Quantitative competitive (qc) PCR.

Quantitative competitive (qc) PCR. (A) Construction of an internal standard for competitive PCR. By amplifying the target template using a composite primer approach, a truncated product is obtained, with the same primer sites as the target. This is made possible by synthesizing a sense primer for an internal priming site, which also has the regular sense primer sequence added onto its 5′ end (composite primer). (B) Use of internal standard in qcPCR. Replicate PCRs are set up with a fixed aliquot of the unknown template. A dilution series of the competitive standard with known copy number is spiked into the PCRs. After amplification, the competitive PCRs are run on an agarose gel. Equivalence of PCR products (EQ) occurs when the target and standard templates were present in equal initial concentration, permitting quantification of the target template.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เชิงปริมาณในการแข่งขัน (QC) pcr (ก) การก่อสร้างมาตรฐานภายในสำหรับ pcr แข่งขัน โดยขยายแม่แบบเป้าหมายใช้วิธีการไพรเมอร์คอมโพสิทเป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการตัดทอนกับเว็บไซต์ไพรเมอร์เช่นเดียวกับเป้าหมาย นี้ทำไปได้โดยการสังเคราะห์ไพรเมอร์ความรู้สึกสำหรับเว็บไซต์รองพื้นภายในซึ่งยังมีลำดับปกติไพรเมอร์ที่เพิ่มความรู้สึกลงบนที่ 5 'end (ไพรเมอร์ประกอบ) (ข) การใช้มาตรฐานภายใน qcpcr ทำซ้ำ PCRs มีการตั้งค่าด้วยหารคงที่ของแม่ที่ไม่รู้จัก ชุดการเจือจางของมาตรฐานในการแข่งขันที่มีจำนวนสำเนาที่รู้จักกันเป็นที่เสียบเข้าไป PCRs หลังจากขยาย PCRs การแข่งขันจะดำเนินการเกี่ยวกับการเจล agaroseความเท่าเทียมกันของผลิตภัณฑ์ pcr (อีคิว) เกิดขึ้นเมื่อเป้าหมายและแม่แบบมาตรฐานในปัจจุบันในความเข้มข้นเริ่มต้นเท่ากับอนุญาตให้ปริมาณของแม่แบบเป้าหมาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แข่งขันเชิงปริมาณ (qc) PCR (A) สร้างมาตรฐานการภายในสำหรับ PCR ที่แข่งขัน โดยมือแบบเป้าหมายโดยใช้วิธีการแบบผสมรองพื้น ผลิตภัณฑ์ตัดได้รับ ไซต์พื้นเดียวกันเป็นเป้าหมาย นี้จะทำไป โดยสังเคราะห์พื้นความรู้สึกสำหรับไซต์ภายในด้วย ซึ่งยังมีลำดับรองพื้นรู้สึกปกติเพิ่มไปยังจุดสิ้นสุด 5′ (ผสมรองพื้น) (ข) ใช้มาตรฐานภายใน qcPCR Replicate PCRs ถูกตั้งค่า ด้วยส่วนลงตัวคงที่ของแบบที่ไม่รู้จัก ชุดเจือจางมาตรฐานแข่งขันมีสำเนาที่รู้จักมี spiked เข้า PCRs หลังจากขยาย PCRs แข่งขันเรียกใช้ในการเจ agarose เทียบเท่าผลิตภัณฑ์ PCR (EQ) เกิดขึ้นเมื่อแม่แบบมาตรฐานและเป้าหมายอยู่ในสมาธิเริ่มต้นเท่า อนุญาตให้นับแบบเป้าหมาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในเชิงปริมาณในการแข่งขัน( QC ) pcr. (ก)การก่อสร้างของมาตรฐาน ภายใน สำหรับ pcr. ในการแข่งขัน โดยขยายเสียง ได้ในเทมเพลตเป้าหมายโดยใช้วิธีแบบคอมโพสิตเชื้อปะทุที่ ผลิตภัณฑ์ ถูกตัดให้สั้นลงได้รับเชื้อปะทุพร้อมด้วยสถานที่เดียวกันกับที่เป็นเป้าหมาย โรงแรมแห่งนี้คือทำให้เป็นไปได้โดย synthesizing เชื้อปะทุความรู้สึกที่สำหรับไซต์เชื้อปะทุ ภายในซึ่งยังมีตามลำดับเชื้อปะทุความรู้สึกตามปกติที่เพิ่มเข้าสู่ 5 "ปลายทาง(หลักของคอมโพสิต) ( B )การใช้มาตรฐาน ภายใน qcpcr. ฝีมือ pcrs ได้รับการตั้งค่าด้วย aliquot คงที่ของเทมเพลตที่ไม่รู้จัก Series เจือจางที่มีมาตรฐานในการแข่งขันที่มีจำนวนสำเนาที่รู้จักกันดีคือเครื่องเซ่นไหว้ใน pcrs. ได้ หลังจากการขยายสัญญาณเสียง pcrs ในการแข่งขันที่มีเจล agarose ที่จำนวนเทียบเท่าเครื่องโทรศัพท์ของ pcr สินค้า( EQ )เกิดขึ้นเมื่อเทมเพลตมาตรฐานและกำหนดกลุ่มเป้าหมายที่มีอยู่ในเท่ากับการระดมครั้งแรกเมื่อ สภาพ อากาศเอื้ออำนวยจึงจำเป็นต้องมีเทมเพลตของเป้าหมาย