The incorporation and detection of

The incorporation and detection of BrdU, during the S-phase of
a cell cycle, has been used as amitotic marker in studies of cell proliferation
(Lee et al., 2003; Benton et al., 2008; Song et al., 2009).
The AGs from prawns injected with BrdU (Roche Applied Science,
Mannheim, Germany) were fixed in ice-cold 4% paraformaldehyde
in 0.1M PBS, pH 7.4, overnight, washed with 70% ethanol, and
then dehydrated in a graded serial ethanol, and finally embedded
in paraffin blocks. AGs were sectioned at 5m and the sections
placed onto slides coated with silane solution, and dried overnight
at 37 ◦C. The incorporated BrdU was detected using a BrdU labeling
and detection kit II (Roche Applied Science, Mannheim, Germany).
First, the sections were deparaffinized and rehydrated by washing
three times with washing buffer (10mM phosphate-buffered
saline, PBS). The sections were then incubated with anti-BrdU for
30 min at 37 ◦C. Subsequently, the sections were incubated with
anti-mouse IgG-alkaline phosphatase for 30 min at 37 ◦C, washed
three times, and the color was developed by incubation in NBT/BCIP
substrate solution at 25 ◦C for 15 min, according to the manufacturer’s instructions. The sections were washed, mounted with
Permount, and examined for labeled cells using a Nikon Eclipse
E600 microscope equipped with a Nikon digital camera DXM1200

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

จดทะเบียนและตรวจพบ BrdU ระหว่างระยะ S ของวงจรเซลล์ มีการใช้เป็นเครื่องหมาย amitotic ในการศึกษาเซลล์(Lee et al. 2003 เบนตัน et al. 2008 เพลง et al. 2009)AGs จากกุ้งฉีด ด้วย BrdU (วิทยาศาสตร์ประยุกต์โรชมานไฮม์ ประเทศเยอรมนี) ได้รับการแก้ไขในฉ่ำ 4% paraformaldehydeใน PBS 0.1M, pH 7.4 ค้างคืน ล้าง ด้วย 70% เอทานอล และแล้ว อบแห้งในเอทานอลตอที่จัดระดับ และฝังตัวในที่สุดในพาราฟินบล็อก AGs ถูกจัดแบ่งเป็นส่วน ๆ ที่ 5 ม.และส่วนวางลงบนสไลด์ที่เคลือบด้วยไซเลน และแห้งที่ 37 ◦C พบ BrdU รูปแบบบริษัทโดยใช้การติดฉลาก BrdUและชุดตรวจ II (วิทยาศาสตร์ประยุกต์โรช มานไฮม์ เยอรมนี)ครั้งแรก ส่วน deparaffinized และ rehydrated โดยซักผ้าสามเท่ากับล้างบัฟเฟอร์ (10mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์เกลือ PBS) ส่วนได้รับการกกแล้วกับ BrdU ป้องกันสำหรับ30 นาทีที่ 37 ◦C ต่อมา ส่วนได้รับการกกด้วยล้างป้องกันเมาส์ IgG ด่าง phosphatase ที่ 37 ◦C, 30 นาทีสามเท่า และสีพัฒนา โดยใน NBT/BCIPแก้ปัญหาพื้นผิวที่ 25 ◦C 15 นาที ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ส่วนถูกล้าง ติดตั้งPermount และตรวจสอบสำหรับติดป้ายเซลล์ใช้ Eclipse เป็น NikonE600 กล้องจุลทรรศน์พร้อมกล้องดิจิตอล Nikon DXM1200

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การรวมตัวและการตรวจสอบของ BrdU ระหว่าง S-ขั้นตอนของ
วงจรมือถือได้ถูกนำมาใช้เป็นเครื่องหมาย amitotic ในการศึกษาการเพิ่มจำนวนเซลล์
(Lee et al, 2003;. เบนตัน et al, 2008;.. เพลง et al, 2009) .
กลุ่มโฆษณาจากกุ้งฉีดด้วย BrdU (Roche วิทยาศาสตร์ประยุกต์
Mannheim, เยอรมนี) ได้รับการแก้ไขในเย็น paraformaldehyde 4%
ใน 0.1M พีบีเอสพีเอช 7.4, ค้างคืน, การล้างด้วยเอทานอล 70% และ
จากนั้นแห้งในเอทานอลอนุกรมอย่างช้า ๆ และในที่สุดก็ฝัง
ในบล็อกพาราฟิน กลุ่มโฆษณาถูกแบ่งที่ 5? เมตรและส่วน
ที่วางลงบนสไลด์เคลือบด้วยสารละลายไซเลนและแห้งค้างคืน
ที่ 37 ◦C BrdU ที่จดทะเบียนถูกตรวจพบโดยใช้การติดฉลาก BrdU
และการตรวจสอบชุดที่สอง (Roche วิทยาศาสตร์ประยุกต์ Mannheim, เยอรมนี).
ครั้งแรกส่วนที่ถูก deparaffinized และคืนรูปโดยการล้าง
สามครั้งด้วยบัฟเฟอร์ซักผ้า (10 mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์
น้ำเกลือพีบีเอส) ส่วนที่ถูกบ่มแล้วกับการป้องกัน BrdU สำหรับ
30 นาทีที่ 37 ◦C ต่อจากนั้นส่วนที่ถูกบ่มกับ
phosphatase ป้องกันเมาส์ IgG ด่างเป็นเวลา 30 นาทีที่ 37 ◦Cล้าง
สามครั้งและสีได้รับการพัฒนาโดยการบ่มใน NBT / BCIP
วิธีการแก้ปัญหาสารตั้งต้นที่ 25 ◦Cเป็นเวลา 15 นาทีตามที่ คำแนะนำของผู้ผลิต ส่วนที่ถูกล้างติดตั้งกับ
Permount และการตรวจสอบสำหรับเซลล์ที่มีป้ายกำกับใช้ Nikon Eclipse
กล้องจุลทรรศน์ E600 มาพร้อมกับ DXM1200 กล้องดิจิตอล Nikon

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ประสานและตรวจสอบ brdu ในระหว่าง s-phase ของเซลล์รอบ ถูกนำมาใช้เป็นเครื่องหมายในการ amitotic การศึกษาเซลล์( ลี et al . , 2003 ; เบนตัน et al . , 2008 ; เพลง et al . , 2009 )ที่ลดลงจากกุ้งฉีด brdu ( โรชวิทยาศาสตร์ประยุกต์ ,Mannheim , เยอรมัน ) มีค่าคงที่ในเย็น 4% พาราฟอร์มาลดิไฮด์ใน 0.1m PBS pH 7.4 ค้างคืน ล้างด้วยแอลกอฮอล์ 70 % และแล้วอบแห้งในระดับต่อเนื่อง เอทานอล และในที่สุดที่ฝังตัวในพาราฟินบล็อก รุ่นที่ 5 ถูกตัด และส่วนต่าง ๆวางลงบนสไลด์ที่เคลือบด้วยสารละลายไซเลน และค้างคืน แห้ง37 ◦ C รวม brdu ถูกตรวจพบการใช้ brdu การติดฉลากและชุด 2 ตรวจจับ ( โรชวิทยาศาสตร์ประยุกต์ Mannheim , เยอรมัน )ก่อน ส่วนที่เป็น deparaffinized และได้ทำการ รีไฮเดรทมด้วยเครื่องซักผ้าครั้งที่สามกับล้างบัฟเฟอร์ ( 10mm ฟอสเฟตบัฟเฟอร์( พีบีเอส ) ส่วน แล้วแยก brdu สำหรับป้องกัน30 นาทีที่ 37 ◦ซี. ต่อมาส่วนที่ถูกบ่มด้วยป้องกันเมาส์ IgG ระโยงระยางสำหรับ 30 นาทีที่ 37 ◦ C , ล้างสามครั้ง และสีที่ถูกพัฒนาโดยบ่มใน NBT / bcipใช้โซลูชันที่ 25 ◦เป็นเวลา 15 นาที ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ส่วนที่ถูกล้าง ติดตั้งกับpermount และตรวจสอบป้ายเซลล์ใช้ Nikon คราสe600 กล้องจุลทรรศน์พร้อมกล้องดิจิตอล dxm1200