Our results became even more intrig

Our results became even more intriguing upon analysis of
Ivyp inhibitory activity toward engineered variants 1D, 1F, and
2A. We were surprised to find that, compared to hLYZ, all three
variants were significantly more susceptible to Ivyp inhibition
(∼80-, 15-, and 7-fold, respectively, Table 1). Among the
engineered variants, there appeared to be some correlation
between evasion of Ivyc and Ivyp. Higher Ki
values for the Ivyc
target inhibitor were associated with higher Ki
values for the
Ivyp homologue. However, even the most effective Ivyc escape
variant 2A underperformed with respect to Ivyp inhibition. This
unexpected observation underscores the extent of the challenge
faced in seeking to design lysozymes that might be broadly
evasive toward pathogen derived inhibitors. It is now evident
that the solutions to avoiding one inhibitory protein may not
necessarily transfer to other inhibitors, irrespective of any
structural or mechanistic homologies.
Bactericidal Activity toward E. coli. We next assessed
whether the Ivy-evasive properties of the engineered variants
would translate into improved antibacterial activity against E.
coli. As single agents, lysozymes are poorly active against E.
coli,
13
and we therefore conducted quantitative culture
experiments using combinations of our lysozymes and LL37,
a membrane disrupting antimicrobial peptide that acts
synergistically with lysozyme in time-kill experiments.
34
The
variants’ bactericidal activities toward E. coli correlated with
their Ivyc evasive capacities, where higher Ivyc Ki
values (Table
1) were associated with greater % bacterial killing (Figure 4A,
left). Counter to expectations, however, variants 1D and 1F
were substantially less bactericidal than wild type hLYZ, and 2A
was at best equivalent to wild type hLYZ. To account for the
fact that the engineered variants possessed reduced inherent
activity compared to hLYZ, we next normalized the cell kill data
to the enzymes’ relative lytic rates in the absence of inhibitor
(Figure 4A, right). In the context of this correction, variant 2A
was easily the most effective antibacterial treatment, having 2.5-
fold greater normalized activity than hLYZ. However, variants
1D and 1F continued to underperform relative to the wild type
enzyme. As a result, and interestingly, it was evident that the
antibacterial efficacy of the engineered enzymes was dominated
by their Ivyc evasive properties, as opposed to their inherent
lytic capacities under noninhibitory conditions.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลของเรากลายเป็นยิ่งน่าเมื่อวิเคราะห์Ivyp ลิปกลอสไขกิจกรรมไปยังตัวแปรออกแบบ 1D, 1F และ2A. เราไม่แปลกใจที่ เปรียบเทียบกับ hLYZ, find ทั้งสามตัวแปรมีมากไวต่อการยับยั้ง Ivyp significantly(∼80- 15 และ 7-fold ตามลำดับ ตารางที่ 1) ระหว่างตัวแปร การออกแบบทางวิศวกรรมมีปรากฏ ว่าความสัมพันธ์บางอย่างระหว่างการหลบหลีกของ Ivyc และ Ivyp สูงกี่ค่า Ivycเป้าหมายผลเกี่ยวข้องกับกี่สูงค่าสำหรับการIvyp homologue อย่างไรก็ตาม แม้แต่ effective ส่วนใหญ่หนี Ivyc2A แปร underperformed กับ Ivyp ยับยั้ง นี้สังเกตคาด underscores ขอบเขตของความท้าทายเผชิญในการแสวงหาการออกแบบ lysozymes ที่อาจอย่างกว้างขวางว่าไปศึกษามา inhibitors ขณะนี้เห็นได้ชัดว่าโซลูชั่นเพื่อหลีกเลี่ยงโปรตีนหนึ่งลิปกลอสไขอาจไม่จำเป็นต้องโอนย้ายไปที่อื่น inhibitors ไม่มีโครงสร้าง หรือกลไกการทำ homologiesกิจกรรม bactericidal ต่อ E. coli เราประเมินต่อไปว่าไอวี่ว่าคุณสมบัติของตัวแปรออกแบบจะแปลเป็นกิจกรรมดีขึ้นต้านเชื้อแบคทีเรียกับอีcoli เป็นตัวแทนเดียว lysozymes อยู่ไม่ดีกับอีcoli13และเราดำเนินการวัฒนธรรมเชิงปริมาณดังนั้นทดลองใช้ชุด lysozymes และ LL37เมมเบรนเป็นเพปไทด์จุลินทรีย์ที่ทำหน้าที่ควบเป็น มี lysozyme ในทดลองฆ่าเวลา34ที่ของตัวแปรกิจกรรม bactericidal ต่อ correlated กับ E. coliกำลังของพวกเขาว่า Ivyc ที่สูง Ivyc Kiค่า (ตาราง1) เกี่ยวข้องกับค่า%ที่แบคทีเรียฆ่า (รูปที่ 4Aซ้าย) เคาน์เตอร์เพื่อความคาดหวัง อย่างไรก็ตาม ตัวแปร 1D และ 1Fมีมากน้อย bactericidal มากกว่าป่าชนิด hLYZ และ 2Aถูกที่สุดเทียบเท่ากับชนิดป่า hLYZ การบัญชีสำหรับการความจริงที่ต้องมีตัวแปรออกแบบลดลงโดยธรรมชาติกิจกรรมเปรียบเทียบกับ hLYZ เราถัดไปตามปกติข้อมูลฆ่าเซลล์ของเอนไซม์ lytic อัตราสัมพัทธ์ของสารยับยั้ง(รูปที่ 4A ขวา) ในบริบทของการแก้ไขนี้ 2A แปรเป็นที่สุด effective ต้านเชื้อแบคทีเรียการรักษา มี 2.5 -พับกิจกรรมมาตรฐานมากขึ้นกว่า hLYZ อย่างไรก็ตาม ตัวแปร1D และ 1F ยังคง underperform สัมพันธ์ชนิดป่าเอนไซม์ ดังนั้น และเป็นเรื่องน่า สนใจ ไม่ชัดที่จะefficacy ต้านเชื้อแบคทีเรียของเอนไซม์ออกแบบถูกครอบงำคุณสมบัติว่า Ivyc ตรงข้ามกับพวกเขาโดยธรรมชาติกำลัง lytic ภายใต้เงื่อนไข noninhibitory

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลของเรากลายเป็นที่น่าสนใจมากขึ้นอยู่กับการวิเคราะห์
การยับยั้ง Ivyp ที่มีต่อการออกแบบสายพันธุ์ 1D, 1F และ
2A เราต้องประหลาดใจที่ fi ครั้งว่าเมื่อเทียบกับ hLYZ ทั้งสาม
สายพันธุ์ได้อย่างมีนัยสำคัญอ่อนแอมากขึ้นเพื่อยับยั้ง Ivyp
(~80-, 15, และ 7 เท่าตามลำดับตารางที่ 1) ท่ามกลาง
สายพันธุ์วิศวกรรมดูเหมือนจะมีความสัมพันธ์บางอย่าง
ระหว่างการหลีกเลี่ยง Ivyc และ Ivyp สูง Ki
ค่าสำหรับ Ivyc
ยับยั้งเป้าหมายที่เกี่ยวข้องกับ Ki สูง
ค่าสำหรับ
Ivyp คล้ายคลึงกัน อย่างไรก็ตามแม้ส่วนใหญ่จฉฉ ective Ivyc หลบหนี
ตัวแปร 2A underperformed ที่เกี่ยวกับการยับยั้ง Ivyp นี้
สังเกตที่ไม่คาดคิดขีดขอบเขตของความท้าทายที่
ต้องเผชิญในการแสวงหาการออกแบบ lysozymes ที่อาจจะมีในวงกว้าง
ซึ่งหลบหนีไปยังยับยั้งการติดเชื้อที่ได้มา คือตอนนี้เห็นได้ชัด
ว่าการแก้ปัญหาที่จะหลีกเลี่ยงการยับยั้งโปรตีนหนึ่งอาจไม่
จำเป็นต้องถ่ายโอนไปยังยับยั้งอื่น ๆ โดยไม่คำนึงถึงใด ๆ
homologies โครงสร้างหรือกลไก.
กิจกรรมที่มีต่อการฆ่าเชื้อแบคทีเรียอีโคไล ต่อไปเราประเมิน
ว่าคุณสมบัติ Ivy-ข้อแก้ตัวของตัวแปรการออกแบบ
จะแปลเป็นฤทธิ์ต้านแบคทีเรียที่ดีขึ้นกับอี
โคไล ในฐานะที่เป็นตัวแทนเดียว lysozymes มีการใช้งานได้ไม่ดีกับอี
โคไล,
13
และดังนั้นเราจึงดำเนินการเชิงปริมาณวัฒนธรรม
การทดลองโดยใช้การรวมกันของเราและ lysozymes LL37,
เมมเบรนกระทบเปปไทด์ต้านจุลชีพที่ทำหน้าที่
ร่วมกับไลโซไซม์ในการทดลองครั้งที่ฆ่า.
34 สายพันธุ์ 'ฆ่าเชื้อแบคทีเรีย กิจกรรมที่มีต่อเชื้อ E. coli มีความสัมพันธ์กับความสามารถ Ivyc ข้อแก้ตัวของพวกเขาที่สูง Ki Ivyc ค่า (ตารางที่1) มีความสัมพันธ์กับการฆ่าเชื้อแบคทีเรีย% มากขึ้น (รูปที่ 4A, ซ้าย) สวนทางกับความคาดหวัง แต่สายพันธุ์ 1D และ 1F เป็นอย่างมากฆ่าเชื้อแบคทีเรียน้อยกว่า hLYZ ชนิดป่าและ 2A เป็นที่ที่ดีที่สุดเทียบเท่ากับป่าประเภท hLYZ บัญชีสำหรับความจริงที่ว่าสายพันธุ์วิศวกรรมสิงโดยธรรมชาติที่ลดลงเมื่อเทียบกับกิจกรรม hLYZ เราต่อไปปกติข้อมูลเซลล์ฆ่าเอนไซม์อัตรา lytic ญาติในกรณีที่ไม่มีสารยับยั้ง(รูปที่ 4A, ขวา) ในบริบทของการแก้ไขนี้, 2A แตกต่างได้อย่างง่ายดายมากที่สุดจฉฉรักษาต้านเชื้อแบคทีเรีย ective มี 2.5- พับกิจกรรมปกติมากกว่า hLYZ แต่สายพันธุ์1D และ 1F ยังคงต่ำกว่าเมื่อเทียบกับป่าประเภทเอนไซม์ เป็นผลและที่น่าสนใจก็เห็นได้ชัดว่าการต้านเชื้อแบคทีเรียอี FFI cacy ของเอนไซม์ออกแบบถูกครอบงำโดย Ivyc คุณสมบัติข้อแก้ตัวของพวกเขาเมื่อเทียบกับธรรมชาติของพวกเขาความสามารถ lytic ภายใต้เงื่อนไข noninhibitory

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลของเราก็ยิ่งน่าสนใจ ตามการวิเคราะห์ของ
ivyp ยับยั้งกิจกรรมทางวิศวกรรม 1D ชั้น 1 สายพันธุ์ , และ
2A . เรารู้สึกประหลาดใจจึง ND นั้น เมื่อเทียบกับ hlyz ทั้งสามจึงลดลงอย่างมีนัยสําคัญเมื่อ signi
แปรเป็นอ่อนแอมากขึ้นเพื่อ ivyp ยับยั้ง
( ∼ 80 - 15 - และ 7-fold ตามลำดับ ตาราง 1 ) ระหว่าง
วิศวกรรมแปร มีปรากฏ จะมีความสัมพันธ์
ระหว่างปัญหาของ ivyc และ ivyp . ค่าคิ

เป้าหมายที่สูงสำหรับ ivyc ซึ่งสัมพันธ์กับค่าคิ

ivyp ที่สูงสำหรับผิว . อย่างไรก็ตาม แม้ที่สุด E ff ective ivyc หนี
2A จากตัวแปรเกี่ยวกับ ivyp การยับยั้ง สังเกตที่ไม่คาดคิดนี้

ถึงขอบเขตของความท้าทายเผชิญในการแสวงหาการออกแบบ lysozymes อาจเป็นวงกว้าง
เลี่ยงต่อเชื้อโรคและตัวยับยั้ง คือตอนนี้เห็นได้ชัด
ที่โซลูชั่นเพื่อหลีกเลี่ยงหนึ่งยับยั้งโปรตีนอาจจะไม่ต้องย้ายไปจากอื่น ๆ

ไม่ใด ๆโครงสร้างหรือกลไก homologies .
กิจกรรมต่อแบคทีเรีย E . coli . เราประเมินว่า ไอวี่ เลี่ยง ๆต่อไป

คุณสมบัติของตัวแปรจะแปลลงในการปรับปรุงกิจกรรมต่อต้านแบคทีเรีย E .
coli เป็นตัวแทนเดียว lysozymes งานใช้งานกับ E .
(

13 และเราจึงดำเนินการทดลองโดยใช้ชุดของ lysozymes
เชิงวัฒนธรรม และ ll37 ของเรา
เยื่อขัดขวางจุลชีพเปปไทด์ที่ทำหน้าที่
synergistically กับไลโซไซม์ในเวลาฆ่า 34


ทดลองสายพันธุ์แบคทีเรีย E . coli ' กิจกรรมที่มีความสัมพันธ์กับ
ivyc เลี่ยง ๆความสามารถของพวกเขาที่ ivyc สูงกว่าค่า (

คิ ตาราง 1 ) ที่เกี่ยวข้องกับมากกว่า % แบคทีเรียฆ่า ( รูปซ้าย 4A ,
) สวนทางกับความคาดหวัง อย่างไรก็ตามตัวแปร 1D และ 1f
มีแบคทีเรียมากกว่าป่าชนิด hlyz น้อยลงอย่างมาก และ 2A
เท่ากับที่ดีที่สุดในป่าประเภท hlyz . บัญชีสําหรับ
ที่วิศวกรรมแปรครอบครองลดลงโดยธรรมชาติ
กิจกรรมเทียบกับ hlyz เราต่อไป ปกติเซลล์ฆ่าข้อมูล
กับเอนไซม์ไลติค ' ญาติในอัตราการขาดงานของตัวยับยั้ง
( รูปที่ 4 นะ ) ในบริบทของการแก้ไขนี้ ตัวแปร 2a
ง่ายที่สุด E ff ective antibacterial รักษา มี 2.5 -
พับมากขึ้นกว่าปกติ กิจกรรม hlyz . อย่างไรก็ตาม ตัวแปร
1D และ 1f ยังคง underperform เมื่อเทียบกับเอนไซม์ชนิด
ป่า ผล และน่าสนใจ มันเห็นได้ชัดว่า
แบคทีเรีย E ffi cacy ของวิศวกรรมเอนไซม์ถูกครอบงำ
โดย ivyc เลี่ยงคุณสมบัติของพวกเขาเป็นนอกคอกโดยธรรมชาติ
ไลติคความสามารถของพวกเขาภายใต้เงื่อนไข noninhibitory .