Concanavalin A (ConA), or media alo

Concanavalin A (ConA), or media alone for 40 h at 37°C in the presence of 5% CO2. Each
sample was assayed in triplicate. Cells were removed and plates washed twice with double
distilled water, thrice with PBS with 0.01% Tween 20 (PBST), then incubated with 1 µg/mL
biotinylated mouse anti-bovine IFNγ mAb (Mabtech Inc.) for 1 h at room temperature. Plates
were washed four times with PBST and incubated with 0.5 ng/mL streptavidin alkaline
solution (Jackson ImmunoResearch Laboratories Inc., Westgrove, PA) in PBST with 1%
bovine serum albumin (BSA) at room temperature for 45 min. Plates were washed three
times with PBST and twice with PBS. Spots were developed by adding SIGMAFAST
BCIP/NBT (Sigma-Aldrich Corp.) to each well according to the manufacturer’s instructions.
The number of spots in each well was counted using an AID Elispot Reader ELRIFL07
(Autoimmun Diagnostika GMBH, Straßberg, Germany). Numbers of Mhyo-stimulated IFNγ
secreting cells were calculated by subtracting the numbers of spots in media wells from those
in Mhyo stimulated wells. Results were expressed as IFNγ secreting cells per million PBMC.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

A Concanavalin (ConA), หรือสื่อเพียงอย่างเดียวสำหรับ h 40 37° c ใน 5% CO2 แต่ละตัวอย่างถูก assayed ลข้อ ออกเซลล์ และแผ่นล้างสองครั้ง ด้วยสองกลั่นน้ำ สามครั้ง ด้วย PBS กับ 0.01% โลก 20 (PBST), ได้รับการกกแล้ว กับ 1 µg/mLbiotinylated เมาส์ป้องกันวัว IFNγ มาบ (Mabtech Inc.) สำหรับ 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง แผ่นถูกล้างสี่เท่ากับ PBST และรับการกกกับ 0.5 ng/mL streptavidin อัลคาไลน์โซลูชัน (แจ็คสัน ImmunoResearch Laboratories Inc., Westgrove, PA) ใน PBST กับ 1%วัว serum albumin (บีเอสเอ) ที่อุณหภูมิห้องสำหรับแผ่น 45 นาทีถูกซัดสามเท่า กับ PBST และครั้งที่สอง กับ PBS จุดที่ได้รับการพัฒนา โดยการเพิ่ม SIGMAFASTBCIP/NBT (Sigma Aldrich Corp.) ที่ดีตามคำแนะนำของผู้ผลิตแต่ละจำนวนจุดในแต่ละดีถูกนับโดยใช้ตัวช่วย Elispot อ่าน ELRIFL07(Autoimmun Diagnostika GMBH, Straßberg เยอรมนี) จำนวนถูกกระตุ้น Mhyo IFNγเซลล์ที่ซ่อนถูกคำนวณ โดยลบตัวเลขจุดในบ่อสื่อจากใน Mhyo กระตุ้นหลุม ผลลัพธ์ถูกแสดงเป็น IFNγ ซ่อนเซลล์ต่อ PBMC ล้าน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Concanavalin A (cona) หรือสื่อเพียงอย่างเดียวเป็นเวลา 40 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในการปรากฏตัวของ 5% ก๊าซ CO2 แต่ละ
กลุ่มตัวอย่างได้รับการวิเคราะห์ในเพิ่มขึ้นสามเท่า เซลล์ที่ถูกถอดออกและล้างจานสองครั้งคู่กับ
น้ำกลั่นสามครั้งกับพีบีเอสกับ 0.01% Tween 20 (PBST) แล้วบ่มกับ 1 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร
biotinylated เมาส์ป้องกันวัวIFNγ mAb (Mabtech อิงค์) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง แผ่น
ถูกล้างครั้งที่สี่กับ PBST และบ่ม 0.5 ng / สเตอัลคาไลน์
การแก้ปัญหา (แจ็คสัน ImmunoResearch Laboratories Inc. , Westgrove, PA) ใน PBST กับ 1%
วัวซีรั่มอัลบูมิ (BSA) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 45 นาที แผ่นถูกล้างสาม
ครั้งด้วย PBST และครั้งที่สองกับพีบีเอส จุดที่ได้รับการพัฒนาโดยการเพิ่ม SIGMAFAST
BCIP / NBT (Sigma-Aldrich คอร์ป) ให้กับแต่ละดีตามคำแนะนำของผู้ผลิต.
จำนวนของจุดในแต่ละดีที่ได้รับการนับโดยใช้ตัวช่วย ELISPOT อ่าน ELRIFL07
(Autoimmun Diagnostika GmbH, Strassberg, เยอรมนี) ตัวเลขของ Mhyo กระตุ้นIFNγ
เซลล์หลั่งถูกคำนวณโดยการลบหมายเลขของจุดในหลุมสื่อจากผู้ที่
อยู่ใน Mhyo กระตุ้นหลุม ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นIFNγหลั่งเซลล์ต่อล้าน PBMC

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ถูก ( cona ) หรือสื่อไว้ที่ 37 องศา C 40 ชั่วโมงในการปรากฏตัวของคาร์บอนไดออกไซด์ 5% แต่ละตัวอย่างซีรั่มทั้งสามใบ เซลล์ที่ถูกเอาออก และแผ่นล้างสองครั้งกับคู่น้ำกลั่น สามครั้งกับ PBS กับ 0.01 tween 20 ( pbst ) แล้วบ่มด้วย 1 µกรัม / มิลลิลิตรไลโคγเมาส์ต่อต้านหนึ่งมาบ ( mabtech อิงค์ ) 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง แผ่นมีซัก 4 เท่า โดย pbst 0.5 ng / ml streptavidin ด่างโซลูชั่น ( Jackson immunoresearch ห้องปฏิบัติการอิงค์ westgrove , PA ) ใน pbst กับ % 1อัลบูมิน ( BSA ) ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 45 นาที จานถูกล้าง สามเท่า และ pbst สองครั้งกับ PBS จุดที่ถูกพัฒนาขึ้น โดยการเพิ่ม sigmafastbcip / NBT ( ซิกม่า Aldrich Corp . ) กัน ตามคำแนะนำของผู้ผลิตจำนวนจุดในแต่ละดีก็นับว่าใช้เครื่องช่วยอ่าน elrifl07 อีไลสปอท( autoimmun diagnostika GmbH , เß Berg , เยอรมนี ) จำนวนหนึ่งγ mhyo น่าเร้าใจแอบเซลล์ได้โดยลบหมายเลขของจุดในบ่อ จากผู้สื่อใน mhyo กระตุ้นหลุม ผลลัพธ์ที่ได้แสดงเป็นหนึ่งγ secreting เซลล์ต่อล้านบาท 2 .