RNA extraction, first-strand cDNA s

RNA extraction, first-strand cDNA synthesis and cloning
RNA was isolated from the gill with TRIzol reagent (Gibco BRL,
Grand Island, NY) according to the manufacturer’s protocol. Total
RNA was precipitated in ethanol, and the RNA pellets were dissolved
in RNase-free water. The quantity and integrity of the
RNA were assessed by spectrophotometry and electrophoresis
through a 1.5% agarose gel. Single-strand cDNA was constructed
using Invitrogen reagents (Carlsbad, CA). Briefly, four micrograms
of total RNA were reverse transcribed to the first-strand cDNA with
oligo(dT)1218 priming and SuperScript II reverse transcriptase
(Gibco BRL) in a 20-ll reaction volume under the following incubation
conditions: 42 C for 60 min, 37 C for 15 min, and 70 C for
15 min to terminate the reaction. The resulting cDNA was used
as a template for the subsequent PCR amplification of the genes
that were used in the present study.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกอาร์เอ็นเอ การสังเคราะห์ cDNA สแตรนด์แรก และโคลนอาร์เอ็นเอที่ถูกแยกจากเหงือกกับ TRIzol รีเอเจนต์ (Gibco BRLเกาะแกรนด์ NY) ตามโพรโทคอลของบริษัทผู้ผลิต ผลรวมอาร์เอ็นเอตกตะกอนในเอทานอล และขี้อาร์เอ็นเอมีส่วนยุบในน้ำฟรี RNase ปริมาณและความสมบูรณ์ของการอาร์เอ็นเอถูกประเมิน โดย spectrophotometry และ electrophoresisถึง 1.5% agarose เจ สแตรนด์เดียว cDNA ถูกสร้างขึ้นใช้ reagents Invitrogen (คาร์ลส CA) สั้น ๆ สี่ microgramsอาร์เอ็นเอรวมมีย้อนทับศัพท์กับ cDNA สแตรนด์แรกด้วยด้วย oligo (dT) 1218 และ II ตัวยกกลับ transcriptase(Gibco BRL) ปริมาณปฏิกิริยาจะ 20 ภายใต้การบ่มต่อไปนี้เงื่อนไข: 42 C 60 นาที 37 C สำหรับ 15 นาที และ 70 C สำหรับ15 นาทีเพื่อหยุดปฏิกิริยา ใช้ cDNA ได้เป็นแม่แบบสำหรับขยาย PCR ต่อของยีนที่ถูกใช้ในการศึกษาปัจจุบัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสกัดอาร์เอ็นเอสังเคราะห์ cDNA แรกสาระและโคลน
อาร์เอ็นเอที่แยกได้จากปลาที่มี Trizol? น้ำยา (BRL Gibco,
แกรนด์ไอส์แลนด์นิวยอร์ก) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต รวม
อาร์เอ็นเอได้รับการตกตะกอนในเอทานอลและอาร์เอ็นเอเม็ดละลาย
ในน้ำ RNase ฟรี ปริมาณและความสมบูรณ์ของ
อาร์เอ็นเอที่ได้รับการประเมินโดย spectrophotometry และอิเล็ก
ผ่าน 1.5% agarose เจล ยีนเดี่ยวสาระถูกสร้างขึ้น
โดยใช้น้ำยา Invitrogen (คาร์ลสโก) สั้น ๆ สี่ไมโครกรัม
ของอาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกถ่ายทอดกลับไป cDNA แรกที่มีสาระ
Oligo (dT) 1218 รองพื้นและ transcriptase ยกครั้งที่สองกลับ
(Gibco BRL) ในปริมาณปฏิกิริยา 20 LL ภายใต้การบ่มต่อไปนี้
เงื่อนไข: 42 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาทีและ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา
15 นาทีที่จะยุติการเกิดปฏิกิริยา ยีนที่เกิดถูกนำมาใช้
เป็นแม่แบบสำหรับการขยาย PCR ที่ตามมาของยีน
ที่ถูกนำมาใช้ในการศึกษาในปัจจุบัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัด DNA strand cDNA และโคลน ก่อนสังเคราะห์
RNA ถูกแยกจากเหงือกด้วย trizol  Reagent ( BRL
gibco , เกาะแกรนด์ , นิวยอร์ก ) ตามขั้นตอนของผู้ผลิต อาร์เอ็นเอทั้งหมด
มาตกตะกอนในเอทานอลและ RNA เม็ดละลายในน้ำ
เลสฟรี ปริมาณและความสมบูรณ์ของ
RNA มีการประเมินโดยวิธี electrophoresis
ผ่านและเจล ( 1.5 %ถูกสร้างขึ้นโดยใช้ cDNA เส้นเดียว
Invitrogen สารเคมี ( Carlsbad , CA ) สั้น ๆ , 4 ไมโครกรัมของ RNA ทั้งหมดถูกถ่ายทอด
ย้อนกลับไปเส้นดีเอ็นเอครั้งแรกกับ
โอลิโก ( DT ) 1218 รองพื้นตัวยก 2 และ reverse transcriptase
( gibco BRL ) ใน 20 จะปฏิกิริยาปริมาณภายใต้เงื่อนไขดังต่อไปนี้ 1
: 42 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที , 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาที และ 70 C
15 นาทีเพื่อหยุดปฏิกิริยาผลดีเอ็นเอถูกใช้เป็นแม่แบบสำหรับ

ตามมา PCR แบบยีนที่ใช้ในการศึกษา .