Protoplast isolationFrom embryogeni

Protoplast isolation
From embryogenic callus or suspension culture, cells used
for protoplast isolation should be in the log phase of
growth, with best results using suspension cells from 4 to
12 days into the 2 week subculture cycle. Transfer 1–2 g
friable callus tissue into a 60 9 15 mm petri dish (for
suspension, transfer approximately 2 ml suspension with a
wide-mouth pipette and drain off the liquid using a Pasteur
pipette). Resuspend the cells in 2.5 ml 0.7 M BH3 medium
(Table 2; BH3 ? 34 g/l sucrose) and then add 1.5 ml of
filter sterilized Enzyme Solution containing 0.7 M mannitol,
12.0 mM CaCl2, 6.0 mM MES buffer, 1.4 mM

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกโปรโตพลา
จากแคลลัสเพาะหรือวัฒนธรรมระงับเซลล์ที่ใช้
ในการแยกโปรโตพลาควรจะอยู่ในขั้นตอนการเข้าสู่ระบบของ
การเจริญเติบโตที่มีผลลัพธ์ที่ดีที่สุดโดยใช้เซลล์ระงับตั้งแต่ 4 ถึง
12 วันในรอบสัปดาห์ที่ 2 วัฒนธรรม โอน 1-2 กรัม
เนื้อเยื่อแคลลัสเปราะเป็น 60 9 15 มิลลิเมตรจาน Petri (สำหรับ
การระงับการโอนประมาณ 2 มิลลิลิตรระงับด้วย
ปิเปตกว้างปากและระบายน้ำออกจากของเหลวโดยใช้ปาสเตอร์
ปิเปต) แขวนลอยเซลล์ใน 2.5 มล. 0.7 M กลาง BH3
(ตารางที่ 2? BH3 34 g / l ซูโครส) แล้วเพิ่ม 1.5 มิลลิลิตร
กรองฆ่าเชื้อโซลูชั่นเอนไซม์ที่มี 0.7 M แมนนิทอล,
12.0 มิลลิ CaCl2 6.0 บัฟเฟอร์มิลลิ MES, 1.4 mm

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โปรโตพลาสต์จากแคลลัส หรือระงับ เลี้ยงแยก

วัฒนธรรม เซลล์ที่ใช้สำหรับการแยกโปรโตพลาสต์ที่ควรบันทึกในเฟส
การเจริญเติบโต , กับผลลัพธ์ที่ดีที่สุดใช้เซลล์แขวนลอยจาก 4
12 วันใน 2 สัปดาห์ที่ 2 รอบ โอน 1 – 2 g
เปราะลัสเนื้อเยื่อเป็น 60 9 15 มม. จานเพาะเชื้อ (
ระงับ โอนประมาณ 2 มล. ระงับด้วย
กว้างปากเปตและระบายออกเหลวใช้ปาสเตอร์
เปต ) resuspend เซลล์ใน bh3 0.7 M )
2.5 ml ( ตารางที่ 2 bh3 ? 34 กรัม / ลิตร ) แล้วเติมน้ำตาลทราย 1.5 มิลลิลิตร กรองสารละลายเอนไซม์ที่ผ่านการฆ่าเชื้อ

M mannitol 0.7 , CaCl2 12.0 มม. 6.0 มม. นอกจากนี้ บัฟเฟอร์ 1.4 มิลลิเมตร