2.8. Antioxidants enzymes assay in

2.8. Antioxidants enzymes assay in serum and liver
2.8.1. Glutathione peroxidase (GPx)
GPx activity was measured spectrophotometrically at 340 nm using a
technique based on the Flohe´ and Gu¨nzler (1984) procedure, in which
GSH formation is followed by measurement of oxidation of the reduced
form of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) to the
oxidized form, nicotinamide adenine phosphate (NADP+). Final concentrations
in the reaction mixture, in 0.1 mol/l potassium phosphate
buffer (pH 7.0) were 0.2 mmol/l NADPH, 1 mmol/l diethylenetriaminepentaacetic
acid, 1.5 mmol/l reduced glutathione (GSH) and 7.3 · 106 U/
ml reductase glutathione (GR). The reaction was started with 0.12 mmol/l
tert-butyl hydroperoxide (t-BuOOH). GPx activity is expressed as
lmol min1 g1 or ml1
.
2.8.2. Superoxide dismutase (SOD)
SOD activity was measured as described by Paoletti and Mocali
(1972). Samples (25 ll) were added to the reaction mixture containing, at
final concentrations, 100 mmol/l diethanolamine buffer (pH 7.4),
0.14 mmol/l NADPH, 2.27/1.14 mmol/l EDTA/MnCl2 (pH 7.0). The
oxidation of NADPH was started by the addition of 1 mmol/l
b-mercaptoethanol. Oxidation of NADPH was measured spectrophotometrically
at 340 nm. A standard curve for SOD activity was constructed
using SOD from bovine erythrocytes (Sigma, St Louis, MO, USA). One
unit of SOD activity was defined as the amount of the enzyme required to
inhibit the oxidation of NADPH by 50%. SOD activity was expressed in
units per gram of tissue or ml of serum.
2.8.3. Catalase (CAT)
CAT activity was estimated following the method of Aebi (1984). The
reaction was started by the addition of 20 ll of sample in 2 ml of 30 mmol/l
hydrogen peroxide (H2O2) in 50 mmol/l potassium phosphate buffer (pH
7.0). Enzyme units are expressed as mmol/l of consumed H2O2 per min g
or ml.
2.9. Isolated blood vessels and histopathology analysis
After 10 weeks of treatment, animals were euthanized using CO2
chamber and serum samples were taken through heart puncture for biochemical
parameters. The thoracic aorta was rapidly removed, rinsed in
0.9% saline, fixed in 10% buffered formalin, processed for dehydration,
and embedded in paraffin. Five-micron sections were cut transversally on a
glass slide, mounted, rehydrated and stained with Harris hematoxylin/
eosin (H&E).
2.10. Statistical analysis
The data was analyzed using GraphPad Prism V.4 (GraphPad Software,
Inc., San Diego, CA). The statistical significance of differences
between data means was determined by using analysis of variance one way
(ANOVA), followed by post hoc testing by Tukeys test. A value of
P < 0.05 was considered as statistically significant. Results are given as
means ± SD, n = 6. For correlation analysis, Carl Pearson Moment
correlation test was employed.
3. Results
3.1. Antioxidant activity of the T. indica L. extract in vitro
As an initial chemical characterization of the extract, an
HPLC-UV chromatogram was performed. An UV spectra
was obtained for each observed peak in the chromatogram.
812

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8. สารต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์ assay ในซีรั่มและตับ2.8.1. กลูตาไธโอนฮอส (GPx)กิจกรรม GPx โดยวัด spectrophotometrically 340 nm ใช้ในเทคนิคตาม Flohe´ และ Gu¨nzler ขั้นตอน (1984) ที่GSH ก่อตามการวัดของการเกิดออกซิเดชันของที่ลดลงรูปแบบของ nicotinamide dinucleotide คือฟอสเฟต (NADPH) เพื่อการแบบฟอร์มการออกซิไดซ์ nicotinamide คือฟอสเฟต (NADP +) ความเข้มข้นสุดท้ายในส่วนผสมของปฏิกิริยา ใน 0.1 mol/l โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.0) ถูก NADPH mmol/l 0.2, 1 mmol/l diethylenetriaminepentaaceticกรด 1.5 มิลลิโมล/ลิตรลดกลูตาไธโอน (GSH) และ 7.3 · 106 U /ml ไซด์กลูตาไธโอน (GR) ปฏิกิริยาเริ่มต้น ด้วย 0.12 mmol/lบิวทิล tert hydroperoxide (t BuOOH) แสดงเป็น GPx กิจกรรมlmol min1 g1 หรือ ml1.2.8.2. ซูเปอร์ออกไซด์ dismutase (SOD)กิจกรรมสดโดยวัดตามที่อธิบายไว้ โดย Paoletti และ Mocali(1972) ตัวอย่าง (25 ll) ถูกเพิ่มไปส่วนผสมปฏิกิริยาที่ประกอบด้วย ที่ความเข้มข้นสุดท้าย 100 mmol/l diethanolamine บัฟเฟอร์ (pH 7.4),NADPH 0.14 mmol/l, 2.27/1.14 mmol/l EDTA/MnCl2 (pH 7.0) การออกซิเดชันของ NADPH เริ่มต้น โดยการเพิ่ม 1 mmol/lb-mercaptoethanol ออกซิเดชันของ NADPH โดยวัด spectrophotometricallyที่ 340 nm สร้างเส้นโค้งมาตรฐานสำหรับกิจกรรมสดใช้สดจากเม็ดเลือดแดงวัว (ซิกม่า เซนต์หลุยส์ MO สหรัฐอเมริกา) หนึ่งหน่วยกิจกรรมสดถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ที่จำเป็นในการยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของ NADPH 50% แสดงสดกิจกรรมหน่วยต่อกรัมของเนื้อเยื่อหรือ ml เซรั่ม2.8.3 การคา (แมว)กิจกรรมแมวได้ประมาณตามวิธีการของ Aebi (1984) การปฏิกิริยาเริ่มต้น โดยการเพิ่ม 20 ll ตัวอย่างใน 2 มล. 30 mmol/lไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (H2O2) ใน 50 mmol/l โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH7.0) . แสดงหน่วยเอนไซม์เป็น mmol/l ของ H2O2 ใช้ต่อนาทีกรัมหรือ ml2.9 ที่แยกวิเคราะห์จุลพยาธิวิทยาและหลอดเลือดหลัง 10 สัปดาห์ของการรักษา สัตว์ถูก euthanized โดยใช้ CO2ตัวอย่างห้องและเซรั่มที่ถ่ายผ่านหัวใจเจาะสำหรับทางชีวเคมีพารามิเตอร์ ทรวงอกโลหิตอย่างรวดเร็วลบออก ล้างในน้ำเกลือ 0.9% ถาวรในบัฟเฟอร์ 10% formalin ประมวลผลสำหรับภาวะขาดน้ำและฝังตัวในพาราฟิน ส่วนห้าไมครอนถูกตัด transversally ในการบานเลื่อนกระจก ติดตั้ง rehydrated และการย้อมสี hematoxylin แฮร์ริสกับ /eosin (H & E)2.10. สถิติวิเคราะห์ข้อมูลที่ถูกวิเคราะห์โดยใช้ GraphPad ปริซึม V.4 (GraphPad ซอฟต์แวร์อิงค์ San Diego, CA) ความสำคัญของความแตกต่างทางสถิติระหว่างข้อมูล หมายถึงกำหนด โดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว(ANOVA), ตาม ด้วยการทดสอบเฉพาะกิจหลังทดสอบ Tukeys ค่าของP เป็นนัยสำคัญทางสถิติที่ < 0.05 ผลได้รับเป็นหมายถึง ± SD, n = 6 สำหรับการวิเคราะห์สหสัมพันธ์ คาร์ลเพียร์สันขณะทดสอบความสัมพันธ์ถูกจ้าง3. ผลลัพธ์3.1. อนุมูลของ T. indica L. แยกในหลอดทดลองเป็นการจำแนกลักษณะเคมีเบื้องต้นของสารสกัด การHPLC UV chromatogram ที่ได้ดำเนินการ การสเปกตรัมรังสียูวีได้รับสำหรับแต่ละ chromatogram จุดสังเกต812

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.8 สารต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์ทดสอบในซีรั่มและตับ
2.8.1 กลูตาไธโอน peroxidase (GPx)
กิจกรรม GPx วัด spectrophotometrically ที่ 340 นาโนเมตรโดยใช้
เทคนิคที่อยู่บนพื้นฐานของ Flohe' และGu¨nzler (1984) ขั้นตอนซึ่งใน
GSH การก่อตัวตามด้วยการวัดของการเกิดออกซิเดชันของลด
รูปแบบของ Nicotinamide adenine dinucleotide ฟอสเฟต ( NADPH) กับ
รูปแบบออกซิไดซ์ Nicotinamide adenine ฟอสเฟต (NADP +) ความเข้มข้นของรอบชิงชนะเลิศ
ในการผสมปฏิกิริยาใน 0.1 mol / L โพแทสเซียมฟอสเฟต
บัฟเฟอร์ (pH 7.0) เป็น 0.2 มิลลิโมล / ลิตร NADPH 1 มิลลิโมล / ลิตร diethylenetriaminepentaacetic
กรด 1.5 มิลลิโมล / ลิตรลดลงกลูตาไธโอน (GSH) และ 7.3 · 106 U /
reductase มล. กลูตาไธโอน (GR) ปฏิกิริยาเริ่มต้นด้วย 0.12 มิลลิโมล / ลิตร
tert-butyl hydroperoxide (T-BuOOH) กิจกรรม GPx จะแสดงเป็น
G1 lmol min1 หรือ ML1
.
2.8.2 dismutase superoxide (SOD)
กิจกรรม SOD วัดตามที่อธิบาย Paoletti และ Mocali
(1972) ตัวอย่าง (25 LL) ถูกเพิ่มเข้าไปผสมปฏิกิริยาที่มีที่
มีความเข้มข้นสุดท้าย 100 มิลลิโมล / ลิตร Diethanolamine บัฟเฟอร์ (pH 7.4)
0.14 มิลลิโมล / ลิตร NADPH, 2.27 / 1.14 มิลลิโมล / ลิตร EDTA / MnCl2 (pH 7.0)
ออกซิเดชันของ NADPH เริ่มต้นจากการเพิ่มขึ้นของ 1 มิลลิโมล / ลิตร
B-mercaptoethanol ออกซิเดชันของ NADPH วัด spectrophotometrically
ที่ 340 นาโนเมตร เส้นโค้งมาตรฐานสำหรับกิจกรรม SOD ถูกสร้างขึ้น
โดยใช้ SOD จากเม็ดเลือดแดงวัว (Sigma, St Louis, MO, USA) หนึ่ง
หน่วยของกิจกรรม SOD ถูกกำหนดเป็นจำนวนเงินของเอนไซม์ที่จำเป็นในการ
ยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของ NADPH โดย 50% กิจกรรม SOD ถูกแสดงออกใน
หน่วยต่อกรัมหรือมิลลิลิตรของซีรั่ม.
2.8.3 catalase (CAT)
กิจกรรม CAT เป็นที่คาดกันดังต่อไปนี้วิธีการ Aebi นี้ (1984)
ปฏิกิริยาเริ่มต้นจากการเพิ่มขึ้นของ LL 20 ของกลุ่มตัวอย่างใน 2 มิลลิลิตร 30 มิลลิโมล / ลิตร
ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (H2O2) ใน 50 มิลลิโมล / ลิตรบัฟเฟอร์โพแทสเซียมฟอสเฟต (pH
7.0) หน่วยเอนไซม์จะแสดงเป็นมิลลิโมล / ลิตร H2O2 บริโภคต่อนาทีกรัม
หรือมล.
2.9 บางแห่งหลอดเลือดและการวิเคราะห์จุลพยาธิวิทยา
หลังจาก 10 สัปดาห์ของการรักษาสัตว์ที่ถูกฆ่าเพื่อเก็บเนื้อเยื่อโดยใช้ CO2
หอการค้าและซีรั่มถูกนำตัวอย่างผ่านการเจาะหัวใจชีวเคมี
พารามิเตอร์ เส้นเลือดทรวงอกถูกลบออกอย่างรวดเร็วล้างใน
0.9% น้ำเกลือแก้ไขใน 10% ฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ประมวลผลสำหรับการคายน้ำ
และฝังตัวอยู่ในพาราฟิน ส่วนห้าไมครอนถูกตัด transversally บน
สไลด์แก้วติด rehydrated และย้อมด้วยสี hematoxylin แฮร์ริส /
Eosin (H & E).
2.10 การวิเคราะห์ทางสถิติ
วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ปริซึม GraphPad V.4 (GraphPad ซอฟแวร์
อิงค์, San Diego, CA) อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติของความแตกต่าง
ระหว่างข้อมูลวิธีที่ถูกกำหนดโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางหนึ่ง
(ANOVA) ตามด้วยการโพสต์เฉพาะกิจการทดสอบโดยการทดสอบ Tukeys ค่า
P <0.05 ได้รับการพิจารณาเป็นนัยสำคัญทางสถิติ ผลที่จะได้รับเป็น
วิธี± SD, N = 6 สำหรับการวิเคราะห์ความสัมพันธ์คาร์ลเพียร์สัน
ทดสอบความสัมพันธ์เป็นลูกจ้าง.
3 ผลการค้นหา
3.1 ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของสารสกัดจาก T. indica L. ในหลอดทดลอง
ในฐานะที่เป็นลักษณะทางเคมีเบื้องต้นของสารสกัดที่
chromatogram HPLC-UV ได้ดำเนินการ สเปกตรัมรังสียูวี
ที่ได้รับในแต่ละจุดสูงสุดตั้งข้อสังเกตใน chromatogram ได้.
812

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.8 . สารต้านอนุมูลอิสระเอนไซม์ในเลือดและตับ การทดสอบ2.8.1 . กลูตาไธโอนเปอร์ออกซิเดส ( GPX )กิจกรรม ณ วัดนี้ GPX 340 นาโนเมตรโดยใช้เทคนิคที่ใช้ใน flohe ใหม่และกูตั้ง nzler ( 1984 ) ขั้นตอน ซึ่งการสร้างกลุ่มตามด้วยการวัดปฏิกิริยาออกซิเดชันลดลงรูปแบบของปูใบ้ ( nadph ) ไปที่จากรูป นิโคตินาไมด์อะดีนีนฟอสเฟต ( nadp + ) และสุดท้ายในปฏิกิริยาที่ผสมใน 0.1 mol / L โพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ) 0.2 มิลลิโมล / ลิตร nadph 1 มิลลิโมล / ลิตร diethylenetriaminepentaaceticกรด , 1.5 มิลลิโมล / ลิตร ลดลงกลูตาไธโอน ( GSH ) และ 7.3 ด้วย 106 U /มลกลูต้าไธโอนรีดักเทส ( GR ) ปฏิกิริยาเริ่มต้นกับ 0.12 mmol / ltert butyl hydroperoxide ( t-buooh ) กิจกรรม GPX จะแสดงเป็นlmol min1 G1 หรือ ml1.2.8.2 . Superoxide Dismutase ( SOD )กิจกรรมสดวัดตามที่อธิบายไว้โดย เปาเลทติ และ โมคาลิ( 1972 ) ตัวอย่าง ( 25 จะ ) มีการเพิ่มส่วนผสมที่มีปฏิกิริยาที่สุดท้ายที่ความเข้มข้น 100 มิลลิโมล / ลิตรไดเอทาโนลามีนบัฟเฟอร์ pH 7.4 )0.14 มิลลิโมล / ลิตร nadph 2.27/1.14 mmol / L , EDTA / mncl2 ( pH 7.0 ) ที่ออกซิเดชันของ nadph เริ่มต้น โดยการเพิ่ม 1 มิลลิโมล / ลิตรb-mercaptoethanol . ออกซิเดชันของ nadph วัดนี้คือที่ 340 นาโนเมตร เส้นโค้งมาตรฐานสำหรับกิจกรรมสดก่อสร้างการใช้เม็ดเลือดแดงสดจากวัว ( Sigma , เซนต์ หลุยส์ โม สหรัฐอเมริกา ) หนึ่งหน่วยกิจกรรมสดถูกกำหนดเป็นปริมาณของเอนไซม์ ต้องยับยั้งการเกิดออกซิเดชันของ nadph 50% กิจกรรมสดถูกแสดงในหน่วยต่อกรัมเนื้อเยื่อหรือมล. ซีรั่ม2.8.3 . คะตะเลส ( แมว )กิจกรรมแมวประมาณตามวิธีของ aebi ( 1984 ) ที่ปฏิกิริยาเริ่มต้นโดยการเพิ่มของ 20 จะตัวอย่างใน 2 มล. 30 mmol / lไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ( H2O2 ) 50 มิลลิโมล / ลิตรโพแทสเซียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH7.0 ) เอนไซม์หน่วยแสดงเป็นมิลลิโมล / ลิตรใช้ H2O2 ต่อ มินจีหรือมล.2.9 . แยกเส้นเลือดและพยาธิวิทยาการวิเคราะห์หลังจาก 10 สัปดาห์ของการรักษา , สัตว์ euthanized โดยใช้คาร์บอนไดออกไซด์ตัวอย่างห้องและเซรั่ม ถ่ายเจาะหัวใจผ่านทางชีวเคมีพารามิเตอร์ หลอดเลือดแดงใหญ่ในช่องอกเป็นอย่างรวดเร็วลบล้างใน0.9% น้ำเกลือ ถาวรใน 10% ฟอร์มาลินบัฟเฟอร์ ประมวลผลสำหรับอาการขาดน้ำและฝังตัวในพาราฟิน 5 ไมครอน ส่วนที่ถูกตัด transversally บนกระจกสไลด์ ติดได้ทำการ รีไฮเดรทม และย้อมด้วยสีย้อม / แฮร์ริสโอซิน ( H & E )2.10 . สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลวิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ graphpad ปริซึม v.4 ( graphpad ซอฟต์แวร์ ,อิงค์ , San Diego , CA ) ความแตกต่างทางสถิติของระหว่างแปลว่าข้อมูลถูกกำหนดโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนทางเดียว( ANOVA ) การทดสอบ 2 กลุ่มตามโพสต์โดยการทดสอบ ค่าของp < 0.05 เป็นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ผลที่ได้รับ เช่นหมายถึง± SD , N = 6 การวิเคราะห์สหสัมพันธ์เพียร์สัน ขณะที่ คาร์ลการทดสอบสถิติที่ใช้3 . ผลลัพธ์3.1 . ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระของ T . indica L . สารในหลอดทดลองเป็นลักษณะทางเคมีเบื้องต้นของสารสกัด ,hplc-uv โครมากำหนด มี UV สเปกตรัมได้สำหรับแต่ละพบสูงสุดในโครมา .812