2. Materials and methods2.1. Materi

2. Materials and methods
2.1. Materials
L. rhamnosus Gorbach Goldin (LGG) strain (ATCC 53103) was
purchased from American Type Culture Collection (ATCC, USA).
Alginic acid sodium salt and UHT-sterilized soy milk were purchased
from Alfa Aesar (USA) and Yeo's (Singapore), respectively.
Locust bean gum, chitosan (50e190 kDa), calcium chloride (CaCl2),
sodium chloride (NaCl), and hydrogen chloride (HCl) were purchased
from SigmaeAldrich (USA). Phosphate buffered saline (PBS),
bacto agar, and de Man-Rogosa-Sharpe (MRS) broth were purchased
from BD Biosciences (USA). Resistant starch in the form of
water-insoluble high-amylose maize starch (Hi-Maize 260®) was
generously donated by Ingredion (USA). Hi-Maize 260® is a wellestablished
prebiotic as reported in Desai, Powell, and Shah
(2004) composed of z66% amylose (i.e. a straight chain polymer
of D-glucose units linked by a-1,4-glycosidic bond) and z34%
amylopectin (i.e. a branched chain polymer of D-glucose units
linked by a-1,4 and a-1,6-glycosidic bonds) with molecular weight
in excess of 10,000 g/mol (Liu, Ramsden, & Corke, 1999). Waxy
starch in the form of water-soluble octenyl succinic anhydride
(OSA)-modified maize starch (Hi-Cap 100®) was also donated by
Ingredion (USA). Hi-Cap 100® was composed of 100% amylopectin
with viscosity-average molecular weight of 12,340 g/mol and
intrinsic viscosity of 0.117 dL/g in water at 20
C (Dokic, Dokic,
Dapcevic, & Krstonosic, 2008).
2.2. Methods
2.2.1. Viability of free planktonic LGG in the presence of starch
Free planktonic cells of LGG (i.e. non-encapsulated) were cultivated
by overnight incubation in MRS at 37
C. Afterwards,125 mL of
the overnight culture was diluted to OD600 ¼ 0.1 and subsequently
was added in triplicates to 5 mL MRS broth in a microtube in the
presence of starch at three concentrations (i.e. 0.2%, 0.4%, and 0.6%
w/v). The same cell suspension, but without the starch, was used as
the control. Next, the cell suspension were placed in a shaking
incubator at 200 RPM in a slightly tilted tube position to maximize
the cell contacts with the starch, particularly for the waterinsoluble
Hi-Maize that had a strong tendency to sediment. After
8-h and 24-h incubations with the starches, the viable cells
remaining in the suspension were enumerated in log (CFU/mL) by
the drop plate method using MRS agar after 48 h incubation at
37
C.
2.2.2. Preparation and physical characterizations of LGG biofilm
microcapsules
The LGG biofilm microcapsules were prepared by 24-h incubation
of the planktonic LGG microcapsules in MRS supplemented
with 0.1 M CaCl2. Experimental factors influencing the biofilm
formation (e.g. initial cell density in the planktonic microcapsules,
incubation time, chitosan coating) had been discussed in Cheow
and Hadinoto (2013), hence they were not repeated here for
brevity. Briefly, the planktonic LGG microcapsules were prepared
by an external gelation method, where 75 mL of overnight suspension
of planktonic LGG (OD600 ¼ 2.0) was added after forty-fold
dilution to 15 mL sterile solution containing 1.5% (w/v) alginate,
0.5% (w/v) locust bean gum, and the starch at three different concentrations
(i.e. 0.2%, 0.4%, and 0.6% w/v). The resultant cell suspension
was added to 100 mL sterile 0.1 M CaCl2 solution by
atomization at air and feed flow rates of 140 L/h and 3 mL/min,
respectively. The planktonic LGG microcapsules were formed
immediately due to the interaction between alginate and Ca2þ to
form calcium alginate gel. The microcapsules were let to harden for
30 min at 4
C after which they were recovered from the CaCl2
solution by gravity sedimentation.
Afterwards, the planktonic LGG microcapsules were incubated
for 24 h in MRS broth supplemented with 0.1 M CaCl2 to promote
the growth of high-density LGG biofilm colonies within the capsule
periphery. The LGG biofilm microcapsules were then recovered by
gravity sedimentation and washed with CaCl2 solution. Subsequently,
the microcapsules were coated with chitosan by incubating
the microcapsules in 0.4% (w/v) chitosan solution at pH ¼ 6
for 30 min. The LGG biofilm microcapsules coated with chitosan
were then recovered by gravity sedimentation and washed with
CaCl2 solution to remove the excess chitosan.
The initial cell densities of the LGG biofilm microcapsules were

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. วัสดุคือ L. rhamnosus Goldin Gorbach (LGG) สายพันธุ์ (ATCC 53103)ซื้อจากอเมริกาชนิดลเล็ก (ATCC สหรัฐอเมริกา)ซื้อ alginic กรดเกลือโซเดียมและน้ำนมถั่วเหลืองยูเอชทีในการฆ่าเชื้อจากอัลฟ่า Aesar (สหรัฐอเมริกา) และ Yeo (สิงคโปร์), ตามลำดับโลคัสบีนกัม ไคโตซาน (50e190 kDa), แคลเซียมคลอไรด์ (CaCl2),ซื้อโซเดียมคลอไรด์ (NaCl), และไฮโดรเจนคลอไรด์ (HCl)จาก SigmaeAldrich (สหรัฐอเมริกา) น้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS),ซื้อวุ้น bacto และซุป de Man-Rogosa-Sharpe (MRS)จาก BD ออก (สหรัฐอเมริกา) แป้งทนในรูปของถูกน้ำละลายแป้งข้าวโพดสูงปริมาณแอมิโลส (Hi-Maize 260®)กว้างบริจาคโดย Ingredion (สหรัฐอเมริกา) Hi-Maize 260® เป็น wellestablished เป็นprebiotic ตามที่รายงานใน Desai พาวเวลล์ และชาห์(2004) ประกอบด้วยอมิ% z66 (เช่นตรงโซ่พอลิเมอร์D-กลูโคสหน่วยที่เชื่อมโยง โดยที่ 1, 4-glycosidic bond) และ z34%amylopectin (เช่นเป็นโซ่กิ่งโพลิเมอร์ของ D-กลูโคสหน่วยเชื่อมโยง โดย a-1,4 และ a-ปริมาณฟลักซ์ 1.6-glycosidic พันธบัตร) กับน้ำหนักโมเลกุลเกิน 10,000 กรัม/โมล (Liu, Ramsden, & Corke, 1999) คล้ายขี้ผึ้งแป้งในรูปของ octenyl ที่ละลายน้ำได้ succinic ด(OSA) -แป้งข้าวโพดแก้ไข (Hi-Cap 100®) นอกจากนี้ยังได้รับบริจาคจากIngredion (สหรัฐอเมริกา) Hi-Cap 100® จาด amylopectin 100%มีน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ยความหนืดของ 12,340 กรัม/โมล และความหนืดที่แท้จริงของ 0.117 dL/g ในน้ำที่ 20 C (Dokic, DokicDapcevic, & Krstonosic, 2008)2.2. วิธี2.2.1. viability ของฟรี planktonic LGG ในแป้งเซลล์ planktonic ของ LGG (เช่นไม่นึ้) ถูกปลูกฝังโดยบ่มข้ามคืนใน MRS ที่ c 37 หลังจากนั้น 125 mLวัฒนธรรมข้ามคืนถูกเจือจางไป OD600 ¼ 0.1 และต่อมาน้ำซุป 5 มล. MRS ใน microtube ในถูกใน triplicatesของแป้งที่ความเข้มข้นที่สาม (เช่น 0.2%, 0.4% และ 0.6%w/v) เหมือนเซลล์ระงับ แต่ไม่ มีแป้ง ใช้เป็นการควบคุม ถัดไป ไว้ระงับเซลล์ในการสั่นตู้อบที่ 200 RPM ในตำแหน่งท่อเอียงเล็กน้อยเพื่อเพิ่มติดต่อเซลล์พร้อมแป้ง โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับการ waterinsolubleสวัสดี ข้าวโพดที่มีแนวโน้มที่แข็งแกร่งจะตะกอน หลังจาก8 ชม. และ 24 ชม. incubations กับแป้ง เซลล์ทำงานได้คงเหลือในระบบกันสะเทือนถูกนำในบันทึก (CFU/mL)วิธีการแผ่นปล่อยใช้ MRS วุ้นหลังจากบ่ม 48 ชั่วโมงที่ค. 372.2.2. เตรียมและ characterizations ทางกายภาพของฟิล์ม LGGmicrocapsulesใน microcapsules ฟิล์ม LGG ณที่บ่ม 24 ชมของ microcapsules LGG planktonic ในนางเสริมด้วย 0.1 M CaCl2 ทดลองปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อฟิล์มก่อตัว (เช่นเซลล์เริ่มต้นความหนาแน่นใน planktonic microcapsulesเวลาบ่ม ไคโตซานเคลือบ) มีการกล่าวถึงใน Cheowและ Hadinoto (2013), ดังนั้นพวกเขาไม่ซ้ำกันที่นี่สำหรับความกระชับ สั้น ๆ การ microcapsules LGG planktonic วจัดโดยวิธีการ gelation ภายนอก ที่แขวนค้างคืน 75 มล.ของ planktonic LGG (OD600 ¼ 2.0) เข้ามาหลังจาก forty-foldเจือจางไป 15 มล.ผ่านการฆ่าเชื้อโซลูชันที่ประกอบด้วยแอลจิเนต 1.5% (w/v)0.5 หมากฝรั่งถั่วตั๊กแตน% (w/v) และแป้งที่ความเข้มข้นแตกต่างกันสาม(เช่น 0.2%, 0.4% และ 0.6% w/v) ระงับเซลล์ผลลัพธ์ถูก 100 มล.ผ่านการฆ่าเชื้อ 0.1 M CaCl2 โซลูชันโดยแยกเป็นอะตอมที่อากาศและอัตราการไหลที่ฟีดของ 140 L/h และ 3 มล./ นาทีตามลาดับ เกิดใน microcapsules LGG planktonicทันทีเนื่องจากการโต้ตอบระหว่างแอลจิเนตและ Ca2þ การแบบฟอร์มแคลเซียมแอลจิเนตเจ ใน microcapsules ถูกให้แกร่งสำหรับ30 นาทีที่ 4 C หลังจากที่พวกเขาถูกกู้คืนจากการ CaCl2แก้ปัญหา โดยการตกตะกอนของแรงโน้มถ่วงหลังจากนั้น ใน microcapsules LGG planktonic ได้รับการกก24 ชั่วโมงในซุปนางเสริม ด้วย 0.1 M CaCl2 เพื่อส่งเสริมการเติบโตของอาณานิคมฟิล์ม LGG ความหนาแน่นสูงภายในแคปซูลรอบนอก การ LGG microcapsules ฟิล์มแล้วถูกกู้คืนโดยแรงโน้มถ่วงตกตะกอน และล้าง ด้วย CaCl2 โซลูชัน ต่อมาmicrocapsules ถูกเคลือบ ด้วยไคโตซาน โดย incubatingmicrocapsules ในไคโตซาน 0.4% (w/v) ที่ pH ¼ 630 นาที Microcapsules ฟิล์ม LGG ที่เคลือบ ด้วยไคโตซานแล้วกู้คืน โดยแรงโน้มถ่วงตกตะกอน และล้างด้วยแก้ไขปัญหา CaCl2 เพื่อเอาส่วนเกินไคโตซานมีความหนาแน่นเซลล์เริ่มต้นของการ microcapsules ฟิล์ม LGG

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุ
ลิตร rhamnosus Gorbach Goldin (LGG) สายพันธุ์ (ATCC 53103) ได้รับการ
สั่งซื้อจากประเภทวัฒนธรรมอเมริกันสะสม (ATCC, สหรัฐอเมริกา).
กรด Alginic เกลือโซเดียมและนมถั่วเหลืองยูเอชทีผ่านการฆ่าเชื้อที่ซื้อมา
จาก Alfa Aesar (USA) และยีโอของ (สิงคโปร์) ตามลำดับ
ตั๊กแตนเหงือกถั่วไคโตซาน (50e190 กิโลดาลตัน), แคลเซียมคลอไรด์ (CaCl2),
โซเดียมคลอไรด์ (NaCl) และไฮโดรเจนคลอไรด์ (HCl) กำลังซื้อ
จาก SigmaeAldrich (USA) ฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (PBS)
bacto agar และ Man-Rogosa-ชาร์ป (MRS) น้ำซุปที่ซื้อมา
จาก BD ชีววิทยาศาสตร์ (USA) แป้งทนในรูปแบบของ
ที่ไม่ละลายน้ำสูงอะไมโลสแป้งข้าวโพด (Maize Hi-260®) คือการ
บริจาคไม่เห็นแก่ตัวโดย Ingredion (USA) Hi-ข้าวโพด260®เป็น wellestablished
prebiotic รายงานใน Desai พาวเวลและอิหร่าน
(2004) ประกอบด้วย z66% อะมิโลส (เช่นพอลิเมอโซ่ตรง
ของหน่วยงาน D-กลูโคสเชื่อมโยงโดยพันธบัตร-1,4-glycosidic) และ Z34 %
amylopectin (เช่นพอลิเมอโซ่กิ่งของหน่วยงาน D-กลูโคส
เชื่อมโยงโดย-1,4 และ A-1,6-glycosidic พันธบัตร) มีน้ำหนักโมเลกุล
ในส่วนที่เกิน 10,000 กรัม / โมล (หลิวแรมส์และ Corke, 1999) . ข้าวเหนียว
แป้งในรูปแบบของการละลายน้ำ octenyl สารประกอบซั
(OSA) แป้งข้าวโพด -modified (Hi-Cap 100 หรือไม่?) นอกจากนี้ยังได้รับการบริจาคมาจาก
Ingredion (USA) Hi-Cap 100 หรือไม่? ประกอบด้วย 100% amylopectin
ที่มีความหนืดค่าเฉลี่ยน้ำหนักโมเลกุล 12,340 กรัม / โมลและ
ความหนืดที่แท้จริงของ 0.117 dL / g ในน้ำที่ 20? C (Dokic, Dokic,
Dapcevic และ Krstonosic 2008).
2.2 . วิธีการ
2.2.1 ชีวิตของ LGG planktonic อิสระในการปรากฏตัวของแป้ง
ฟรีเซลล์ planktonic ของ LGG (คือไม่ใช่ห่อหุ้ม) ได้รับการปลูกฝัง
จากการบ่มค้างคืนใน MRS ที่ 37 องศาเซลเซียส หลังจากนั้น 125 มล
วัฒนธรรมค้างคืนถูกเจือจางเพื่อ OD600 ¼ 0.1 และต่อมา
ได้รับการเพิ่มเข้ามาใน triplicates ถึง 5 มล MRS น้ำซุปใน Microtube ในการ
ปรากฏตัวของแป้งที่สามความเข้มข้น (เช่น 0.2%, 0.4% และ 0.6%
w / v ) ระงับเซลล์เดียวกัน แต่ไม่มีแป้งถูกใช้เป็น
ตัวควบคุม ถัดไปเซลล์แขวนลอยที่ถูกวางไว้ในการเขย่า
ศูนย์บ่มเพาะที่ 200 รอบต่อนาทีในตำแหน่งหลอดเอียงเล็กน้อยเพื่อเพิ่ม
รายชื่อเซลล์ที่มีแป้งโดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับ waterinsoluble
Hi-ข้าวโพดเลี้ยงสัตว์ที่มีแนวโน้มที่แข็งแกร่งตะกอน หลังจาก
8 ชั่วโมงและ 24-H ฟักตัวของเชื้อด้วยแป้งที่เซลล์ที่มีชีวิต
ที่เหลืออยู่ในการระงับถูกระบุในบันทึก (CFU / มิลลิลิตร) โดย
วิธีการลดลงแผ่นโดยใช้อาหารเลี้ยงเชื้อ MRS หลังจาก 48 ชั่วโมงบ่มที่
37 องศาเซลเซียส.
2.2.2 การเตรียมและศึกษาสมบัติทางกายภาพของฟิล์ม LGG
ไมโครแคปซูล
LGG ไมโครไบโอฟิล์มถูกจัดทำขึ้นโดยการบ่ม 24 ชั่วโมง
ของไมโครแคปซูล planktonic LGG ใน MRS เสริม
0.1 M CaCl2 ปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อการทดลองไบโอฟิล์ม
ก่อตัว (เช่นความหนาแน่นของเซลล์เริ่มต้นในไมโครแคปซูล planktonic,
เวลาการบ่มเคลือบไคโตซาน) ได้รับการกล่าวถึงใน Cheow
และ Hadinoto (2013) ด้วยเหตุนี้พวกเขาไม่ได้ซ้ำแล้วซ้ำอีกที่นี่สำหรับ
ความกะทัดรัด ในเวลาสั้น ๆ ที่ไมโครแคปซูล LGG planktonic ได้จัดทำขึ้น
โดยวิธีการเจภายนอกที่ 75 มิลลิลิตรของการระงับในชั่วข้ามคืน
ของ planktonic LGG (OD600 ¼ 2.0) ถูกเพิ่มเข้ามาหลังจากที่สี่สิบเท่า
ลดสัดส่วนถึง 15 วิธีการแก้หมันมิลลิลิตรที่มี 1.5% (w / v) อัลจิเนต
0.5% (w / v) เหงือกตั๊กแตนถั่วและแป้งที่สามความเข้มข้นที่แตกต่างกัน
(เช่น 0.2%, 0.4% และ 0.6% w / v) ระงับเซลล์ผลลัพธ์
ถูกบันทึกอยู่ใน 100 หมัน 0.1 วิธีการแก้ปัญหามล M CaCl2 โดย
ละอองในอากาศและกระแสฟีดอัตรา 140 ลิตร / ชั่วโมงและ 3 มิลลิลิตร / นาที,
ตามลำดับ planktonic ไมโครแคปซูล LGG กำลังก่อตัวขึ้น
ทันทีเนื่องจากการทำงานร่วมกันระหว่างอัลจิเนตและCa2þไป
ในรูปแบบเจลแคลเซียมอัลจิเนต ไมโครแคปซูลที่ถูกปล่อยให้แข็งสำหรับ
30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียสหลังจากที่พวกเขาได้รับการกู้คืนจาก CaCl2
วิธีการแก้ปัญหาโดยการตกตะกอนของแรงโน้มถ่วง.
หลังจากนั้น planktonic ไมโครแคปซูล LGG ถูกบ่ม
เป็นเวลา 24 ชั่วโมงใน MRS น้ำซุปเสริมด้วย 0.1 M CaCl2 เพื่อส่งเสริม
การเจริญเติบโตของ มีความหนาแน่นสูงอาณานิคม LGG ไบโอฟิล์มภายในแคปซูล
รอบนอก LGG ไมโครไบโอฟิล์มหายแล้วโดย
การตกตะกอนของแรงโน้มถ่วงและล้างด้วยสารละลาย CaCl2 ต่อจากนั้น
ไมโครแคปซูลที่ถูกเคลือบด้วยไคโตซานโดยฟัก
ไมโครแคปซูลใน 0.4% (w / v) สารละลายไคโตซานที่ pH ¼ 6
เป็นเวลา 30 นาที LGG ไมโครไบโอฟิล์มเคลือบด้วยไคโตซาน
ถูกกู้คืนแล้วโดยการตกตะกอนของแรงโน้มถ่วงและล้างด้วย
วิธีการแก้ปัญหา CaCl2 เพื่อลบส่วนเกินไคโตซาน.
ความหนาแน่นของเซลล์เริ่มต้นของ LGG ไมโครไบโอฟิล์มได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ2.1 . วัสดุฉัน rhamnosus Gorbach โกลดิน ( ชนิด ) สายพันธุ์ ATCC 53103 ) คือซื้อจากประเภทคอลเลกชันวัฒนธรรมอเมริกันและสหรัฐอเมริกา )เกลือโซเดียมกรด Alginic และฆ่าเชื้อ UHT นมถั่วเหลืองซื้อจาก Alfa aesar ( USA ) และโย ( สิงคโปร์ ) , ตามลำดับเหงือกปาทังกาถั่ว , ไคโตซาน ( 50e190 kDa ) แคลเซียมคลอไรด์ ( CaCl2 )โซเดียมคลอไรด์ ( NaCl ) และก๊าซไฮโดรเจนคลอไรด์ ( HCl ) ซื้อจาก sigmaealdrich ( USA ) เกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS )Bacto วุ้น และ เดอ ชาย rogosa ชาร์ป ( นาง ) น้ำซุปที่ถูกซื้อจาก BD BIOSCIENCES ( สหรัฐอเมริกา ) ป้องกันแป้งในรูปแบบของไม่ละลายน้ำสูงปริมาณแป้งข้าวโพด ( หวัดดีข้าวโพด 260 ® ) คือเพื่อการกุศล โดย ingredion ( USA ) หวัดดีข้าวโพด 260 ®เป็น wellestablishedพรีไบโอติก ตามที่รายงานใน Desai พาวล์ และชา( 2004 ) ประกอบด้วย z66 % โลส ( คือพอลิเมอร์โซ่ตรงของดี กูลโคสหน่วยเชื่อมโยงโดย a-1,4-glycosidic พันธบัตร Z34 . % ) และอะไมโลเพคติน ( คือหน่วยดี กูลโคสพอลิเมอร์ของโซ่กิ่งเชื่อมโยงโดย a-1,4 และพันธบัตร a-1,6-glycosidic ) ที่มีน้ำหนักโมเลกุลในส่วนที่เกิน 10 , 000 g / mol ( หลิว รัมส์เดล และ corke , 1999 ) ข้าวโพดข้าวเหนียวแป้งในรูปของน้ำ octenyl ซัคซินิกแอนไฮไดรด์( ส่วนหนึ่ง ) - แป้งข้าวโพดดัด ( สวัสดีหมวก 100 ® ) ถูกบริจาคโดยingredion ( USA ) สวัสดีหมวก 100 ®ประกอบด้วย 100% อะไมโลเพคตินที่มีความหนืดน้ำหนักโมเลกุลเฉลี่ยของ 12 , 340 g / mol และความหนืดภายในของ 0.117 dl / g ในน้ำที่อุณหภูมิ 20 C ( dokic dokic , ,dapcevic & krstonosic , 2008 )2.2 . วิธีการ2.2.1 . ความอยู่รอดของชนิดสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำฟรีในการแสดงตนของแป้งฟรีเซลล์ของสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำชนิด ( เช่นปลูกไม่ขึ้น )โดยคืนบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส หลังจากนั้นในนาง 125 มิลลิลิตรวัฒนธรรมค้างคืนเจือจางเพื่อ od600 ¼ 0.1 และในภายหลังเพิ่ม 3 ซ้ำ 5 ml MRS broth ใน microtube ในการแสดงตนของแป้ง ( เช่น 3 ความเข้มข้น 0.2% , 0.4% และ 0.6 เปอร์เซ็นต์ .w / v ) การระงับเซลล์เดียวกัน แต่ไม่มีแป้ง ใช้เป็นการควบคุม ถัดไป , เซลล์แขวนลอยอยู่ในสั่นตู้อบที่ 200 รอบต่อนาทีในตำแหน่งเอียงเล็กน้อยเพื่อเพิ่มหลอดเซลล์ที่ติดต่อกับแป้ง โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำหรับ waterinsolubleหวัดดีข้าวโพดที่มีแนวโน้มแข็งแกร่ง ตะกอน หลังจากและประมาณ 24-h incubations กับแป้ง เซลล์ได้ที่เหลืออยู่ในจังหวะถูกระบุใน log CFU / ml ) โดยวางแผ่นโดยใช้นางวุ้นหลังจาก 48 ชั่วโมงบ่มที่37 .2.2.2 . การเตรียมและการศึกษาคุณสมบัติของฟิล์มชนิดกายภาพแคปซูลชนิดฟิล์มไมโครแคปซูลที่เตรียม 24-h การบ่มของไมโครแคปซูลชนิดสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำ นางเสริมในด้วย 0.1 M ผลิต . ปัจจัยที่มีอิทธิพลต่อฟิล์มทดลองรูปแบบ ( เช่นความหนาแน่นเซลล์เริ่มต้นในไมโครแคปซูลที่สิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำ ,เวลาในการบ่ม , เคลือบไคโตซาน ) ได้รับการกล่าวถึงใน cheowและ hadinoto ( 2013 ) , ดังนั้นพวกเขาไม่ซ้ำที่นี่การใช้คำที่สั้นกระชับ สั้น ๆ , เตรียมไมโครแคปซูลชนิดสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำโดยวิธีการเจลาตินภายนอกที่ 75 มิลลิลิตร ในชั่วข้ามคืน ระงับชนิดของสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำ ( od600 ¼ 2.0 ) ถูกเพิ่มเข้ามาหลังจากสิบพับการเจือจางสารละลายที่มี 15 ml หมัน 1.5 % ( w / v ) อัลจิเนต0.5% ( w / v ) เหงือกปาทังกาถั่ว และแป้งที่ความเข้มข้นต่าง ๆ( เช่น ร้อยละ 0.2 0.4 และ 0.6 % ( w / v ) เซลล์แขวนลอย ผลลัพธ์เพิ่มไปยัง 100 ml ผลิตโซลูชั่นโดยปราศจาก 0.1 โมลาร์ละอองในอากาศและอาหาร อัตราการไหล ของ 140 ลิตร / ชั่วโมงและ 3 มล. / นาทีตามลำดับ ไมโครแคปซูลชนิดสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำถูกสร้างขึ้นทันทีเนื่องจากการปฏิสัมพันธ์ระหว่างแคลเซียมอัลจิเนต และþเพื่อรูปแบบแคลเซียมแอลเจล ไมโครแคปซูลที่ถูกทำให้แข็งสำหรับ30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากที่พวกเขาหายจาก CaCแก้ไขโดยแรงโน้มถ่วง การตกตะกอนหลังจากนั้น ไมโครแคปซูลชนิดสิ่งมีชีวิตขนาดเล็กมากในน้ำถูกบ่ม24 ชั่วโมงใน MRS broth เติม 0.1 M ผลิตเพื่อส่งเสริมการเจริญเติบโตของความหนาแน่นสูงชนิดฟิล์มอาณานิคมภายในแคปซูลรอบนอก ส่วนฟิล์มชนิดแคปซูลแล้วหายโดยการตกตะกอนของแรงโน้มถ่วงและการล้างด้วยสารละลาย CaCl2 . ต่อมาไมโครแคปซูลที่ถูกเคลือบด้วยไคโตซาน โดยการแช่ไมโครแคปซูลใน 1% ( w / v ) ที่พีเอชของสารละลายไคโตแซน¼ 630 นาทีฟิล์มชนิดแคปซูลที่เคลือบด้วยไคโตซานแล้วกู้คืนโดยแรงโน้มถ่วงและล้างด้วยการตกตะกอนผลิตไคโตซานโซลูชั่นเพื่อลบส่วนเกินความหนาแน่นเซลล์เริ่มต้นของไมโครแคปซูลชนิดฟิล์มคือ