2.7. Western blotWhole muscle prote

2.7. Western blot
Whole muscle protein extraction, gel sample preparation and
Western blotting for desmin degradation were performed as described
by Kim, Huff-Lonergan, Sebranek, and Lonergan (2010). Polyacrylamide
electrophoresis gels (12.5%) were loaded with 40 μg of the extracted
protein sample per well, and transferred to a polyvinylidene fluoride
membrane (Immobilon-P, 0.45 μm pore size, Sigma, St. Louis, MO,
USA). Themembraneswere incubatedwith a primary antibody (monoclonal
anti-desmin antibody, D1033; Sigma, St. Louis, MO, USA) and a
secondary antibody (goat anti-mouse linked to horse radish peroxidase,
No. 170-6516, Bio-Rad Laboratories, Auckland, New Zealand). The
qualitative analysis for protein bands were performed using a chemiluminescent
detection kit (Pierce ECR Western Blotting Substrate, LF
144464A, Meridian Rd., Rockford, IL 61101, USA) and photographed
using G-Box: Chem HR 16 (Syngene, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7. เวสเทิร์นคืนในตากล้ามเนื้อทั้งหมดโปรตีนสกัด เตรียมตัวอย่างเจ และBlotting วิธีสำหรับย่อยสลาย desmin ตะวันตกดำเนินตามโดยคิม Huff โล Sebranek และโล (2010) Polyacrylamideเจ electrophoresis (12.5%) ถูกโหลด ด้วย μg 40 ของการแยกตัวอย่างโปรตีนต่อดี และโอนย้ายการฟลูออไรด์ polyvinylideneเมมเบรน (Immobilon P ขนาดรูขุมขน μm 0.45 ซิก St. Louis, MOสหรัฐอเมริกา) Themembraneswere incubatedwith แอนติบอดีหลัก (โมโนแอนติบอดีต่อต้าน-desmin, D1033 ซิกมา St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา) และรองแอนติบอดี (แพะป้องกันเมาส์กับม้าหัวผักกาด peroxidaseหมายเลข 170-6516 ห้องปฏิบัติการชีวภาพ Rad โอ๊คแลนด์ นิวซีแลนด์) ที่วิเคราะห์คุณภาพโปรตีนวงถูกดำเนินการโดยใช้การ chemiluminescentชุดตรวจ (เพียร์ซ ECR เวส blotting วิธีพื้นผิว LF144464A เมอริเดียนถนน ร็อคฟอร์ด IL 61101 สหรัฐอเมริกา) และถ่ายภาพใช้ G กล่อง: 16 ชั่วโมงเคมี (Syngene สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.7 เวสเทิร์ blot
สกัดโปรตีนของกล้ามเนื้อทั้งเตรียมตัวเจลและเวสเทิร์ blotting สำหรับการย่อยสลาย desmin ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้โดยคิมหอบ-เนอร์เกน, Sebranek และเนอร์เกน (2010) อะคริเลตเจลอิเล็ก (12.5%) ได้รับการเต็มไปด้วย 40 ไมโครกรัมของสารสกัดตัวอย่างโปรตีนต่อกันและโอนไปยังฟลูออไรPolyvinylidene เมมเบรน (Immobilon-P, 0.45 ไมโครเมตรขนาดรูขุมขน, Sigma, St. Louis, MO, USA) Themembraneswere incubatedwith แอนติบอดีหลัก (โมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้านdesmin, D1033; ซิกเซนต์หลุยส์ MO, USA) และแอนติบอดีรอง(แพะต่อต้านเมาส์ที่เชื่อมโยงกับ peroxidase หัวไชเท้าม้าเลขที่ 170-6516, ห้องปฏิบัติการ Bio-Rad, โอ๊คแลนด์นิวซีแลนด์) การวิเคราะห์เชิงคุณภาพสำหรับวงดนตรีที่โปรตีนถูกดำเนินการโดยใช้ chemiluminescent ชุดการตรวจสอบ (เพียร์ซ ECR ตะวันตกซับพื้นผิว, LF 144464A, เมริเดียนถฟอร์ด, IL 61101, USA.) และถ่ายภาพโดยใช้G-Box: เคมีทรัพยากรบุคคล 16 (Syngene สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . Western blot
ทั้งกล้ามเนื้อโปรตีนการสกัดตัวอย่างการเตรียมเจลและ Western blotting เพื่อการย่อยสลาย desmin

มีการปฏิบัติตามที่อธิบายไว้โดยคิมจริงๆ โลเนอร์แกน sebranek , และ โลเนอร์แกน ( 2010 ) โพลีอะคริลาไมด์เจลอิเลคโตรโฟรีซีส
( 12.5% ) ถูกโหลด ด้วยμ 40 กรัมของโปรตีนสกัด
ตัวอย่างต่อได้ดี และโอนไปยังีนฟลูออไรด์
เมมเบรน ( immobilon-p 0.45 μ M รูขุมขนขนาดSigma , เซนต์ หลุยส์ โม
สหรัฐอเมริกา ) themembraneswere เป็นหลัก ( incubatedwith แอนติบอดีแอนติบอดีต่อต้าน desmin โมโนโคลนอล
d1033 ; Sigma , St . Louis , MO , USA )
) มัธยมศึกษา ( แพะป้องกันเมาส์ที่เชื่อมโยงกับม้าหัวไชเท้า peroxidase
ไม่ 170-6516 ชีวภาพราดห้องปฏิบัติการ , โอ๊คแลนด์ นิวซีแลนด์ )
การวิเคราะห์เชิงคุณภาพสำหรับกลุ่มโปรตีน ) มีการใช้ chemiluminescent
ชุดตรวจจับ ( ECR Western blotting เจาะพื้นผิว , ถ้า
144464a เมริเดียน : Rockford , IL , 61101 , USA ) และถ่ายภาพ
ใช้ g-box : Chem HR 16 ( syngene , USA )