Pre-treatment of fish sera and anti

Pre-treatment of fish sera and antibody detection by ELISAwere
carried out according to methods described elsewhere [25e28].
Two ELISA plates (Corning) were prepared with 50 mL of viral antigens
(VHSV or IHNV), which were diluted 1:10 with distilled
water and incubated at 37 C overnight. After 3 washes with
phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.5) containing 0.05% Tween 20
(T-PBS), the plates were blocked with 5% skim milk in PBS at 25 C
for 1 h and washed again 3 times with T-PBS. Fish sera were diluted
40-fold with PBS containing 5% skim milk and incubated with 5%
skim milk at 25 C for 1 h. Another set of fish sera was diluted with
5% skim milk supplemented with 50% FBS.
Pre-treated fish serawere loaded in duplicatewells of the VHSVAg
and IHNV-Ag plates at 50 mL/well and incubated at 25 C for 1 h.
After 3 washes with T-PBS, the ELISA plate wells were incubated
with rabbit antiserum against olive flounder IgM (diluted 1000-fold
with PBS containing 5% skim milk) at 25 C for 30 min, followed by
incubation with horseradish peroxidase-conjugated goat anti rabbit
IgG (Santa Cruz; diluted 1000-fold at 25 C for 30 min). After 3
washes with T-PBS, 50 mL of substrate solution (1.0 mg/mL o-phenylenediamine,
0.03% H2O2, 100 mM Na2HPO4, and 50 mM citric
acid) was added to each well. After incubation for 30 min at 25 C,
the reaction was stopped by adding 2N H2SO4 and the absorbance
was determined at 490 nm (OD490) using a microplate reader (E
max Precision Microplate Reader, Molecular Devices). VHSVspecific
antibody titers were calculated by subtracting the OD
values of the IHNV-Ag plates from those of the VHSV-Ag plates.
Statistical analyses of ELISA data were performed using the SPSS
package. P-values less than 0.05 were considered significant.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ก่อนรักษาเป็นปลาและแอนติบอดีตรวจหา โดย ELISAwereทำตามวิธีที่อธิบายไว้ในที่อื่น [25e28]สองแผ่น ELISA (Corning) ได้เตรียม 50 mL ของไวรัส antigens(VHSV หรือ IHNV), ซึ่งถูกเจือจาง 1:10 มีกลั่นน้ำ และได้รับการกกที่ 37 C ค้างคืน หลังจากล้าง 3 ด้วย0.05 ที่มีเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (PBS, pH 7.5) แต่ 20(T-PBS), บล็อกแผ่นกับนมพร่องมันเนย 5% ใน PBS ที่ 25 C1 ชั่วโมง และล้างอีก 3 ครั้งกับ T PBS ปลาจะถูกเจือจาง40-fold กับ PBS ที่ประกอบด้วย 5% พิเศษนม และได้รับการกกกับ 5%พิเศษนม 25 c เป็นเวลา 1 ชม อีกชุดของปลาจะถูกเจือจางด้วย5% พิเศษนมเสริม ด้วย 50% FBSปลาเคลือบ serawere โหลดใน duplicatewells ของ VHSVAgและ IHNV Ag แผ่นที่ 50 mL/ดี และได้รับการกก 25 c เป็นเวลา 1 ชมหลังจากที่ 3 ล้าง ด้วย T PBS, ELISA จานหลุมได้รับการกกกับ antiserum กระต่ายกับมะกอกดิ้นรนปรับลด 1000-fold ระบาดของโรคด้วย PBS ที่ประกอบด้วยนมพร่องมันเนย 5%) ที่ 25 C 30 นาที ตามด้วยกกไข่ ด้วยแพะรวมกันฮอสฮอร์สป้องกันกระต่ายIgG (ซานตาครูซ ปรับลด 1000-fold 25 c เป็นเวลา 30 นาที) หลังจาก 3ล้าง ด้วย PBS T, 50 มิลลิลิตรของพื้นผิว (1.0 mg/mL o phenylenediamine0.03% H2O2, 100 mM Na2HPO4 และมะนาว 50 มม.เพิ่มกรดให้ดีละกัน หลังจากบ่ม 30 นาทีที่ 25 Cหยุดปฏิกิริยา โดยการเพิ่ม 2N ซัลฟิวริกกรดกำมะถันและ absorbance ที่กำหนดใน 490 nm (OD490) ใช้อ่าน microplate (Eสูงสุดความแม่นยำ Microplate Reader อุปกรณ์โมเลกุล) VHSVspecifictiters แอนติบอดีถูกคำนวณ โดยลบ ODค่าแผ่น IHNV Ag จากแผ่น VHSV Agดำเนินการวิเคราะห์ทางสถิติของข้อมูล ELISA โดยใช้ SPSS การในแพคเกจ ค่า P น้อยกว่า 0.05 ถือว่าเป็นสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การรักษาก่อนของซีรั่มปลาและการตรวจสอบโดยแอนติบอดี ELISAwere
ดำเนินการตามวิธีการที่อธิบายไว้ในที่อื่น ๆ [25e28].
สองวิธี ELISA แผ่น (Corning) ได้รับการจัดทำขึ้นด้วย 50 มลแอนติเจนของไวรัส
(VHSV หรือ IHNV) ซึ่งได้รับการปรับลด 01:10 กลั่นด้วย
น้ำและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในชั่วข้ามคืน หลังจาก 3 ล้างด้วย
น้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (พีบีเอสพีเอช 7.5) ที่มี 0.05% Tween 20
(T-พีบีเอส), จานที่ถูกบล็อกด้วยนมพร่องมันเนย 5% ในพีบีเอสอยู่ที่ 25 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 1 ชั่วโมงและล้างอีกครั้ง 3 ครั้งด้วย T -PBS ซีรั่มปลาเจือจาง
40 เท่ากับพีบีเอสที่มีนมพร่องมันเนย 5% และบ่มกับ 5%
นมพร่องมันเนยที่ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง ชุดของซีรั่มปลาอีกเจือจางด้วย
นมพร่องมันเนย 5% เสริมด้วย 50% FBS.
ก่อนรับการรักษา serawere ปลาโหลดใน duplicatewells ของ VHSVAg
และ IHNV-AG แผ่นที่ 50 mL / ดีและบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชม.
หลังจากที่ 3 ล้างด้วย T-พีบีเอส, วิธี ELISA หลุมจานถูกบ่ม
กับกระต่าย antiserum กับมะกอกดิ้นรน IgM (ปรับลด 1000 เท่า
กับพีบีเอสที่มี 5% นมพร่องมันเนย) อยู่ที่ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีตามด้วย
การบ่มกับแพะมะรุม peroxidase-ผัน ป้องกันกระต่าย
IgG (Santa Cruz; เจือจาง 1000 เท่าที่ 25 C เป็นเวลา 30 นาที?) หลังจาก 3
ล้างด้วย T-พีบีเอส 50 มลสารตั้งต้นของการแก้ปัญหา (1.0 mg / ml O-Phenylenediamine,
H2O2 0.03% 100 มิลลิเมตร Na2HPO4 และซิตริก 50 มิลลิ
Acid) ถูกเพิ่มเข้าไปในแต่ละดี หลังจากการบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียส,
ปฏิกิริยาก็หยุดโดยการเพิ่ม 2N H2SO4 และดูดกลืนแสง
ที่ถูกกำหนดที่ 490 นาโนเมตร (OD490) โดยใช้เครื่องอ่าน microplate (E
แม็กซ์พรีซิชั่ไมโคร Reader, อุปกรณ์โมเลกุล) VHSVspecific
ระดับแอนติบอดีจะถูกคำนวณโดยการลบ OD
ค่าของแผ่น IHNV-AG จากบรรดาแผ่น VHSV-AG.
การวิเคราะห์ทางสถิติของข้อมูล ELISA ถูกดำเนินการโดยใช้โปรแกรม SPSS
แพคเกจ P-ค่าน้อยกว่า 0.05

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ก่อนการรักษาและการตรวจหาแอนติบอดีโดย elisawere ( ปลาดำเนินการตามวิธีการที่อธิบายไว้ในที่อื่น [ 25e28 ]2 ) แผ่น ( คอร์น ) ถูกเตรียมแอนติเจน 50 มิลลิลิตร( vhsv หรือ ihnv ) ซึ่งถูกเจือจาง 1 : 10 กับกลั่นน้ำบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส ในชั่วข้ามคืน หลังจาก 3 ล้างด้วยเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( PBS , pH 7.5 ) ที่ 0.05 เปอร์เซ็นต์ Tween 20( t-pbs ) , จานที่ถูกบล็อกด้วย 5 % นมไขมันต่ำใน PBS ที่ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงและล้าง 3 ครั้งด้วย t-pbs อีกครั้ง ซีรั่มลดปลา40 เท่ากับ PBS ที่มี 5% หางนมผงและบ่มด้วย 5%หางนมผงที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสนาน 1 ชั่วโมงอีกชุดหนึ่ง ( เจือจางด้วยปลา5 % นมไขมันต่ำที่เติม 50% FBSก่อนเลี้ยงปลาใน duplicatewells ของ vhsvag serawere โหลดihnv AG และแผ่น 50 มิลลิลิตร / และบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมงหลังจาก 3 ล้างด้วย t-pbs , ELISA บ่อบ่มแผ่นคือกับแอนติซีรัมกระต่ายกับ IgM ปลาลิ้นหมามะกอก ( เจือจาง 1 พับกับ PBS ที่มี 5% skim milk ) ที่อุณหภูมิ 25 C เป็นเวลา 30 นาที ตามด้วยการบ่มด้วยเอนไซม์ conjugated ป้องกันกระต่ายแพะ .IgG ( Santa Cruz ; เจือจาง 1000 พับที่ 25 C เป็นเวลา 30 นาที ) หลังจาก 3ล้างด้วย t-pbs 50 ml ( โซลูชั่น ( o-phenylenediamine 1.0 mg / ml ,แบตเตอรี่ na2hpo4 0.03 % , 100 มม. และ 50 มม. ซิตริกกรด ) คือการเพิ่มแต่ละครั้งได้อีกด้วย หลังจากบ่มเป็นเวลา 30 นาที ที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยเติมกรดซัลฟิวริก 2n และการดูดกลืนแสงตั้งใจที่ 490 nm ( od490 ) โดยใช้พื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( อ่านอีพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย แม็กซ์อ่านความแม่นยำ , อุปกรณ์โมเลกุล ) vhsvspecificแอนติบอดีไตเตอร์คำนวณด้วยการลบ .คุณค่าของ ihnv AG แผ่นจากบรรดาของ vhsv 1 แผ่นสถิติวิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้โปรแกรมสำเร็จรูป SPSS ELISAแพคเกจ p-values น้อยกว่า 0.05 ถือว่าสำคัญ