Cell culture. Cell cultures were es

Cell culture. Cell cultures were established as previously described [6], [8] and [9]. In brief, muscle tissue was minced, washed and dissociated for 60 min by three treatments with 0.05% trypsin–EDTA. The cells harvested were pooled and FCS was added to stop trypsination. The cells obtained were seeded for up-scaling on ECM-gel coated dishes after 30 min of preplating. Cell cultures were established in DMEM medium supplemented with 10% FCS, 50 U/ml penicillin, 50 μg/ml streptomycin and 1.25 μg/ml amphotericin B. After 24 h cell debris and non-adherent cells were removed by change of growth medium to DMEM supplemented with 2% FCS, 2% Ultroser G, 50 U/ml penicillin, 50 μg/ml streptomycin and 1.25 μg/ml amphotericin B. Cells were subcultured twice before final seeding. At 75% confluence, the growth medium was replaced by basal medium (DMEM supplemented with 2% FCS, 50 U/ml penicillin, 50 μg/ml streptomycin, 1.25 μg/ml amphotericin B, and 25 pmol/l insulin), in order to induce differentiation. Myotube cultures were used for analysis 5 days after onset of differentiation. The cells were cultured in humidified 5% CO2 atmosphere at 37 °C, and medium was changed every 2–3 days.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การเพาะเลี้ยงเซลล์ วัฒนธรรมเซลล์ก่ออธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [6], [8] และ [9] สังเขป กล้ามเนื้อถูกสับ ล้าง แล้วถูกสำหรับ 60 นาที โดยนวด 3 0.05% ทริปซิน – EDTA เซลล์ที่เก็บเกี่ยวได้ถูกทางถูกพู และ FCS เพิ่มหยุด trypsination เซลล์ที่ได้รับถูก seeded สำหรับขึ้นปรับขนาดหน้าจานเคลือบเจล ECM หลังจาก 30 นาทีของ preplating วัฒนธรรมเซลล์ก่อตั้งขึ้นใน DMEM เสริมกับ FCS 10%, 50 U/ml ยาเพนนิซิลลิน streptomycin μg/ml 50 และ μg 1.25 ml amphotericin B. หลังจาก 24 ชมเซลล์เศษและไม่มี adherent เซลล์ถูกลบ โดยเปลี่ยนแปลงเจริญเติบโตปานกลางถึง DMEM เสริมกับ FCS 2%, 2% Ultroser G, 50 U/ml ยาเพนนิซิลลิน การ 50 streptomycin μg/ml และ μg 1.25 ml amphotericin B. เซลล์ได้ subcultured สองครั้งก่อนสุดท้ายปลูก ที่ 75% บรรจบ เชื้อถูกแทนที่ ด้วยโรคปานกลาง (DMEM เสริม กับ FCS 2%, 50 U/ml ยาเพนนิซิลลิน 50 streptomycin μg/ml, 1.25 μg/ml amphotericin B อินซูลิน 25 pmol/l), เพื่อก่อให้เกิดการสร้างความแตกต่าง วัฒนธรรม Myotube ใช้สำหรับวิเคราะห์ 5 วันหลังจากเริ่มมีอาการของการสร้างความแตกต่าง เซลล์มีอ่างในบรรยากาศ 5% CO2 humidified ที่ 37 ° C และสื่อมีการเปลี่ยนแปลงทุก 2-3 วัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเพาะเลี้ยงเซลล์ เซลล์วัฒนธรรมที่ถูกจัดตั้งขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [6], [8] และ [9] ในช่วงสั้น ๆ เนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อถูกสับล้างและแยกตัวเป็นเวลา 60 นาทีโดยสามการรักษาด้วยวิธี trypsin-EDTA 0.05% เซลล์เก็บเกี่ยวได้ถูกรวบรวมและ FCS ถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อหยุด trypsination เซลล์ที่ได้รับเป็นเมล็ดสำหรับการปรับขึ้นไปบนจานเคลือบ ECM เจลหลังจาก 30 นาทีของ preplating เซลล์วัฒนธรรมที่ถูกจัดตั้งขึ้นใน DMEM กลางเสริมด้วย 10% FCS 50 U / มล penicillin, 50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร streptomycin และ 1.25 ไมโครกรัม / มล amphotericin บีหลังจาก 24 ชั่วโมงเศษของเซลล์และเซลล์ที่ไม่สานุศิษย์ที่ถูกถอดออกจากการเปลี่ยนแปลงของสื่อการเจริญเติบโตที่จะ DMEM เสริมด้วย 2% FCS, 2% Ultroser G, 50 U / มล penicillin, 50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร streptomycin และ 1.25 ไมโครกรัม / มล amphotericin เซลล์ B. ถูกเชื้อสองครั้งก่อนการเพาะสุดท้าย ที่ไหลมารวมกัน 75% สื่อการเจริญเติบโตก็ถูกแทนที่ด้วยสื่อพื้นฐาน (DMEM เสริมด้วย 2% FCS 50 U / มล penicillin, 50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร streptomycin, 1.25 ไมโครกรัม / มล amphotericin B, และ 25 pmol / ลิตรอินซูลิน) ในการสั่งซื้อ เพื่อก่อให้เกิดความแตกต่าง วัฒนธรรม myotube ถูกนำมาใช้สำหรับการวิเคราะห์ 5 วันหลังจากที่เริ่มมีอาการของความแตกต่าง เซลล์ที่ถูกเลี้ยงในบรรยากาศ CO2 ความชื้น 5% ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและขนาดกลางก็เปลี่ยนทุก 2-3 วัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์เพาะเลี้ยง เซลล์วัฒนธรรมขึ้นตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 6 ] , [ 8 ] และ [ 9 ] ในช่วงสั้น ๆ , เนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อถูกสับละเอียด ล้าง และ ทางใจ สำหรับ 60 นาที โดยการรักษาสามกับ 0.05 % ซิน– EDTA เซลล์ที่เก็บเกี่ยวได้และเพิ่มพู FCS เพื่อหยุด trypsination . เซลล์ที่ได้เมล็ดมาเกลาใน ECM เจลเคลือบจานหลังจาก 30 นาทีของ preplating .เซลล์วัฒนธรรมก่อตั้งขึ้นใน dmem เติม 10% FCS , 50 U / ml เพนนิซิลิน , 50 μ g / ml และ streptomycin 1.25 μ g / ml ยา หลังจาก 24 ชั่วโมงเศษเซลล์และไม่ติดเซลล์ถูกกำจัดโดยการเปลี่ยนแปลงของสื่อ dmem เสริม FCS 2% , 2% ultroser กรัม 50 U / ml เพนนิซิลิน , 50 μ g / ml และ streptomycin 1.25 μ g / ml amphotericin Bเซลล์มี subcultured สองครั้งก่อนสุดท้ายเมล็ด . 75% บรรจบ สื่อการเจริญเติบโตถูกแทนที่โดยแรกเริ่มปานกลาง ( ร้อยละ 2 dmem เสริม FCS , 50 U / ml เพนนิซิลิน , 50 μ g / ml streptomycin , 1.25 μ g / ml amphotericin B , และ 25 pmol / L อินซูลิน ) เพื่อให้เกิดความแตกต่าง . myotube วัฒนธรรมวิเคราะห์ 5 วัน หลังจากเริ่มมีอาการของความแตกต่าง .เซลล์เพาะเลี้ยงใน humidified 5% CO2 บรรยากาศที่ 37 ° C และกลางก็เปลี่ยนทุก 2 - 3 วัน