RNAi of lipid droplet associated ge

RNAi of lipid droplet associated genes was performed for either the
“full lifetime”, from synchronized L1 animals, or “delayed start”, from
approximately 24 h past L1 when worms were washed and transferred
to RNAi plates. All animals were allowed to grow to the young adult
stage on RNAi plates and fixedNile red stainingwas performed in a similar
manner as described [33]. Nematodes were washed with PBS with
0.01% triton X-100 in a microcentrifuge tube. The supernatant was removed
and animals were fixed with 150 μl of 40% isopropanol at room
temperature for 3 min. The supernatantwas removedmanually, leaving
25 μl 40% isopropanol andwormpellet. To each sample 150 μl of freshly
prepared Nile red staining solution (6 μl Nile red stock solution of
0.5 mg/ml in acetone per 1 ml of 40% isopropanol) was added and the
tubes resealed and gently shaken in the dark for at least 2 h. Samples
were allowed to settle by gravity and all but 25 μl of Nile red dyewas removed
and washed with 1 ml of M9 buffer. Worms were mounted on
slides and imaged by fluorescent microscopy using a GFP/FITC filter.
All RNAi Nile red staining experiments were performed in triplicate
and blindly scored by at least two different individuals to assess alterations
in fat accumulation. Images for publication were viewed with
laser excitation at 488 and filtered at 495/535 nm(GFP excitation/emission)
and imaged on a Leica TCS SP5 confocalmicroscopewith a 63× oil
immersion lens. Images were processed identically using Adobe
Photoshop CS4.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

RNAi ของไขมันหยดที่เกี่ยวข้องมีดำเนินการใด"เต็มอายุการใช้งาน" จากการซิงโครไนส์สัตว์ L1 หรือรถไฟ "เริ่มต้น", จากประมาณ 24 h ผ่าน L1 เมื่อหนอนถูกล้าง และโอนย้ายการ RNAi แผ่น สัตว์ทุกตัวได้รับอนุญาตให้เติบโตในผู้ใหญ่เด็กขั้นแผ่น RNAi และดำเนินการคล้าย stainingwas fixedNile สีแดงลักษณะอธิบาย [33] Nematodes ถูกล้าง ด้วย PBS กับไตรตั้น 0.01% X 100 ในหลอด microcentrifuge Supernatant ถูกเอาออกและสัตว์ถูกคง มี μl 150 ของ isopropanol 40% ห้องอุณหภูมิใน 3 นาที Removedmanually supernatantwas ออกจาก25 μl isopropanol 40% andwormpellet แต่ละตัวอย่าง μl 150 ของสดสีแดงแม่น้ำไนล์พร้อมโซลูชัน (6 μl ไนล์แดงหุ้นโซลูชั่นของการย้อมสีเพิ่ม 0.5 mg/ml ในอะซิโตนต่อ 1 ml ของ isopropanol 40%) และท่อ resealed และเขย่าเบา ๆ ในความมืดในตัวอย่างน้อย 2 h.ได้รับอนุญาตให้ชำระ โดยแรงโน้มถ่วง และทั้งหมด แต่ μl 25 ของแม่น้ำไนล์ dyewas แดงเอาและหินกับ ml 1 บัฟเฟอร์ M9 หนอนถูกติดตั้งบนภาพนิ่ง และ imaged โดยใช้ตัวกรอง GFP/FITC microscopy เรืองแสงดำเนินการทดลอง staining RNAi ไนล์สีแดงทั้งหมดใน triplicateและทำอย่างคนตาบอด โดยบุคคลอื่นที่สองเพื่อประเมินการเปลี่ยนแปลงในการสะสมไขมัน รูปภาพสำหรับการเผยแพร่ถูกมองด้วยเลเซอร์ในการกระตุ้นที่ 488 และกรองที่ 495/535 นาโนเมตร (ในการกระตุ้น GFP มลพิษ)และ imaged ใน confocalmicroscopewith ไล TCS SP5 น้ำมัน 63 ×แช่เลนส์ ภาพที่ถูกประมวลผลเหมือนกันโดยใช้ AdobePhotoshop CS4

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

RNAi ของหยดไขมันยีนที่เกี่ยวข้องได้ดำเนินการอย่างใดอย่างหนึ่งสำหรับ
"อายุการใช้งานเต็มรูปแบบ" จากสัตว์ตรง L1 หรือ "ความล่าช้าในการเริ่มต้น"
จากประมาณ24 ชั่วโมงที่ผ่านมา L1
เมื่อหนอนถูกล้างและโอนไปยังแผ่นRNAi สัตว์ทุกตัวได้รับอนุญาตที่จะเติบโตไปยังผู้ใหญ่เวทีบนจาน RNAi และ fixedNile stainingwas แดงดำเนินการในลักษณะคล้ายกันลักษณะตามที่อธิบายไว้[33] ไส้เดือนฝอยถูกล้างด้วยพีบีเอสที่มี0.01% triton X-100 ในหลอดไมโคร สารละลายจะถูกลบออกและสัตว์ได้รับการแก้ไขด้วย 150 ไมโครลิตรของ isopropanol 40% ที่ห้องอุณหภูมิเป็นเวลา3 นาที supernatantwas removedmanually ออก25 ไมโครลิตร 40% andwormpellet isopropanol แต่ละกลุ่มตัวอย่าง 150 ไมโครลิตรของสดใหม่เตรียมสารละลายสีย้อมสีแดงแม่น้ำไนล์ (6 ไมโครลิตรไนล์แก้ปัญหาสต็อกสีแดง 0.5 mg / ml ในอะซีโตนต่อ 1 มิลลิลิตร 40% isopropanol) ถูกบันทึกและหลอดresealed และเขย่าเบา ๆ ในที่มืดเป็นเวลาอย่างน้อย 2 ชั่วโมง ตัวอย่างได้รับอนุญาตให้ชำระโดยแรงโน้มถ่วงและทั้งหมด แต่ 25 ไมโครลิตรของแม่น้ำไนล์ dyewas สีแดงเอาออกและล้างด้วย1 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์ M9 เวิร์มที่ถูกติดตั้งอยู่บนภาพนิ่งและถ่ายภาพโดยใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงใช้ GFP / กรอง FITC. ทั้งหมด RNAi ไนล์ทดลองย้อมสีแดงได้ดำเนินการในเพิ่มขึ้นสามเท่าและคะแนนสุ่มสี่สุ่มห้าอย่างน้อยสองคนที่แตกต่างกันในการประเมินการเปลี่ยนแปลงในการสะสมไขมัน สำหรับการตีพิมพ์ภาพที่ถูกมองว่ามีการกระตุ้นด้วยแสงเลเซอร์ที่ 488 และกรองที่ 495/535 นาโนเมตร (GFP กระตุ้น / ปล่อยก๊าซเรือนกระจก) และถ่ายภาพใน Leica TCS SP5 confocalmicroscopewith 63 ×น้ำมันเลนส์แช่ ภาพที่ถูกประมวลผลเหมือนกันโดยใช้ Adobe Photoshop CS4

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

RNAi ของไขมันแตกตัวที่ยีนแสดงอย่างใดอย่างหนึ่ง
เต็ม " ชีวิต " จากสัตว์ L1 ตรงกันหรือ " ล่าช้าเริ่มต้น " จาก
ประมาณ 24 ชั่วโมงผ่าน L1 เมื่อหนอนถูกล้างและโอน
เพื่อหาแผ่น สัตว์ทั้งหมดได้รับอนุญาตให้ขึ้นเวทีผู้ใหญ่
หนุ่มบนจานและหา fixednile สีแดง stainingwas ดำเนินการในลักษณะที่คล้ายกัน
ตามที่อธิบายไว้ [ 33 ]พยาธิตัวกลมคือล้างด้วย pbs ด้วย
0.01 % Triton X-100 ในหลอดไมโครเซนตริฟิวจ์ . ที่นำออก
และสัตว์ถูกกำหนดด้วย 150 μผม 40% ไอโซโพรพานอลที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 3 นาที

supernatantwas removedmanually ออก 25 μ L 40 % ไอโซโพรพานอล andwormpellet . ตัวอย่างใหม่ 150 μ L
เตรียมไนล์เรด staining โซลูชั่น ( 6 μหนูไนล์เรดโซลูชั่นหุ้นของ
05 mg / ml ) ต่อ 1 มิลลิลิตร 40% Name ) คือการเพิ่มและ
resealed และค่อยๆเขย่าหลอดในที่มืดเป็นเวลาอย่างน้อย 2 ตัวอย่าง H .
ได้รับอนุญาตให้ตกลงตามแรงโน้มถ่วง และทั้งหมด แต่μ 25 ลิตร ไนล์ dyewas สีแดงออก และล้างด้วย
1 มิลลิลิตรของจังหวัดตาก บัฟเฟอร์ หนอนติดบนสไลด์และอื่นๆโดยกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์
ใช้ GFP /
fitc กรองทั้งหมดหาไนล์เรด staining ทดลองทั้งสามใบ
และสุ่มสี่สุ่มห้าคะแนนโดยอย่างน้อยสองบุคคลที่แตกต่างกันเพื่อประเมินการเปลี่ยนแปลง
ในการสะสมไขมัน ภาพสำหรับสิ่งพิมพ์ มีความเห็น ด้วยเลเซอร์ที่กระตุ้น
แล้วกรองที่ 495 / 535 nm ( GFP และการกระตุ้น / )
อื่นๆใน sp5 Leica TCS confocalmicroscopewith 63 ×น้ำมัน
แช่เลนส์ภาพที่ถูกประมวลผลโดยใช้โปรแกรม Adobe Photoshop CS4 เหมือนกัน

.