1. IntroductionSince the early 1980

1. Introduction
Since the early 1980s, it is known that an infection with
Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) strains of
serogroup O157 is the major cause of haemorrhagic colitis
and the haemolytic–uraemic syndrome (Riley et al., 1983;
Karmali et al., 1985; Cleary, 2004). The infections frequently
have been associated with the consumption of undercooked
(minced) beef and raw milk (Tarr et al., 2005). Epidemiological
studies have shown that cattle, but also other farm animals can
excrete the bacterium with their faeces, without showing any
clinical symptoms (Moxley, 2004). In addition to (faecally
contaminated) foods, direct transmission from animal to human
can result in infection (Paton and Paton, 1998b).
To elucidate further the reservoirs of STEC O157, sensitive
methods are needed since these pathogens may be present in
food and environmental samples in only small numbers.
Furthermore, sensitive and rapid detection methods are
necessary for the food industry to ensure a safe supply of
foods. Conventional culture methods are both time-consuming
and laborious. Their sensitivity can significantly be increased by
the application of an immunoconcentration step, which will
result in less false-negatives. A commonly used method, which
is also implemented in the international standard for the
detection of E. coli O157 in food and feeding stuffs
(Anonymous, 2001), is immunomagnetic separation (IMS).
Prior to plating onto selective isolation media, E. coli O157 cells present in the enrichment culture are selectively concentrated by
magnetic beads with E. coli O157-specific antibodies covalently
bound onto their surface. The IMS procedure can be performed
both manually and automatically. Another example of immunoconcentration
is the fully automated Vitek Immunodiagnostic
Assay System (VIDAS) (bioMérieux, Marcy l'Etoile, France).
The VIDAS Immuno-Concentration E. coli O157 (ICE) kit
includes two ready-to-use components. One is a Solid Phase
Receptacle (SPR), which serves as the solid phase as well as the
pipetting device for the assay. The interior of the SPR is coated
with anti-E. coli O157 antibodies adsorbed on its surface. The
other component is a strip which contains all the wash and
release solutions. An aliquot of the enrichment culture is
manually transferred into the strip and subsequently the sample
is cycled in and out of the SPR. E. coli O157 present in the broth
will bind to the anti-E. coli O157 antibodies coating the interior
of the SPR. Unbound sample components are then washed
away. A final enzymatic step releases the captured E. coli O157
into a specific well from which they can be plated onto
selective agar.
In our laboratory, samples of animal faeces and meats had
been examined regularly for the presence of STEC O157 by
using a manual IMS procedure as well as the VIDAS ICE
system. In this study, we retrospectively evaluated the
performance of both methods. Additionally, two selective
agars used to finally isolate STEC O157 were compared.
2. Materials and methods
2.1. Samples
The following samples were examined for the presence of
STEC O157 by performing a manual IMS procedure as well as
the VIDAS ICE system: (1) faeces from farm animals that
previously tested positive and had been stored at −20 °C
(n=144), (2) rectal contents of different farm animals in
petting zoos sampled individually by rectal palpation (n=73),
(3) faecal droppings from different animals collected at
different petting zoos (n=95), (4) rectal contents of sheep
collected at the slaughterline (n=325), (5) swab samples from
sheep carcasses (n=325), and (6) different retail raw meats that
previously tested positive and had been stored at −20 °C
(n=35).
For the comparison of two selective isolation media, in
addition to the results obtained for the samples listed above,
results of another 679 samples of animal faeces were included,
which were analysed with either IMS or VIDAS ICE. These
samples, both rectal contents and droppings, had been
collected from different animals at petting zoos and cattle
farms, either in order to trace sources of human infection
(n=177) or to study the occurrence of STEC O157 in petting
zoos (n=502).
With the exception of the positive faeces and meat samples
that were kept in the freezer, all samples were fresh and the
microbiological examination had been started within 72 h after
their collection. As a rule, the carcass swabs were processed
within the day of sampling.
2.2. Selective enrichment
The samples were, if applicable after being thawed at 2
to 4 °C, diluted 10 times in modified tryptone soy broth
(Oxoid Ltd., Basingstoke, UK) supplemented with novobiocin
(20 mg l−1) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) (mTSB+n).
To the plastic stomacher bags containing the sponges used to
sample the sheep carcasses, 90 ml of mTSB without novobiocin
was added. After homogenisation (1 min) in a stomacher, the
samples were incubated at 41.5±0.5 °C for 18 to 24 h. In case of
the sheep faeces collected at slaughter, after 6 to 8 h of incubation
about 5ml of enrichment culture was taken for the purpose of the
IMS procedure. For all the other analyses overnight cultures
were used.
2.3. Immunoconcentration
2.3.1. Dynabeads anti-E. coli O157
For the IMS procedure Dynabeads anti-E. coli O157 (Dynal,
Oslo, Norway) were used and the instructions of the
manufacturer were followed.
2.3.2. VIDAS Immuno-Concentration E. coli O157
The manufacturer of the VIDAS ICE kit (bioMérieux)
prescribes a first selective enrichment of the sample in mTSB+n
(6–7 h at 41±1 °C) followed by a second selective enrichment
(1 : 10 dilution) in MacConkey broth supplemented with
cefixime (0.05 mg l−1) and tellurite (2.5 mg l−1) (18±1 h at
35–37 °C) before testing with the VIDAS ICE kit. Deviating
from this protocol, 500 μl from the overnight cultures in
mTSB+n was pipetted into the strips. This choice has been
made based upon the results of an extensive study on methods
for detection and isolation of E. coli O157, previously performed
in our laboratory (Tilburg et al., 1999).
2.4. Selective isolation and confirmation
The immunoconcentrated samples were inoculated onto two
selective isolation media: sorbitol–MacConkey agar (Oxoid)
supplemented with cefixime (0.05 mg l−1) and tellurite
(2.5 mg l−1) (Oxoid) (CT-SMAC) and CHROMagar O157 (ITK
Diagnostics BV, Uithoorn, The Netherlands) with cefixime
(0.025 mg l−1) and tellurite (1.25 mg l−1) (1/2CT-CHROM).
The agar plates were incubated for 18 to 24 h at 37 °C.
Typical colonies (colourless colonies on CT-SMAC and purple
on 1/2CT-CHROMagar), up to 12 per plate, were selected and
inoculated onto Levine's eosin methylene blue agar (Oxoid)
(L-EMB) agar and sorbitol–MacConkey agar with 4-methylumbelliferyl-
β-D-glucuronide (0.1 g l−1) (Sigma) (SMACMUG)
agar. The plates were read after 18 to 24 h of
incubation at 37 °C. Presumptive STEC O157 isolates (those
with a typical E. coli metallic sheen on L-EMB, being both
sorbitol-nonfermenting and β-glucuronidase-negative on
SMAC-MUG) were tested for agglutination with an E. coli
O157 latex test kit (Murex Biotech Ltd., Central Road, Temple
Hill, Dartford, Kent, UK). Isolates that gave a positive latex
test result were confirmed to be E. coli by using an API 20E

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1. บทนำตั้งแต่ต้นทศวรรษ 1980 เป็นที่รู้จักกันที่ติดเชื้อด้วยชิงะผลิตพิษ Escherichia coli (STEC) สายพันธุ์ของserogroup O157 เป็นสาเหตุสำคัญของ haemorrhagic colitisและกลุ่มอาการ haemolytic – uraemic (Riley และ al., 1983Karmali และ al., 1985 Cleary, 2004) ติดเชื้อบ่อยได้สัมพันธ์กับการบริโภคดิบ ๆ(สับ) เนื้อและน้ำนมดิบ (Tarr et al., 2005) ความศึกษาแสดงให้เห็นว่า วัวควาย แต่สัตว์อื่น ๆ สามารถขับถ่ายแบคทีเรียกับ faeces ของพวกเขา โดยไม่แสดงใด ๆอาการทางคลินิก (Moxley, 2004) นอก (faecallyอาหารปนเปื้อน) ส่งตรงจากสัตว์คนสามารถทำเชื้อ (Paton และ Paton, 1998b)การ elucidate เพิ่มเติมระยะสั้นของ STEC O157 สำคัญวิธีการจำเป็นเนื่องจากโรคเหล่านี้อาจอยู่ในอาหารและสิ่งแวดล้อมตัวอย่างในหมายเลขขนาดเล็กเท่านั้นนอกจากนี้ มีวิธีการตรวจสอบอย่างรวดเร็ว และมีความสำคัญจำเป็นสำหรับอุตสาหกรรมอาหารให้จัดหาปลอดภัยอาหาร วัฒนธรรมทั่วไปวิธีทั้งสองใช้เวลานานและแรงงานมาก อย่างมีนัยสำคัญจะเพิ่มความไวของพวกเขาขึ้นมีขั้นตอน immunoconcentration ซึ่งจะใช้ทำในสิ่งไม่น้อย วิธีการใช้ทั่วไป ซึ่งนอกจากนี้ยังมีการนำมาใช้ในมาตรฐานสากลสำหรับการตรวจพบ E. coli O157 ในอาหารและวัตถุดิบอาหาร(ไม่ระบุชื่อ 2001), เป็น immunomagnetic แยก (IMS)ก่อนชุบไปแยกใช้สื่อ เซลล์ E. coli O157 ในวัฒนธรรมโดดเด่นจะเลือกเข้มข้นด้วยแม่เหล็กลูกปัดกับ E. coli O157 เฉพาะแอนตี้ covalentlyผูกบนพื้นผิวของพวกเขา สามารถดำเนินการกระบวนงาน IMSด้วยตนเอง และอัตโนมัติ อีกตัวอย่างหนึ่งของ immunoconcentrationเป็น Vitek Immunodiagnostic อัตโนมัติอย่างสมบูรณ์Assay ระบบ (VIDAS) (bioMérieux, Marcy l'Etoile ฝรั่งเศส)ชุดอุปกรณ์ VIDAS Immuno สมาธิ E. coli O157 (น้ำแข็ง)มีส่วนประกอบพร้อมใช้ 2 คือเฟสของแข็งรองรับ (คอฟฟี่ช็อป/), ซึ่งเป็นเฟสของแข็งรวมทั้งอุปกรณ์ pipetting สำหรับการทดสอบ เคลือบภายในคอฟฟี่ช็อป/มีต่อต้านอี coli O157 แอนตี้ที่ adsorbed บนพื้นผิวของ ที่ส่วนประกอบอื่น ๆ เป็นแถบที่ประกอบด้วยล้างทั้งหมด และปล่อยโซลูชั่น เป็นส่วนลงตัวของวัฒนธรรมโดดเด่นเป็นโอนย้ายเป็นแถบและต่อตัวอย่างด้วยตนเองล้มออกที่ SPR. E. coli O157 ในซุปจะผูกกับอีป้องกัน แอนตี้ coli O157 เคลือบภายในของ SPR. Unbound คอมโพเนนต์ตัวอย่างมีแล้วล้างเก็บ ขั้นตอนสุดท้ายเอนไซม์ในระบบออกจับ coli E. O157เป็นการดีจากที่พวกเขาสามารถจะชุบลงบนagar เลือกในห้องปฏิบัติการของเรา มีตัวอย่างของ faeces สัตว์และเนื้อสัตว์การตรวจสอบอย่างสม่ำเสมอสำหรับของ O157 STEC โดยใช้กระบวนงาน IMS ด้วยตนเองรวมทั้งน้ำแข็ง VIDASระบบ ในการศึกษานี้ เราย้อนหลังได้ประเมินการประสิทธิภาพของทั้งสองวิธี นอกจากนี้ สองงานagars ที่ใช้สุดท้าย แยก STEC O157 ได้เปรียบเทียบ2. วัสดุและวิธีการ2.1. ตัวอย่างตัวอย่างต่อไปนี้ถูกตรวจสอบสำหรับที่อยู่ของSTEC O157 โดยดำเนินกระบวนงาน IMS ด้วยตนเองเป็นระบบน้ำแข็ง VIDAS: faeces (1) จากสัตว์ที่ก่อนหน้านี้ทดสอบค่าบวก และมีเก็บไว้ที่ −20 ° C(n = 144), (2) เนื้อหาที่ไส้ของต่าง ๆ ฟาร์มสัตว์petting กิจกรรมตัวอย่างแยก โดย palpation ไส้ (n = 73),(3) faecal มูลจากสัตว์ต่าง ๆ รวบรวมที่ทะเลสาบ petting ต่าง ๆ (n = 95), (4) เนื้อหาไส้ของแกะรวบรวมที่ slaughterline (n = 325), (5) ตัวอย่างจากการ swabซากแกะ (n = 325), และเนื้อสัตว์ดิบขายปลีกแตกต่างกัน (6) ที่ก่อนหน้านี้ทดสอบค่าบวก และมีเก็บไว้ที่ −20 ° C(n = 35)สำหรับการเปรียบเทียบสองแยกใช้สื่อ ในนี้ผลได้รับสำหรับตัวอย่างที่แสดงด้านบนอีกตัวอย่างที่ 679 ของ faeces สัตว์ถูกรวมซึ่งมี analysed กับ IMS หรือ VIDAS ICE. เหล่านี้ตัวอย่าง มูล และเนื้อหาที่เกี่ยวกับลำไส้ได้รวบรวมจากสัตว์อื่นที่มหาวิทยาลัย petting และวัวฟาร์ม สั่งการติดตามแหล่งที่มาของมนุษย์ติดเชื้ออย่างใดอย่างหนึ่ง(n = 177) หรือ การศึกษาการเกิดขึ้นของ STEC O157 ใน pettingกิจกรรม (n = 502)ยกเว้น faeces บวกและตัวอย่างเนื้อสัตว์ที่ถูกเก็บไว้ในตู้แช่ที่ ตัวอย่างทั้งหมดสดและการตรวจทางจุลชีววิทยามีการเริ่มต้น h 72 หลังคอลเลกชันของพวกเขา เป็นกฎ swabs ซากถูกประมวลผลภายในวันสุ่มตัวอย่าง2.2 การใช้บ่อตัวอย่างดี ถ้ามีหลังจากกำลัง thawed 2ถึง 4 ° C ผสม 10 ครั้งในซุปถั่วเหลือง tryptone แก้ไข(จำกัด Oxoid, Basingstoke, UK) เสริม ด้วย novobiocin(l−1 20 มิลลิกรัม) (ซิกเคมี จำกัด St. Louis, MO) (mTSB + n)ไปถุงพลาสติกแผงประดับหน้าอกประกอบด้วยฟองน้ำที่ใช้ในการตัวอย่างซากแกะ 90 ml ของ mTSB โดย novobiocinมีเพิ่ม หลังจาก homogenisation (1 นาที) ในการแผงประดับหน้าอก การตัวอย่างที่ incubated ที่ 41.5±0.5 ° C สำหรับ h 18-24 ในกรณีที่faeces แกะเก็บที่ฆ่า หลังจาก 6-8 h ของคณะทันตแพทยศาสตร์ประมาณ 5ml ของวัฒนธรรมโดดเด่นถูกนำมาเพื่อเป็นการขั้นตอน IMS สำหรับทั้งหมดอื่น ๆ วิเคราะห์นอนวัฒนธรรมใช้2.3. Immunoconcentration2.3.1. Dynabeads ต่อต้านอี coli O157สำหรับกระบวนงาน IMS Dynabeads ต่อต้านอี coli O157 (Dynalออสโล นอร์เวย์) ใช้ และคำแนะนำของผู้ผลิตก็ตาม2.3.2. VIDAS Immuno สมาธิ E. coli O157ผู้ผลิตชุดน้ำแข็ง VIDAS (bioMérieux)ได้กำหนดขอเลือกแบบแรกของตัวอย่างใน mTSB + n(6 – 7 h ที่ 41±1 ° C) ตามที่ขอเลือกสอง(1:10 เจือจาง) ในซุป MacConkey เสริมด้วยเซฟิกซิม (0.05 มิลลิกรัม l−1) และ tellurite (2.5 mg l−1) (18±1 h ที่35-37 ° C) ก่อนการทดสอบกับชุด VIDAS น้ำแข็ง ที่เบี่ยงเบนจากนี้โพรโทคอล μl 500 จากวัฒนธรรมค้างคืนในmTSB + n ถูก pipetted ในแถบนี้ ตัวเลือกนี้ได้ทำตามผลของการศึกษาอย่างละเอียดเกี่ยวกับวิธีเพื่อตรวจหาและแยกของ E. coli O157 เคยทำในการปฏิบัติของเรา (แวนทิลเบิร์ก et al., 1999)2.4 การใช้แยกและยืนยันตัวอย่าง immunoconcentrated ได้ inoculated ไปสองแยกใช้สื่อ: ซอร์บิทอล – MacConkey agar (Oxoid)เสริม ด้วยเซฟิกซิม (0.05 มิลลิกรัม l−1) และ tellurite(2.5 mg l−1) (Oxoid) (CT-SMAC) และ CHROMagar O157 (ITKการวินิจฉัย BV, Uithoorn ประเทศเนเธอร์แลนด์) กับเซฟิกซิม(0.025 mg l−1) และ tellurite (1.25 mg l−1) (1 / 2CT-CHROM)แผ่น agar มี incubated สำหรับ h 18-24 ที่ 37 องศาเซลเซียสอาณานิคมทั่วไป (สีใสอาณานิคม CT SMAC และสีม่วงใน 1/2 CT-CHROMagar), ค่าการ 12 ต่อจาน เลือก และinoculated ลงของ Levine eosin บลูเมทิลีนได agar (Oxoid)Agar (L-EMB) และซอร์บิทอล – MacConkey agar กับ 4-methylumbelliferyl -Β-D-glucuronide (0.1 g l−1) (ซิกมา) (SMACMUG)agar มีอ่านแผ่นหลัง h 18-24 ของบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส แยก presumptive STEC O157 (มีชีนโลหะทั่วไป E. coli ใน L-EMB ถูกทั้งซอร์บิทอล nonfermenting และβ-glucuronidase-ลบในSMAC-MUG) ทดสอบสำหรับ agglutination กับเป็น E. coliชุดทดสอบยาง O157 (มูเร็กซ์ไบโอเทค จำกัด กลางถนน วัดฮิลล์ ดราฟท์ฟอร์ด เคนท์ สหราชอาณาจักร) แยกที่ให้ยางบวกผลการทดสอบที่ยืนยัน E. coli โดยมี API 20E

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1.
บทนำตั้งแต่ช่วงต้นทศวรรษ1980 เป็นที่รู้จักกันว่าการติดเชื้อที่มี
Shiga สารพิษที่ผลิตเชื้อ Escherichia coli (STEC) สายพันธุ์
O157 serogroup
เป็นสาเหตุสำคัญของการตกเลือดในลำไส้ใหญ่และโรค-haemolytic uraemic (ไรลีย์, et al, 1983;.
Karmali et al, 1985;. เคลียร์, 2004)
การติดเชื้อที่พบบ่อยได้เกี่ยวข้องกับการบริโภคสุก
(สับละเอียด) เนื้อวัวและน้ำนมดิบ (Tarr et al., 2005) ระบาดวิทยาการศึกษาได้แสดงให้เห็นว่าวัว แต่ยังสัตว์เลี้ยงในฟาร์มอื่น ๆ สามารถขับถ่ายแบคทีเรียที่มีอุจจาระของพวกเขาใดๆโดยไม่แสดงอาการทางคลินิก (Moxley, 2004) นอกจากการ (faecally ปนเปื้อน) อาหารส่งตรงจากสัตว์สู่คนสามารถทำให้เกิดการติดเชื้อ(ปาตันและตัน 1998b). เพื่ออธิบายต่อไปอ่างเก็บน้ำของ STEC O157 ที่มีความละเอียดอ่อนวิธีการที่มีความจำเป็นเนื่องจากเชื้อโรคเหล่านี้อาจจะอยู่ในอาหารและสิ่งแวดล้อมตัวอย่างในจำนวนเล็ก ๆ เท่านั้น. นอกจากนี้วิธีการตรวจสอบอย่างรวดเร็วมีความสำคัญและมีความจำเป็นสำหรับอุตสาหกรรมอาหารเพื่อให้แน่ใจว่าการจัดหาความปลอดภัยของอาหาร วิธีการเพาะเลี้ยงธรรมดามีทั้งที่ใช้เวลานานและลำบาก ความไวของพวกเขาอย่างมีนัยสำคัญสามารถเพิ่มขึ้นโดยการประยุกต์ใช้ขั้นตอน immunoconcentration ซึ่งจะส่งผลในเชิงลบน้อยเท็จ วิธีการที่ใช้กันทั่วไปซึ่งจะดำเนินการยังอยู่ในมาตรฐานสากลสำหรับการตรวจหาเชื้อE. coli O157 ในอาหารและการให้อาหารวัตถุดิบ(ไม่ประสงค์ออกนาม, 2001) คือการแยก immunomagnetic (IMS). ก่อนที่จะชุบลงบนสื่อแยกคัดเลือกเชื้อ E. coli เซลล์ O157 อยู่ในวัฒนธรรมการตกแต่งที่มีความเข้มข้นการคัดเลือกโดยลูกปัดแม่เหล็กที่มีเชื้อE. coli O157 แอนติบอดีเฉพาะ covalently ผูกไว้บนพื้นผิวของพวกเขา ขั้นตอน IMS สามารถทำได้ทั้งด้วยตนเองและโดยอัตโนมัติ ตัวอย่างของ immunoconcentration อีกเป็นอัตโนมัติVitek immunodiagnostic ระบบ Assay (Vidas) (bioM? rieux ร์ซี่ l'Etoile, ฝรั่งเศส). Vidas Immuno-ความเข้มข้นของเชื้อ E. coli O157 (ICE) ชุดรวมทั้งสองส่วนพร้อมต่อการใช้งาน หนึ่งคือเฟสของแข็งReceptacle (SPR) ซึ่งทำหน้าที่เป็นของแข็งเช่นเดียวกับอุปกรณ์สำหรับการทดสอบปิเปต การตกแต่งภายในของ SPR เคลือบที่มีการป้องกัน-E coli O157 แอนติบอดีดูดซับบนพื้นผิวของมัน องค์ประกอบอื่น ๆ ที่เป็นแถบที่มีทั้งหมดล้างและการแก้ปัญหาการปล่อย aliquot ของวัฒนธรรมการตกแต่งที่มีการโอนด้วยตนเองลงในแถบและต่อมาตัวอย่างกรณืในและออกจากSPR coli O157 อีอยู่ในน้ำซุปจะผูกกับการต่อต้าน-E coli O157 แอนติบอดีเคลือบภายในของSPR ส่วนประกอบตัวอย่างหลุดแล้วจะถูกล้างออกไป ขั้นตอนสุดท้ายของเอนไซม์ออกจับ coli O157 อีเป็นที่เฉพาะเจาะจงอย่างดีจากที่พวกเขาสามารถลงชุบวุ้นเลือก. ในห้องปฏิบัติการของเราตัวอย่างอุจจาระของสัตว์และเนื้อสัตว์ที่ได้รับการตรวจสอบเป็นประจำสำหรับการปรากฏตัวของ STEC O157 โดยใช้คู่มือIMS ขั้นตอนเช่นเดียวกับ Vidas ICE ระบบ ในการศึกษานี้เราย้อนหลังประเมินประสิทธิภาพการทำงานของทั้งสองวิธี นอกจากนี้ทั้งสองเลือกสาหร่ายที่ใช้ไปจนแยก STEC O157 เปรียบเทียบ. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 ตัวอย่างตัวอย่างต่อไปนี้มีการตรวจสอบสำหรับการปรากฏตัวของSTEC O157 โดยการดำเนินการขั้นตอนคู่มือ IMS เช่นเดียวกับVidas ระบบ ICE (1) จากอุจจาระสัตว์เลี้ยงในฟาร์มที่ผ่านการทดสอบก่อนหน้านี้ในเชิงบวกและได้รับการจัดเก็บไว้ที่อุณหภูมิ-20 ° C (n = 144 ), (2) เนื้อหาทางทวารหนักของสัตว์เลี้ยงในฟาร์มที่แตกต่างกันในสวนสัตว์ลูบคลำตัวอย่างเป็นรายบุคคลโดยการคลำทางทวารหนัก(n = 73), (3) มูลอุจจาระจากสัตว์ที่แตกต่างกันเก็บที่สวนสัตว์ลูบคลำที่แตกต่างกัน(n = 95), (4) เนื้อหาทางทวารหนักของ แกะเก็บที่slaughterline นี้ (n = 325), (5) ตัวอย่างไม้กวาดจากซากแกะ(n = 325) และ (6) การค้าปลีกที่แตกต่างกันเนื้อดิบที่ผ่านการทดสอบก่อนหน้านี้ในเชิงบวกและได้รับการจัดเก็บไว้ที่อุณหภูมิ-20 ° C (n = 35 ). สำหรับการเปรียบเทียบของทั้งสองสื่อการแยกการคัดเลือกในนอกเหนือไปจากผลที่ได้รับตัวอย่างที่กล่าวข้างต้นผลการอีก679 ตัวอย่างอุจจาระสัตว์ถูกรวมอยู่, ซึ่งถูกนำมาวิเคราะห์กับทั้ง IMS หรือ Vidas ICE เหล่านี้ตัวอย่างทั้งเนื้อหาทางทวารหนักและมูลได้รับการเก็บรวบรวมจากสัตว์ที่แตกต่างกันในการลูบคลำสวนสัตว์และสัตว์ฟาร์มทั้งเพื่อติดตามแหล่งที่มาของการติดเชื้อของมนุษย์(n = 177) หรือการศึกษาการเกิดขึ้นของ STEC O157 ในลูบคลำสวนสัตว์(n = 502). ยกเว้นอุจจาระบวกและตัวอย่างเนื้อสัตว์ที่ถูกเก็บไว้ในช่องแช่แข็งตัวอย่างทุกคนและสดการตรวจสอบทางจุลชีววิทยาได้เริ่มต้นภายใน72 ชั่วโมงหลังจากคอลเลกชันของพวกเขา ตามกฎ swabs ซากที่ถูกประมวลผลภายในวันของการสุ่มตัวอย่าง. 2.2 การเพิ่มคุณค่าในการเลือกกลุ่มตัวอย่างคือถ้าหลังจากที่ถูกละลาย 2 ที่จะ 4 ° C, ปรับลด 10 ครั้งใน tryptone น้ำซุปถั่วเหลืองปรับเปลี่ยน(Oxoid จำกัด เบซิงสหราชอาณาจักร) เสริมด้วย Novobiocin (20 mg l-1) (Sigma เคมี จำกัด เซนต์หลุยส์, มิสซูรี่) (MTSB + n). ต้องการถุงพลาสติก Stomacher ที่มีฟองน้ำที่ใช้ในการลิ้มลองซากแกะ90 มิลลิลิตร MTSB Novobiocin โดยไม่ต้องถูกบันทึก หลังจาก homogenisation (1 นาที) ใน Stomacher ที่ตัวอย่างที่ถูกบ่มที่41.5 ± 0.5 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง ในกรณีที่มีอุจจาระแกะเก็บที่ฆ่าหลังจาก 6-8 ชั่วโมงของการบ่มเกี่ยวกับ5ml ของวัฒนธรรมการตกแต่งถูกนำมาเพื่อจุดประสงค์ของขั้นตอนIMS สำหรับทุกการวิเคราะห์อื่น ๆ วัฒนธรรมในชั่วข้ามคืนถูกนำมาใช้. 2.3 Immunoconcentration 2.3.1 Dynabeads ป้องกัน-E coli O157 สำหรับขั้นตอน IMS Dynabeads ป้องกัน-E coli O157 (Dynal, ออสโล, นอร์เวย์) ถูกนำมาใช้และคำแนะนำของผู้ผลิตตามมา. 2.3.2 Vidas Immuno-ความเข้มข้นของเชื้อ E. coli O157 ผู้ผลิตของ Vidas ชุด ICE (bioM? rieux) กําหนดการตกแต่งเลือกแรกของกลุ่มตัวอย่างใน MTSB n + (6-7 ชั่วโมงที่ 41 ± 1 ° C) ตามมาด้วยการตกแต่งเลือกที่สอง(1 : 10 เจือจาง) ในน้ำซุป MacConkey เสริมด้วยเซฟิกซิม(0.05 mg l-1) และ tellurite (2.5 mg l-1) (18 ± 1 ชั่วโมงที่35-37 ° C) ก่อนการทดสอบกับ Vidas ชุด ICE เบี่ยงเบนไปจากโปรโตคอลนี้ 500 ไมโครลิตรจากวัฒนธรรมค้างคืนใน MTSB n + ถูกปิเปตลงในแถบ ทางเลือกนี้ได้รับการทำขึ้นอยู่กับผลของการศึกษาอย่างกว้างขวางในวิธีการสำหรับการตรวจสอบและการแยกของเชื้อE. coli O157 ดำเนินการก่อนหน้านี้ในห้องปฏิบัติการของเรา(Tilburg et al., 1999). 2.4 แยกเลือกและการยืนยันตัวอย่าง immunoconcentrated ถูกเชื้อเข้าสู่สองสื่อแยกเลือก: ซอร์บิทอ-MacConkey agar (Oxoid) เสริมด้วยเซฟิกซิม (0.05 mg l-1) และ tellurite (2.5 mg l-1) (Oxoid) (CT-SMAC) และ CHROMagar O157 (ITK วินิจฉัย BV, อูดิทอร์, เนเธอร์แลนด์) กับเซฟิกซิม(0.025 mg l-1) และ tellurite (1.25 mg l-1) (1 / 2CT-CHROM). แผ่นวุ้นถูกบ่มเป็นเวลา 18-24 ชั่วโมงที่ 37 ° C. อาณานิคมทั่วไป (อาณานิคมไม่มีสีใน CT-SMAC และสีม่วงเมื่อวันที่1 / 2CT-CHROMagar) เพิ่มขึ้นถึง 12 บาทต่อแผ่นได้รับการคัดเลือกและเชื้อลงบนเมทิลีนEosin Levine สีฟ้าวุ้น (Oxoid) (L-EMB) วุ้นและ sorbitol- วุ้น MacConkey กับ 4 methylumbelliferyl- β-D-glucuronide (0.1 GL-1) (ซิกม่า) (SMACMUG) วุ้น แผ่นถูกอ่านหลังจาก 18-24 ชั่วโมงของการบ่มที่อุณหภูมิ37 องศาเซลเซียส สันนิษฐาน STEC O157 แยก (ที่มีทั่วไปเชื้อE. coli เงาโลหะใน L-EMB เป็นทั้งซอร์บิทอ-nonfermenting และβ-glucuronidase ลบในSMAC-MUG) ได้มีการทดสอบสำหรับการเกาะติดกันที่มีเชื้อ E. coli O157 ชุดทดสอบน้ำยาง (สังข์ ไบโอเทค จำกัด กลางถนนวัดฮิลล์เบอรีเคนท์สหราชอาณาจักร) ไอโซเลทที่ให้น้ำยางบวกผลการทดสอบได้รับการยืนยันที่จะเป็นเชื้อ E. coli โดยใช้ API 20E

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . บทนำ
ตั้งแต่ต้นทศวรรษ 1980 , มันเป็นที่รู้จักกันว่า การติดเชื้อ
ชิงะสารพิษผลิตเชื้อ Escherichia coli ( STEC ) สายพันธุ์ของ
ซีโรกรุ๊ปเป็นสมาชิกเป็นสาเหตุหลักของอาการลำไส้ใหญ่บวมและเลือดออก
haemolytic – เยื่อหุ้มหัวใจอักเสบ ( Riley et al . , 1983 ;
karmali et al . , 1985 ; จริงๆ , 2004 ) เชื้อที่พบบ่อย
มีความสัมพันธ์กับการบริโภคสุก
( สับ ) เนื้อและนมดิบ ( ทาร์ et al . , 2005 ) ระบาดวิทยา
มีการศึกษาแสดงให้เห็นว่าโค แต่ยังมีสัตว์อื่น ๆสามารถ
ขับถ่ายอุจจาระซึ่งตน โดยไม่แสดงอาการทางคลินิกใด ๆ
( moxley , 2004 ) นอกจาก ( faecally
ปนเปื้อน ) อาหาร ส่งตรงจากสัตว์มาสู่คน
สามารถส่งผลในการติดเชื้อ ( Paton Paton และ 1998b
, )เพื่ออธิบายเพิ่มเติม แหล่งของ STEC เป็นสมาชิก วิธีไว
เป็นเพราะเชื้อโรคเหล่านี้อาจจะอยู่ในอาหาร และสิ่งแวดล้อมโดยเฉพาะ

นอกจากนี้ ตัวเลขเล็ก บอบบาง และวิธีการตรวจสอบที่รวดเร็ว
ที่จําเป็นสําหรับอุตสาหกรรมอาหารเพื่อให้แน่ใจว่าอุปทานปลอดภัย
อาหาร วัฒนธรรมแบบดั้งเดิมเป็นวิธีการทั้งสองและใช้เวลานาน
ลําบากความไวของพวกเขาอย่างมากสามารถเพิ่มขึ้นโดยการประยุกต์ใช้การ immunoconcentration

ขั้นตอนซึ่งจะส่งผลเชิงลบเท็จน้อยลง . เป็นวิธีที่ใช้กันทั่วไป ซึ่งจะดำเนินการใน

มาตรฐานสากลสำหรับตรวจหาเชื้อ E . coli เป็นสมาชิกในอาหารและอาหารสัตว์วัตถุดิบ
( นิรนาม , 2001 ) , ที่แยก ( IMS ) .
ก่อนชุบบนสื่อแยกที่เลือก เช่นจากเซลล์ปัจจุบันเป็นสมาชิกในวัฒนธรรมการเลือกขนาด
ลูกปัดแม่เหล็กกับ E . coli เป็นสมาชิกแอนติบอดีที่เฉพาะเจาะจง covalently
ผูกลงบนพื้นผิวของพวกเขา ที่ประสบความสำเร็จขั้นตอนที่สามารถดำเนินการ
ทั้งด้วยตนเองและโดยอัตโนมัติ อีกหนึ่งตัวอย่างของ immunoconcentration
เป็นอัตโนมัติเต็มระบบ ( vidas ไวเทค immunodiagnostic
3 ) ( biom é rieux มาร์ซี่ l'etoile
, ฝรั่งเศส )การ vidas มมูโนของ E . coli เป็นสมาชิก ( น้ำแข็ง ) ชุด
รวมถึงสองพร้อมใช้งานคอมโพเนนต์ หนึ่งคือ receptacle เฟส
แข็ง ( SPR ) ซึ่งทำหน้าที่เป็นเฟสของแข็งเช่นเดียวกับ
pipetting อุปกรณ์สำหรับการทดสอบ การตกแต่งภายในของ SPR จะเคลือบด้วยสารแอนติบอดี
anti-e. เป็นสมาชิกที่ถูกดูดซับบนพื้นผิวของมัน
ส่วนประกอบอื่น ๆที่เป็นแถบ ซึ่งมีทั้งล้างและ
ปล่อยโซลูชั่นเป็นส่วนลงตัวของเสริมวัฒนธรรม
ด้วยตนเองโอนเข้าแถบและต่อมาตัวอย่าง
กรณืในและออกของ สพร. E . coli เป็นสมาชิกอยู่ในซุป
จะผูกกับ anti-e. coli เป็นสมาชิกแอนติบอดีเคลือบภายใน
ของสุพรรณบุรี . ตัวอย่างส่วนประกอบหลุดแล้วล้าง
ออกไป เป็นขั้นตอนสุดท้ายของเอนไซม์ที่ปล่อยจับ E . coli เป็นสมาชิก
เป็นเฉพาะจากที่พวกเขาสามารถชุบลง

เลือกวุ้น ในห้องปฏิบัติการของเรา ตัวอย่างอุจจาระของสัตว์และเนื้อสัตว์มี
ได้รับการตรวจสอบเป็นประจำ เพื่อการแสดงตนของ STEC โดยการเป็นสมาชิก
ขั้นตอนในคู่มือ รวมทั้ง vidas น้ำแข็ง
ระบบ ในการศึกษานี้เราประเมินย้อนหลัง
ประสิทธิภาพของทั้งสองวิธี นอกจากนี้ สองเลือก
agars ใช้สุดท้าย แยกเป็นสมาชิก STEC เปรียบเทียบ .
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . ตัวอย่างต่อไปนี้คือตัวอย่าง
ตรวจสอบการแสดงตนของ
STEC เป็นสมาชิกโดยทำตามขั้นตอนในคู่มือ ตลอดจน
vidas น้ำแข็งระบบ ( 1 ) อุจจาระของสัตว์ในฟาร์มที่
ก่อนหน้านี้ทดสอบเป็นบวก และมีอุณหภูมิ− 20 ° C
( n = 144 ) , ( 2 ) เนื้อหาทางทวารหนักของสัตว์ฟาร์มที่แตกต่างกันใน
ลูบคลำสวนสัตว์และบุคคลโดยตรงควบคุม ( N = 73 ) ,
( 3 ) ในมูลจากสัตว์ที่แตกต่างที่แตกต่างกันรวบรวม
ลูบคลำสวนสัตว์ ( n = 95 ) , ( 4 ) เนื้อหาของลำไส้ของแกะ
เก็บที่ slaughterline ( n = 325 ) , ( 5 ) ตัวอย่างไม้กวาดจาก
ซากแกะ ( n = 325 ) และ ( 6 ) ที่แตกต่างกัน ปลีก เนื้อดิบที่
ก่อนหน้านี้ทดสอบบวกและมีอุณหภูมิ− 20 ° C

( n = 30 )สำหรับการเปรียบเทียบของทั้งสองสื่อแยกเลือกใน
นอกจากนี้ผลการศึกษาสำหรับตัวอย่างข้างต้น
ผลของอุจจาระสัตว์อื่นมีจำนวนรวม
ที่ถูกวิเคราะห์ด้วยปัญญา หรือ vidas น้ำแข็ง ตัวอย่างเหล่านี้
, ทั้งเนื้อหาทางทวารหนักและมูล ได้ถูกรวบรวมจากสัตว์ที่แตกต่างกัน

ลูบคลำสวนสัตว์และสัตว์ฟาร์มให้เพื่อติดตามแหล่งที่มาของการติดเชื้อของมนุษย์
( n = 177 ) หรือเพื่อศึกษาการเกิดของ STEC เป็นสมาชิกในสวนสัตว์ petting

( n = 502 ) ด้วยข้อยกเว้นของอุจจาระบวกและเนื้อตัวอย่าง
ที่ถูกเก็บไว้ในช่องแช่แข็ง ตัวอย่างสด และการได้รับการเริ่มต้น
จุลชีววิทยา ภายใน 72 ชั่วโมงหลังจาก
คอลเลกชันของพวกเขา ตามกฎ จากซากที่ถูกประมวลผล
ภายในวันของคน
2.2 . งานเสริม
จำนวน ( ถ้ามี ) หลังจากถูกละลายใน 2
4 ° C , เจือจาง 10 เท่าในแบบทริพโทนถั่วเหลืองซุป
( oxoid จำกัด Basingstoke , สหราชอาณาจักร ) เสริมด้วยโนโวไบโอซิน
( 20 mg L − 1 ) ( Sigma Chemical Co . , St . Louis , MO ) ( mtsb
n ) กับพลาสติกแผงประดับหน้าอกกระเป๋าที่มีฟองน้ำใช้

ตัวอย่างแกะซาก , 90 มิลลิลิตร mtsb โดยไม่โนโวไบโอซิน
ถูกเพิ่มเข้ามาหลังจากการโฮโมจีไนเซชั่น ( 1 นาที ) ในแผงประดับหน้าอก ,
ตัวอย่างอุณหภูมิ 41.5 ± 0.5 ° C 18 ถึง 24 ชั่วโมง ในกรณีของ
แกะขี้เก็บที่ฆ่า หลังจากที่ 6 ถึง 8 ชั่วโมงของการบ่ม
ประมาณ 5ml ของวัฒนธรรมการถ่ายเพื่อ
ในขั้นตอน สำหรับการวิเคราะห์อื่น ๆวัฒนธรรมใช้ค้างคืน
.
2.3 immunoconcentration
2.3.1 . dynabeads anti-e. coli เป็นสมาชิก
สำหรับในขั้นตอน dynabeads anti-e. coli เป็นสมาชิก ( dynal
, ออสโล , นอร์เวย์ ) สถิติที่ใช้ และคําแนะนําของผู้ผลิตตาม
.
2.3.2 . มมูโน vidas ความเข้มข้นของเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก
ผู้ผลิตของ vidas น้ำแข็งชุด ( biom é rieux )
prescribes เป็นครั้งแรกของการเลือกตัวอย่างใน mtsb N
( 6 – 7 H ที่ 41 ± 1 ° C ) ตามด้วยการเลือกที่สอง (
110 ) ในการเสริมด้วยน้ำซุป macconkey
แรงยกตัว ( 0.05 มก. L − 1 ) และ tellurite ( 2.5 mg L − 1 ) ( 18 ± 1 H ที่ 35 37 ° C (
) ก่อนที่จะทดสอบกับ vidas น้ำแข็ง kit กะล่อน
จากโปรโตคอลนี้ 500 μ L จากวัฒนธรรมค้างคืน
mtsb N คือ pipetted ในแถบ ทางเลือกนี้ได้ถูก
ให้ยึดตามผลลัพธ์ของการศึกษาที่กว้างขวางเกี่ยวกับวิธีการตรวจหาและแยก
เป็นสมาชิกของ E . coli ,ก่อนหน้านี้ดำเนินการ
ในห้องปฏิบัติการของเรา ( Tilburg et al . , 1999 ) .
2.4 . การเลือกและการยืนยัน

immunoconcentrated จำนวนเชื้อไปยังสองสื่อแยกเลือก : ซอร์บิทอล ( Lynx ( oxoid )
เสริมแรงยกตัว ( 0.05 mg L − 1 ) และ tellurite
( 2.5 mg L − 1 ) ( oxoid ) ( ct-smac ) และ chromagar เป็นสมาชิก ( ITK
การ BV , uithoorn , เนเธอร์แลนด์ ) มีแรงยกตัว
( 0025 mg L − 1 ) และ tellurite ( 1.25 mg L − 1 ) ( 1 / 2ct-chrom )
วุ้นแผ่นถูกบ่ม 18 ถึง 24 ชั่วโมง 37 ° C .
( อาณานิคมอาณานิคมทั่วไปไม่มีสีบน ct-smac สีม่วง
1 / 2ct chromagar ) ได้ถึง 12 ต่อจานได้ถูกเลือกและ
ที่ใส่ของบน Levine โอซินเมทธิลีนบลู ( oxoid )
( l-emb ) วุ้น และซอร์บิทอล ( Lynx ด้วย
4-methylumbelliferyl - บีตา - วิธีการ ( 01 G L − 1 ) ( ซิกม่า ) ( smacmug )
วุ้น แผ่นอ่านหลังจาก 18 ถึง 24 ชั่วโมงของ
บ่มที่ 37 องศา สันนิษฐานว่า STEC เป็นสมาชิก (
กับปกติ E . coli โลหะเงาบน l-emb เป็นทั้ง
ซอร์บิทอลและที่มีอวัยวะ nonfermenting บีตาลบ
smac-mug ) การทดสอบการจับกลุ่มกับ E . coli
เป็นสมาชิกน้ำยางชุดทดสอบ ( murex ไบโอเทค จำกัด กลางถนน , วัด
ฮิลล์ , Dartford Kent UK )จำนวนที่ให้บวกยาง
ผลการทดสอบได้รับการยืนยันเป็นเชื้อ E . coli โดยใช้ API 20e