Quantitative determination of biofi

Quantitative determination of biofilm was made using microtiter plate adhesion assay in accordance with Stepanovic et al. (2000); Perez et al. (2011); Mulla and Revdiwala (2011) with some modifications. Briefly, three to five colonies were suspended with 5 ml of Trypticasesoy broth (TSB) (HiMedia, India) and incubated for 24 hrs. Then, diluted and adjusted to 0.5 McFarland turbidity standards to reach 105 CFU/ml. An aliquot of 200 μL of diluted bacterial suspension with 0.25% glucose (BDH, England), was added to each well of 96-well flat-bottomed polystyrene microtitre plates (Div.Becton, Dickinson &Co. Oxnard ,California, USA) and incubated for 18-24 hrs. at 37°C. Media with suspended bacteria were then removed; the plates washed carefully 3-4 times with sterile distilled water and air-dried, then stained with 200 μL of 0.9% crystal violet (Fluka, Switzerland). After washing the dye, the attached bacteria solubilized with 95% ethanol and the optical density of the adherent biofilm was determined twice with a filter of 450/630nm in ELISA reader (STAT-FAX 3200, USA). In our experiment 200 μL of TSB broth with 0.25% glucose were used as a negative control to obtain a background absorbance, which was then deducted from absorbance values obtained from the wells containing study isolates. All isolates were tested in triplicate

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำการหาปริมาณของ biofilm ใช้ทดสอบการยึดเกาะแผ่น microtiter ตาม Stepanovic et al. (2000); เปเรซและ al. (2011); Mulla และ Revdiwala (2011) พร้อมเปลี่ยนแปลงบางอย่าง สั้น ๆ อาณานิคมสามถึงห้าระงับ ด้วย 5 ml ของน้ำซุป Trypticasesoy (TSB) (HiMedia อินเดีย) และได้รับการกก 24 ชั่วโมง แล้ว ปรับลด และปรับปรุงมาตรฐานความขุ่น McFarland 0.5 ถึง 105 อาหรับ/ml ส่วนลงตัวของ μL 200 ปรับลดเชื้อแบคทีเรียระงับด้วย 0.25% กลูโคส (BDH อังกฤษ), ถูกเพิ่มเข้าไปแต่ละของดี 96 ชีวิตสไต microtitre แผ่น (Div.Becton สัน และบริษัท Oxnard แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา) และได้รับการกก 18-24 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส แล้วออกสื่อ ด้วยแบคทีเรียระงับ แผ่นล้าง 3 - 4 ครั้งอย่างระมัดระวัง ด้วยน้ำกลั่นที่ผ่านการฆ่าเชื้อและ μL 200 air-dried แล้วย้อมด้วยของ 0.9% คริสตัลม่วง (Fluka สวิตเซอร์แลนด์) หลังจากล้างสีย้อม แบคทีเรียแนบ solubilized ด้วยเอทานอล 95% และความหนาแน่นออปติคัลของ biofilm สาวกพิจารณาสอง ด้วยตัวกรอง 450/630nm ใน ELISA อ่าน (สถิติโทรสาร 3200 สหรัฐอเมริกา) ใน μL 200 เราทดลองของ TSB ซุป 0.25% กลูโคสใช้เป็นตัวควบคุมลบ absorbance ที่พื้นหลัง ซึ่งถูกหักออกจากค่า absorbance ที่ได้จากหลุมที่ประกอบด้วยแยกศึกษาแล้ว ขอรับ แยกทั้งหมดทดสอบลข้อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หาปริมาณไบโอฟิล์มที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้แผ่นไมโครยึดเกาะการทดสอบสอดคล้องกับ Stepanovic et al, (2000); เปเรซ, et al (2011); Mulla และ Revdiwala (2011) มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง ในเวลาสั้น ๆ 3-5 อาณานิคมถูกระงับมี 5 มิลลิลิตร Trypticasesoy น้ำซุป (TSB) (HIMEDIA อินเดีย) ​​และบ่มเป็นเวลา 24 ชั่วโมง จากนั้นปรับลดและปรับ 0.5 McFarland มาตรฐานความขุ่นไปถึง 105 CFU / ml หาร 200 ไมโครลิตรของการระงับแบคทีเรียเจือจางด้วยกลูโคส 0.25% (BDH อังกฤษ) ถูกบันทึกอยู่ในบ่อที่ 96 หลุมที่ราบต่ำโฟมแผ่น microtitre (Div.Becton ดิกคินสัน & co. Oxnard, California, USA) แต่ละคนและบ่ม สำหรับ 18-24 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส สื่อที่มีแบคทีเรียที่ถูกระงับการถูกถอดออกแล้ว; จานล้างอย่างระมัดระวัง 3-4 ครั้งด้วยน้ำกลั่นผ่านการฆ่าเชื้อและอากาศแห้งย้อมสีแล้วกับ 200 ไมโครลิตรของคริสตัลสีม่วง 0.9% (Fluka วิตเซอร์แลนด์) หลังจากล้างสีย้อมแบคทีเรียที่แนบมาละลายกับเอทานอล 95% และความหนาแน่นของแสงของไบโอฟิล์มสานุศิษย์ถูกกำหนดเป็นครั้งที่สองที่มีตัวกรอง 450 / 630nm ในวิธี ELISA อ่าน (STAT-FAX 3200, สหรัฐอเมริกาบริการ) ในการทดลองของเรา 200 ไมโครลิตรของ TSB น้ำซุปที่มีน้ำตาลกลูโคส 0.25% ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงลบที่จะได้รับการดูดกลืนแสงพื้นหลังซึ่งถูกหักออกจากค่าการดูดกลืนแสงที่ได้รับจากบ่อที่มีการศึกษาแยก ไอโซเลททั้งหมดถูกทดสอบในเพิ่มขึ้นสามเท่า