The method described by Matsushima

The method described by Matsushima et
al (1976) was followed. Male Sprague-Dawley
rats (from The Animal Center of Salaya, Mahidol
University) were injected intraperitoneally with
phenobarbital and β-naphthoflavone. Four days
after injection, the rats were sacrificed, their livers were removed and minced in 0.15 M KCl,
and then homogenized using a Potter-Elvehjem
apparatus. The homogenate was centrifuged at
9,000g for 20 minutes in a refrigerated centrifuge, and the supernatant S9 fraction was decanted and immediately stored in cryogenic vials (Wheaton) of 1-2 ml, at -70ºC. The protein
concentration of the S9 fraction was determined
by the Lowry method (Lowry et al, 1951). The
protein concentration required approximate 30
mg/ml. The S9 required for the preparation of
the S9 mix was thawed at room temperature and
placed in a container of crushed ice. The S9 mix
was prepared as soon as the S9 had thawed.
The components of the S9 mix were sodium
phosphate-KCl buffer 13.2 ml (0.5M sodium
phosphate, pH 7.4 15.15 ml, 1M KCl 2.5 ml
added to DW 32.35 ml), 0.16M MgCl2 1.0 ml,
0.1M glucose-6-phosphate 1.0 ml, 0.1M NADP
0.8 ml, and S9 4.0 ml, mixed and kept in the ice
box. The S9 mix was prepared freshly for each
mutagenicity assay.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการอธิบาย โดยมัตสึชิมะและอัล (1976) ได้ตาม Sprague Dawley ชายหนู (จากสัตว์ศูนย์ของศาลายา มหิดลมหาวิทยาลัยถูกฉีด intraperitoneally ด้วยphenobarbital และβ-naphthoflavone วันที่สี่หลังจากฉีด หนูได้เสียสละ livers ของถูกเอาออก และสับใน 0.15 M KClแล้ว homogenized เป็นกลุ่มใช้พอตเตอร์-Elvehjemเครื่องมือการ Homogenate ถูก centrifuged ที่9000 g 20 นาทีในเครื่องหมุนเหวี่ยงควบคุมอุณหภูมิ และเศษ S9 supernatant decanted และเก็บทันทีใน cryogenic vials (Wheaton) ของ 1-2 ml ที่ - 70ºC โปรตีนกำหนดความเข้มข้นของเศษ S9โดยวิธี Lowry (Lowry et al, 1951) ที่ความเข้มข้นของโปรตีนจำเป็น 30 โดยประมาณmg/ml S9 ที่จำเป็นสำหรับการเตรียมของผสม S9 เป็น thawed ที่อุณหภูมิห้อง และวางในภาชนะของน้ำแข็งบด ผสม S9ถูกเตรียมเป็น S9 ได้ thawedส่วนประกอบของผสม S9 ได้โซเดียมKCl ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ 13.2 ml (โซเดียม 0.5Mฟอสเฟต pH 7.4 15.15 ml, 1M KCl 2.5 mlเพิ่ม DW 32.35 ml), 0.16 M MgCl2 1.0 ml0.1 M กลูโคส-6-ฟอสเฟต 1.0 ml, NADP 0.1M0.8 ml, S9 4.0 ml ผสม และเก็บไว้ในน้ำแข็งกล่อง ผสม S9 ได้เตรียมสดสำหรับแต่ละการศึกษาวิเคราะห์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการอธิบายโดย Matsushima et
al, (1976) ตามมา ชายปราก-Dawley
หนู
(จากศูนย์สัตว์ศาลายามหิดลมหาวิทยาลัย) ได้รับการเข้า intraperitoneally กับ
phenobarbital และβ-Naphthoflavone สี่วันหลังจากการฉีดหนูที่ถูกเสียสละตับของพวกเขาถูกถอดออกและสับใน 0.15 M KCl, และปั่นแล้วโดยใช้พอตเตอร์ Elvehjem อุปกรณ์ homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่9,000g เป็นเวลา 20 นาทีในการหมุนเหวี่ยงตู้เย็นและใสส่วน S9 ถูก decanted และเก็บไว้ได้ทันทีในขวดแช่แข็ง (วี) 1-2 มล. ที่-70ºC โปรตีนเข้มข้นของส่วน S9 ถูกกำหนดโดยวิธี Lowry (โลว์รีย์, et al, 1951) ความเข้มข้นของโปรตีนที่จำเป็นประมาณ 30 mg / ml S9 ที่จำเป็นสำหรับการเตรียมความพร้อมของการผสมS9 ถูกละลายที่อุณหภูมิห้องและวางไว้ในภาชนะบรรจุน้ำแข็งบด ผสม S9 ถูกจัดทำขึ้นทันทีที่ S9 ได้ละลาย. ส่วนประกอบของผสม S9 มีโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์-KCl 13.2 มล. (0.5M โซเดียมฟอสเฟตpH 7.4 มล. 15.15, 1M KCl 2.5 มล. เพิ่มให้กับ DW 32.35 มล.) 0.16 M MgCl2 1.0 มล., 0.1M กลูโคส -6- ฟอสเฟต 1.0 มล., 0.1M NADP 0.8 มล. และ S9 4.0 มิลลิลิตรผสมและเก็บไว้ในน้ำแข็งกล่อง ผสม S9 ได้รับการปรุงสดใหม่สำหรับแต่ละการทดสอบฤทธิ์ก่อกลายพันธุ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีที่อธิบายโดย Matsushima et al
( 1976 ) ได้ตาม ชาย Sprague ต่อการ
หนู ( จากสัตว์ ศูนย์ศาลายา มหาวิทยาลัยมหิดล
มหาวิทยาลัย ) ต่อการฉีดยาระงับประสาท และบีตา - naphthoflavone ด้วย
. สี่วัน
หลังฉีดยา หนูยอมพลีชีพ ตับของพวกเขาถูกเอาออก และสับใน 0.15 M KCl
แล้วบดใช้พอตเตอร์ elvehjem
อุปกรณ์โดยแยกเป็นระดับที่
9000g เป็นเวลา 20 นาทีในตู้เย็นเครื่องหมุน และเมื่อนำสัดส่วนถูกรินทันทีและเก็บไว้ในขวดแช่แข็ง ( วีตัน ) 1-2 มิลลิลิตร ที่ - 70 องศาเซลเซียสºโปรตีนความเข้มข้นของ S9

ส่วนถูกกำหนดโดยวิธีของลอว์รี ( เบส et al , 1951 )

ต้องการโปรตีนประมาณ 30 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรที่จำเป็นสำหรับการเตรียมการของ S9
เมื่อผสมถูกละลายที่อุณหภูมิห้องและ
วางอยู่ในภาชนะบดน้ำแข็ง ทาง S9 ผสม
เตรียมทันทีที่ S9 ได้ละลาย .
ส่วนประกอบของฟอสเฟตโพแทสเซียมโซเดียมผสมอยู่ S9
บัฟเฟอร์ 13.2 มล ( 0.5 โซเดียมฟอสเฟต pH 7.4 ml
, ดอกเบี้ย , KCl 2.5 ml 1
เพิ่ม DW 32.35 ml ) 0.16m MgCl2 1.0 มล.
0.1m glucose-6-phosphate 0.1m 1.0 มิลลิลิตร nadp
0.8 มิลลิลิตร3 และ 4.0 มิลลิลิตร ผสมและเก็บไว้ในกล่องน้ำแข็ง
. ทาง S9 ผสมเตรียมสดแต่ละ
100 ตามลำดับ