To show the potential of these BRET

To show the potential of these BRET systems for monitoring PPIs in deep tissues of small animals, we generated a bimolecular FRB/FKBP12 system of BRET6, which acts under the control of rapamycin. Our sensor represents a model of a drug-mediated association of two proteins, and we successfully imaged this PPI in deep tissues of mice. The BRET6 FRB/FKBP12 sensor noninvasively reports the rapamycin-induced interaction, which is shown by a significant increase of the A/D in the presence of rapamycin relative to control experiments. This effect is equally detectable in cultured cells and mice with similar DRs. Blocking the rapamycin effect in cells using the well-known inhibitor FK506, we showed, under cell culture conditions, that the observed ratiometric difference reflects a specific interaction between FRB and FKBP12.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพื่อแสดงศักยภาพของระบบเบรตเหล่านี้ตรวจสอบ PPIs ในเนื้อเยื่อลึกสัตว์เล็ก เราสร้างระบบ FRB/FKBP12 bimolecular BRET6 ซึ่งภายใต้การควบคุมของ rapamycin เซ็นเซอร์ของเราแสดงแบบจำลองของความสัมพันธ์ mediated ยาของโปรตีนทั้งสอง และเราสำเร็จ imaged PPI นี้ในเนื้อเยื่อลึกของหนู เซ็นเซอร์ BRET6 FRB/FKBP12 noninvasively รายงานการเกิด rapamycin โต้ตอบ ซึ่งจะแสดงการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของ A/D ในต่อหน้าของ rapamycin เมื่อเทียบกับการทดลองควบคุม ลักษณะพิเศษนี้เป็นอาสาเหมือนกันในเซลล์อ่างและหนู ด้วย Blocking ดร.คล้ายผล rapamycin ในเซลล์โดยใช้ผลรู้จัก FK506 ดังที่ ภายใต้เงื่อนไขที่วัฒนธรรมเซลล์ ratiometric สังเกตความแตกต่างสะท้อนให้เห็นถึงการโต้ตอบเฉพาะระหว่าง FRB FKBP12

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพื่อแสดงศักยภาพของระบบเหล่านี้ BRET PPIs สำหรับการตรวจสอบในเนื้อเยื่อลึกของสัตว์ขนาดเล็กที่เราสร้างขึ้น bimolecular FRB / ระบบ FKBP12 ของ BRET6 ซึ่งทำหน้าที่ภายใต้การควบคุมของ rapamycin เซ็นเซอร์ของเราแสดงให้เห็นถึงรูปแบบของการเชื่อมโยงยาเสพติดสื่อกลางของทั้งสองโปรตีนและเราประสบความสำเร็จในการถ่ายภาพ PPI นี้ในเนื้อเยื่อลึกของหนู BRET6 FRB / FKBP12 เซ็นเซอร์รายงาน noninvasively rapamycin ปฏิสัมพันธ์ที่เกิดขึ้นซึ่งจะเห็นได้จากการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของ A / D ในการปรากฏตัวของญาติ rapamycin ในการควบคุมการทดลอง นี่คือผลการตรวจพบอย่างเท่าเทียมกันในเซลล์เพาะเลี้ยงและหนูที่มีอาที่คล้ายกัน การปิดกั้นผล rapamycin ในเซลล์โดยใช้ FK506 ยับยั้งที่รู้จักกันดีที่เราแสดงให้เห็นว่าภายใต้สภาวะการเพาะเลี้ยงเซลล์ที่สังเกตเห็นความแตกต่าง ratiometric สะท้อนให้เห็นถึงการทำงานร่วมกันระหว่างที่เฉพาะเจาะจงและ FRB FKBP12

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อแสดงศักยภาพของระบบเหล่านี้เพื่อตรวจสอบ ppis เบร็ทในเนื้อเยื่อลึกสัตว์ขนาดเล็ก เราสร้างระบบ frb / fkbp12 สารชีวโมเลกุลของ bret6 ซึ่งกระทำภายใต้ การควบคุมของราปามัยซิน . เซ็นเซอร์ของเรา หมายถึง รูปแบบของยาโดยสมาคมของโปรตีนทั้งสอง และเราได้ปรับภาพลักษณ์ในเนื้อเยื่อลึกของหนูการ bret6 frb / fkbp12 เซ็นเซอร์ noninvasively รายงานราปาไมซินและปฏิสัมพันธ์ซึ่งแสดงโดยการเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญของ A / D ต่อหน้าญาติราปาไมซิน เพื่อควบคุมการทดลอง ผลกระทบนี้จะได้เท่าเทียมกันในเซลล์ที่เพาะเลี้ยงและหนูกับที่คล้ายกัน Drs . การปิดกั้นราปามัยซินต่อเซลล์โดยใช้ fk506 ตัวยับยั้งที่รู้จักกันดี , เราพบ ภายใต้สภาพเพาะเลี้ยงเซลล์ที่สะท้อนให้เห็นถึงปฏิสัมพันธ์ ratiometric สังเกตความแตกต่างเฉพาะระหว่าง frb และ fkbp12 .