Histological and immunofluorescent

Histological and immunofluorescent assessment
Animals were anesthetized with 10% chloral hydrate 14 or 28 days after MCAO. Rat brains were fixed by transcardial perfusion with saline, followed by perfusion and immersion in 4% paraformaldehyde, and embedded in optimal cutting temperature compound. A series of adjacent 5 µm-thick cryosections were cut from each block in the coronal plane. Immunofluorescent staining was used to identify cells derived from C17.2 NSCs. To visualize the cellular colocalization of Cell Tracker CM-DiI and cell type specific markers in the same cells, CY5 and FITC were used for double-label immunoreactivity. Each coronal section was treated with cell type-specific antibodies: a neuronal nuclear antigen (NeuN for neurons; dilution in 1:200; Abcam); an astrocytic marker, glial fibrillary acidic protein (GFAP; dilution in 1:100; Santa Cruz); a neural stem cell marker nestin (dilution in 1:1000; Abcam); a thymidine analogue BrdU (dilution in 1:1000; Abcam). Negative control sections from each animal received identical preparations for immunofluorescent staining, except that primary antibodies were omitted.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ประเมินสรีรวิทยา และ immunofluorescentสัตว์ได้ด้วยกับ 10% chloral ผับ/เลาจน์ 14 หรือ 28 วันหลังจาก MCAO สมองหนูคง โดย transcardial การกำซาบด้วยน้ำเกลือ ตาม ด้วยการกำซาบและแช่ใน paraformaldehyde 4% และฝังตัวในสุดตัดอุณหภูมิผสม ชุดติดกัน 5 µm-หนา cryosections ถูกตัดจากแต่ละบล็อกในระนาบ coronal ย้อมสี immunofluorescent ถูกใช้เพื่อระบุเซลล์ที่มาจาก C17.2 NSCs เห็นภาพ colocalization โทรศัพท์มือถือของเซลล์ Tracker CM-ดีทูและเครื่องหมายระบุชนิดของเซลล์ในเซลล์เดียว CY5 และ FITC ถูกใช้สำหรับคู่ป้ายชื่อ immunoreactivity แต่ละส่วน coronal ถูกรักษา ด้วยเซลล์ชนิดเฉพาะแอนตี้: ตรวจหานิวเคลียร์ neuronal (NeuN สำหรับ neurons เจือจางใน 1: 200 Abcam); มีเครื่องหมาย astrocytic, glial fibrillary กรดโปรตีน (GFAP เจือจาง 1: 100 ใน ซานตาครูซ), เป็นเซลล์ต้นกำเนิดประสาทเครื่อง nestin (เจือจางใน 1:1000 Abcam); อนาล็อก thymidine BrdU (เจือจางใน 1:1000 Abcam) ส่วนควบคุมลบจากสัตว์แต่ละรับเหมือนเตรียมการย้อมสี immunofluorescent ยกเว้นว่าแอนตี้หลักถูกละเว้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เนื้อเยื่อและการประเมิน immunofluorescent
สัตว์ถูกอสัญญี 10% ยาสลบคลอราลไฮเดรตที่ 14 หรือ 28 วันหลังจาก MCAO สมองของหนูได้รับการแก้ไขโดยปะ transcardial ด้วยน้ำเกลือตามด้วยการกระจายและการแช่ใน paraformaldehyde 4% และฝังตัวอยู่ในสารประกอบตัดอุณหภูมิที่เหมาะสม ชุดของที่อยู่ติดกัน 5 cryosections ไมครอนหนาถูกตัดออกจากแต่ละบล็อกในระนาบเวียน การย้อมสี Immunofluorescent ถูกใช้ในการระบุตัวตนของเซลล์ที่ได้มาจาก C17.2 NSCs จะเห็นภาพ colocalization เซลล์ของเซลล์ติดตาม CM-DII และชนิดเซลล์เครื่องหมายเฉพาะในเซลล์เดียวกัน CY5 FITC และถูกนำมาใช้สำหรับภูมิคุ้มกันดับเบิลฉลาก แต่ละส่วนเวียนรับการรักษาด้วยแอนติบอดีชนิดเฉพาะเซลล์: แอนติเจนนิวเคลียร์ประสาท (NeuN สำหรับเซลล์ประสาท; เจือจาง 1: 200; Abcam); เครื่องหมาย astrocytic, glial fibrillary โปรตีนที่เป็นกรด (GFAP; เจือจาง 1: 100; Santa Cruz); เซลล์ต้นกำเนิดประสาทเครื่องหมาย nestin (เจือจาง 1: 1000 Abcam); thymidine อนาล็อก BrdU (เจือจาง 1: 1000 Abcam) ส่วนการควบคุมเชิงลบจากสัตว์แต่ละคนได้รับการเตรียมการเหมือนกันสำหรับการย้อมสี immunofluorescent ยกเว้นแอนติบอดีหลักที่ถูกมองข้าม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ผลการประเมิน และ immunofluorescent
สัตว์ถูกวางยาสลบด้วย 10% Chloral hydrate 14 หรือ 28 วัน หลัง mcao . สมองหนู ถูกแก้ไข โดย transcardial การกำซาบด้วยน้ำเกลือ รองลงมา คือ ร้อยละ 4 และผ่านการแช่ในพาราฟอร์มาลดิไฮด์ และฝังตัวในการตัดที่เหมาะสม สารภูมิ ชุดติดกัน 5 µ m-thick cryosections ถูกตัดออกจากแต่ละบล็อกในระนาบโคโรนัล .immunofluorescent ย้อมที่ใช้เพื่อระบุเซลล์ที่ได้มาจาก c17.2 nscs . เห็นภาพ colocalization เซลล์เซลล์ติดตามซม. ดีและเครื่องหมายในเซลล์เดียวกัน เฉพาะประเภทเซลล์ และใช้ในการ cy5 fitc ป้ายคู่ เนื้อแต่ละส่วนถูกปฏิบัติด้วยแอนติบอดีชนิดเซลล์ : การนิวเคลียร์แอนติเจน ( อึนสำหรับประสาท ; เจือจางใน 1:200 ; ABCAM )เป็นเครื่องหมาย astrocytic glial fibrillary , กรดโปรตีน ( gfap ; เจือจางใน 1 : 100 ; Santa Cruz ) ; ประสาทสเต็มเซลล์เครื่องหมายเนสติน ( เจือจางใน 000 ; ABCAM ) ; เป็นเพียง brdu อนาล็อก ( เจือจางใน 000 ; ABCAM ) ลบควบคุมส่วนจากสัตว์แต่ละตัวได้รับการเตรียมสำหรับการ immunofluorescent เหมือนกัน ยกเว้นว่า หลักภูมิคุ้มกันถูกเว้นไว้