำหรับแต่ละการศึกษา ยืนยันดัง
specificity ชุดห้าของไพรเมอร์
เป็นประโยชน์จากศักยภาพของ PCR ที่มีระดับสูง
ไว ในการศึกษานี้ การประเมินความไวระหว่าง
multiplex PCR และ PCR simplex โดยทำการวิเคราะห์ ใน
จำกัดตรวจ PCR ได้ค่อนข้างต่ำกว่า simplex
ที่ multiplex PCR อย่างไรก็ตาม การทดลองยังคงสนับสนุน
ข้อเท็จจริงว่า วิธีการสกัดดีเอ็นเอสามารถ
สำเร็จแยกดีเอ็นเอจากชิ้นส่วนลิปกลอสไข PCR,
และทดสอบ PCR multiplex ที่พัฒนาในการศึกษานี้
ผลตรวจโรคเป้าหมาย ขอ ของเรา
ผลแสดงที่ขยายชุดห้า
ไพรเมอร์มีประสิทธิภาพกับห้าล้างวงการ
ระหว่าง assays ตัวอย่างเนื้อสัตว์ปนเปื้อนตามธรรมชาติ,
บางวงดนตรี multiplex PCR ให้สัญญาณอ่อน เรา
ใช้ PCR simplex โดยการขยายตัวอย่าง และ
ยืนยันผลอีกด้วย ผลสังเกตด้วย multiplex PCR
วัฒนธรรมดั้งเดิมสูงสอดคล้องกับ
ยกเว้นตัวอย่างที่สอง เนื้อตัวอย่างหมายเลข 4 ให้
ผลบวกสำหรับ L. monocytogenes โดยที่ดั้งเดิม
วิธีวัฒนธรรมแต่ถูกลบใน PCR วิธี
วิเคราะห์ผลอาจจะออลิพันธุ์อื่น ๆ ที่
ชอบ L. innocua ซึ่งเป็นแบบ nonpathogen และขาดการ
hlyA ยีน สามารถขึ้นบน agar PALCAM เป็น
L. monocytogenes ได้ อาณานิคมน่าสงสัยของออลิเพิ่มเติม
ตรวจ โดยใช้ PCR ไม่ประกอบด้วย hlyA
ยีน ดังนั้น มีผลในแง่บวก โดยวัฒนธรรม
วิธีควรใช้ร่วมกับวิธี PCR ทั้ง
ระบุ L. monocytogenes หมายเลขตัวอย่างไก่
สองให้ผลบวกในดี flexneri โดย PCR
วิธี แต่ผลลบ โดยวิธีวัฒนธรรม A
plasmid บุกรุกสัมพันธ์ virulence 230 kb จำเป็นสำหรับ
ปรากฏรายการในเซลล์โฮสต์ เกี่ยวข้องกับคลัสเตอร์ของยีน
ในสายพันธุ์ E. coli (EIEC) Shigella และ enteroinvasive (Lan
et al. 2003 วู et al. 2004 จากร้อยเอ็ด al. 2008) ดังนั้น,
เพิ่มเติม ตรวจสอบควรจะดำเนินการด้วย
เคารพศักยภาพ virulence ปัจจัยร่วมที่มีอยู่ใน
หลายชนิด.
ปวง ศึกษารายงานล็กรวดเร็ว
ชุดทดสอบ PCR ที่ใช้ไพรเมอร์ 5 ตรวจหลาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ลำดับของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย. ต่อไปพวกเขาเพียงนำเสนอ
ซึ่งจะช่วยได้อย่างทั่วถึงได้รับการทดสอบโดย pcr Simplex pcr และแบบมัลติเพล็กซ์
ซึ่งจะช่วยทั้งการแสดงให้เห็นความเหมาะสมของพวกเขาในการตรวจจับ
ซึ่งจะช่วยเด็กนักเรียน 5 หลัก.
เหล่านี้สำหรับสอบ pcr แบบมัลติเพล็กซ์ที่จะประสบความสำเร็จในความเข้มข้นที่มีความสัมพันธ์กัน
primers สมาธิของบัฟเฟอร์ pcr
ซึ่งจะช่วยสร้างความสมดุลระหว่างดีเอ็นเอและแมกนีเซียมขี่จักรยาน อุณหภูมิ
จำนวนของดีเอ็นเอเทมเพลตและดีเอ็นเอ polymerase taq
มีความสำคัญเป็นอย่างมาก( markoulatos et al . 2002 )
ซึ่งจะช่วยในการศึกษานี้มี ประสิทธิภาพ ในการพัฒนาแบบมัลติเพล็กซ์ที่ pcr ปฏิกริยา
เงื่อนไข(ที่ความเข้มข้นของการรวมศูนย์มก. 2 primers
และ อุณหภูมิ annealing )ได้ปรับแต่ง แบบมัลติเพล็กซ์
pcr พัฒนาขึ้นมาในการศึกษานี้ส่งผลต่อคลื่นความถี่ 5
ซึ่งจะช่วยแสดงลักษณะเฉพาะเจาะจงสำหรับเชื้อแต่ละตัวจึงยืนยัน
Mainstream )เพียงเท่านั้นที่ห้าของ primers .
ที่มี ศักยภาพ ในการใช้ประโยชน์จาก pcr เป็นที่มีระดับสูงของ
ระดับความไว ในการศึกษานี้การประเมินผลความไวแสงระหว่างสอบ
Simplex pcr และมัลติเพล็กซ์ pcr ได้ดำเนินการ
ซึ่งจะช่วยจำกัดการตรวจจับของ pcr Simplex ก็ต่ำกว่า
pcr. แบบมัลติเพล็กซ์ที่ แต่ถึงอย่างไรก็ตามการทดลองที่ยังคงสนับสนุนความจริง
ซึ่งจะช่วยให้การขุดเจาะดีเอ็นเอว่าวิธีการที่ไม่สามารถตอบแทน
ตรวจหาดีเอ็นเอได้สำเร็จจากส่วนประกอบ inhibitory pcr
และแบบมัลติเพล็กซ์สอบ pcr พัฒนาในการศึกษานี้มี
ซึ่งจะช่วยได้อย่างมี ประสิทธิภาพ ในการตรวจจับของเด็กนักเรียนเป้าหมาย ขอ
ผลของเราแสดงให้เห็นว่าใช้การขยายเสียงของชุดที่ห้าของ
primers เป็นอย่างมี ประสิทธิภาพ พร้อมด้วยห้าคลื่นความถี่ล้าง.
ในระหว่าง assays ลิ้มลองเนื้อตามธรรมชาติเกิดการปนเปื้อนที่
คลื่นความถี่ pcr แบบมัลติเพล็กซ์บางอย่างให้สัญญาณอ่อน เรา
ตามมาตรฐานpcr Simplex นำไปใช้ในการขยายตัวอย่างและ
ยืนยันผลที่ได้. ผลการสังเกตเห็นด้วยแบบมัลติเพล็กซ์ pcr
และวัฒนธรรมแบบดั้งเดิมเป็นอย่างมากพร้อมด้วย
ข้อยกเว้นอย่างต่อเนื่องของสองตัวอย่าง เนื้อวัวตัวอย่างจำนวนสี่ให้
ซึ่งจะช่วยทำให้ผลเป็นบวก monocytogenes แอล
ซึ่งจะช่วยแบบดั้งเดิมโดยวิธีการทางวัฒนธรรมแต่เป็นลบใน pcr วิธีการ.
การวิเคราะห์ของที่ส่งผลให้อาจจะเป็นไปได้ว่าสายพันธุ์อื่นๆ listeria
เช่นแอล.innocua ซึ่งเป็น nonpathogen และขาดยีน hlya
ซึ่งจะช่วยให้สามารถเติบโตในสาหร่ายทะเล palcam monocytogenes
ซึ่งจะช่วยให้แอลยัง อาณาจักรน่าสงสัยของ listeria ต่อไป
ตรวจพบโดยการใช้ pcr ไม่มียีนที่ hlya
ดังนั้นจึงทำให้ในเชิงบวกที่วัฒนธรรมแบบดั้งเดิมโดยวิธีการ
ซึ่งจะช่วยจะนำไปรวมกับวิธีการ pcr เพื่อระบุ monocytogenes แอลต่อไป
ตัวอย่างไก่จำนวน
ซึ่งจะช่วยทำให้ส่งผลให้ทั้งสองเป็นบวกสำหรับ SHflexneri โดยใช้วิธีการ pcr
ซึ่งจะช่วยได้แต่ผลในทางลบโดยใช้วิธีการทางวัฒนธรรม.
230 - plasmid การรุกราน(โรค)มีพิษร้าย - ที่เกี่ยวข้อง KB ที่จำเป็นสำหรับการเข้าไปในเซลล์
โฮสต์เกี่ยวข้องกับกลุ่มของยีนจะปรากฏขึ้น
ใน shigella และผล enteroinvasive ( eiec )พันธุ์( LAN
et al . 2003 มิเตอร์ VU et al . 2004 hien et al . 2008 )
การสืบสวนต่อไปดังนั้นจึงเป็นสิ่งที่ควรกระทำด้วย
ตามมาตรฐานในส่วนการร้ายกาจที่มีปัจจัยร่วมที่มีอยู่หลายสายพันธุ์ใน
.
มาร่วมกันการศึกษานี้รายงานสอบ
pcr แบบมัลติเพล็กซ์อย่างรวดเร็วโดยใช้ 5 ชุด primers สำหรับการตรวจจับของหลายคน