Kynureninase [l-kynurenine hydrolas

Kynureninase [l-kynurenine hydrolase E.C.3.7.1.3] catalyzes the conversion of l-3-hydroxykynurenine (3-OHKYN) and l-kynurenine (l-KYN) to 3-hydroxyanthranilic acid (3-OHAA) and anthranilic acid (AA), respectively [1]. The reaction is pyridoxal-5′-phosphate (PLP) dependent and is sensitive to nutritional vitamin B6 deprivation in mammals [2]. The biochemical properties of kynureninase were studied in mouse, rat and pig liver extracts 3, 4, 5 and 6showing that this enzyme is an homodimer of around 95 kDa. It is present in all major classes of vertebrates [7]and can be regarded as a 3-hydroxykynureninase-type enzyme, since it hydrolyzes preferentially 3-OHKYN [8]. The product of this reaction, 3-OHAA is further utilised to synthesize quinolinic acid (QUINA), whose neurotoxic effect in the CNS is well documented [9]. On the other hand, l-KYN can be converted by kynurenine aminotransferase to produce kynurenic acid (KYNA), a neuroprotective agent [1]. Therefore, increases in KYNA concentrations within the central nervous system could mitigate the neurotoxic effects of QUINA while reductions in KYNA levels could promote excitotoxicity. Intraperitoneal injection of a kynureninase inhibitor o-methoxybenzoylalanine (oMBA), increases the concentration of KYNA in the hippocampal extracellular space and is able to prevent audiogenic convulsions in DBA/2 mice [10]. This, among other evidence [11], suggests that the pharmacological modulation of the kynurenine pathway could have neuroprotective effects. A substantial increase in the kynureninase activity has been observed in several cerebral and systemic inflammatory conditions [12]. In addition, it has been recently found that interferon-γ induces kynureninase activity in murine macrophages [13]and kynureninase mRNA in human monocyte/macrophages [14]. Moreover, recent in vivo data [15]suggested either the existence of two kynureninase enzymes or the presence of different regulatory co-factors of the enzymatic activity in liver and brain tissues. The cloning and characterization of kynureninase cDNA expression is therefore instrumental for clarifying the function of this enzyme, the existence of possible tissue-specific isoforms, the regulation of its expression by immune stimuli and its possible involvement in disorders associated with unbalanced levels of QUINA and KYNA. To gain insights into the physiology and pathology of the kynurenine pathway we have recently isolated the cDNAs encoding two other enzymes: kynurenine aminotransferase [16]and kynurenine 3-hydroxylase [17]. Here we report the molecular cloning of rat and human kynureninase and their biochemical characterization in transiently transfected COS-1 cells. The constitutive expression of rat kynureninase mRNA is also demonstrated in liver, kidneys, brain and other tissues by reverse-transcribed polymerase chain reaction (RT-PCR) and Northern blot analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Kynureninase [l-kynurenine hydrolase EC3.7.1.3] กระตุ้นการแปลง l-3 hydroxykynurenine (3 OHKYN) และ l-kynurenine (l-KYN) กรด 3 hydroxyanthranilic (3 OHAA) และกรด anthranilic (AA ) ตามลำดับ [1] ปฏิกิริยาเป็น pyridoxal-5'ฟอสเฟต (PLP) ขึ้นและมีความไวต่อการกีดกันวิตามิน B6 เสริมในสัตว์เลี้ยงลูกด้วย [2] คุณสมบัติทางชีวเคมีของ kynureninase ศึกษาในเมาส์หนูและสารสกัดจากตับหมูที่ 3, 4, 5 และ 6showing ว่าเอนไซม์นี้เป็น homodimer ประมาณ 95 กิโลดาลตัน มันมีอยู่ในชั้นเรียนที่สำคัญทั้งหมดของสัตว์มีกระดูกสันหลัง [7] และสามารถถือได้ว่าเป็นเอนไซม์ 3​​ hydroxykynureninase ชนิดเพราะมันไฮโดรไลซ์พิเศษ 3 OHKYN [8] ผลิตภัณฑ์ของปฏิกิริยานี้ 3 OHAA ถูกนำมาใช้ต่อไปในการสังเคราะห์กรด quinolinic (Quina) ซึ่งมีผลบังคับใช้ในประสาทของระบบประสาทส่วนกลางเป็นเอกสารที่ดี [9] ในทางตรงกันข้าม, l-KYN สามารถแปลงโดย aminotransferase kynurenine ในการผลิตกรด kynurenic (KYNA) ซึ่งเป็นตัวแทนประสาท [1] ดังนั้นการเพิ่มขึ้นของความเข้มข้น KYNA ในระบบประสาทส่วนกลางสามารถบรรเทาผลอัมพาตของ Quina ในขณะที่การลดลงของระดับ KYNA สามารถส่งเสริม excitotoxicity การฉีดสารยับยั้งของ kynureninase o-methoxybenzoylalanine (oMBA) เพิ่มความเข้มข้นของ KYNA ในพื้นที่นอก hippocampal และสามารถที่จะป้องกันไม่ให้ชัก audiogenic ใน DBA / 2 หนู [10] นี้หลักฐานอื่น ๆ ในหมู่ [11] แสดงให้เห็นว่าการปรับเภสัชวิทยาของทางเดิน kynurenine อาจมีผลกระทบต่อเซลล์ประสาท เพิ่มขึ้นอย่างมากในกิจกรรม kynureninase ได้รับการปฏิบัติในหลายเงื่อนไขการอักเสบในสมองและระบบ [12] นอกจากนี้จะได้รับเมื่อเร็ว ๆ นี้พบว่า interferon-γก่อให้เกิดกิจกรรมใน kynureninase ใหญ่หมา [13] และ kynureninase mRNA มนุษย์ monocyte / ขนาดใหญ่ [14] นอกจากนี้ข้อมูลในร่างกายที่ผ่านมา [15] แนะนำการดำรงอยู่ของทั้งสองเอนไซม์ kynureninase หรือการปรากฏตัวของปัจจัยร่วมการกำกับดูแลที่แตกต่างกันของเอนไซม์ในตับและเนื้อเยื่อสมอง โคลนและลักษณะการแสดงออกของยีน kynureninase จึงเป็นเครื่องมือสำหรับการทำความเข้าใจการทำงานของเอนไซม์นี้การดำรงอยู่ของไอโซฟอร์มเนื้อเยื่อเฉพาะที่เป็นไปได้ในการควบคุมการแสดงออกโดยการกระตุ้นภูมิคุ้มกันและการมีส่วนร่วมที่เป็นไปได้ในความผิดปกติท​​ี่เกี่ยวข้องกับระดับที่ไม่สมดุลของ Quina และ KYNA . เพื่อให้ได้รับข้อมูลเชิงลึกในสรีรวิทยาและพยาธิสภาพของทางเดิน kynurenine เราได้แยกเมื่อเร็ว ๆ นี้ cDNAs เข้ารหัสสองเอนไซม์อื่น ๆ : aminotransferase kynurenine [16] และ kynurenine 3 hydroxylase [17] ที่นี่เรารายงานโคลนโมเลกุลของหนูและ kynureninase มนุษย์และลักษณะทางชีวเคมีใน transfected transiently COS-1 เซลล์ การแสดงออกที่เป็นส่วนประกอบของหนู kynureninase mRNA จะแสดงให้เห็นในตับไตสมองและเนื้อเยื่ออื่น ๆ โดยวิธี Polymerase chain ย้อนกลับถ่ายทอดปฏิกิริยา (RT-PCR) และภาคเหนือวิเคราะห์ blot

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

kynureninase [ l-kynurenine ไฮโดรเลส e.c.3.7.1.3 ] และการแปลง l-3-hydroxykynurenine ( 3-ohkyn ) และ l-kynurenine ( l-kyn ) 3-hydroxyanthranilic ( 3-ohaa ) และกรด phytic acid ( AA ) ตามลำดับ [ 1 ] ปฏิกิริยานั้นเป็น pyridoxal-5 - ฟอสเฟต ( PLP ) ขึ้น และมีความไวต่อภาวะโภชนาการวิตามิน B6 การกีดกันในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม [ 2 ]คุณสมบัติทางชีวเคมีของ kynureninase โดยทำการศึกษาในหนูเมาส์และสารสกัดจากตับหมูที่ 3 , 4 , 5 และ 6showing เอนไซม์นี้เป็นโฮโมไดเมอร์ประมาณ 95 กิโลดาลตัน มันมีอยู่ในชั้นเรียนหลักทั้งหมดของสัตว์มีกระดูกสันหลัง [ 7 ] และอาจถือเป็น 3-hydroxykynureninase-type เอนไซม์ เนื่องจากมัน hydrolyzes preferentially 3-ohkyn [ 8 ] ผลิตภัณฑ์ของปฏิกิริยานี้3-ohaa ต่อไปใช้สังเคราะห์ quinolinic acid ( ควีน่า ) , ซึ่งผลในส่วนกลาง คือ โทอิน ด้วยเอกสาร [ 9 ] บนมืออื่น ๆ , l-kyn สามารถแปลงโดย kynurenine aminotransferase ผลิต kynurenic acid ( kyna ) , เจ้าหน้าที่ข้อมูล [ 1 ] ดังนั้นเพิ่มความเข้มข้นใน kyna ภายในระบบประสาทส่วนกลางสามารถลดผลกระทบของการโทอิน ควีน่า ในขณะที่ kyna ระดับสามารถส่งเสริมภาวะเอ็กไซโททอกซิก . การฉีดเข้าช่องท้องของ kynureninase ยับยั้ง o-methoxybenzoylalanine ( omba )เพิ่มความเข้มข้นของ kyna ในพื้นที่พบว่า น้ำหนักตัว และสามารถป้องกันการชักในหนู audiogenic DBA / 2 [ 10 ] นี้ในหมู่อื่น ๆหลักฐาน [ 11 ] แสดงให้เห็นว่าโครงสร้างทางเภสัชวิทยาของ kynurenine ทางเดินอาจมีผลใช้ .เพิ่มขึ้นอย่างมากใน kynureninase กิจกรรมได้รับการตรวจสอบหลายสมองเงื่อนไขการอักเสบทั่วร่างกาย [ 12 ] นอกจากนี้ เมื่อเร็ว ๆ นี้ พบว่า รอน - γก่อให้เกิดกิจกรรม kynureninase ใน ~ [ 13 ] และ macrophages kynureninase โมโนไซต์ / แมโครเฟจมนุษย์ mRNA ใน [ 14 ] นอกจากนี้ล่าสุดข้อมูลในร่างกาย [ 15 ] แนะนำให้การดำรงอยู่ของเอนไซม์ทั้งสอง kynureninase หรือการมีกฎระเบียบที่แตกต่างกัน CO องค์ประกอบของเอนไซม์ในตับ และเนื้อเยื่อสมอง การโคลนและการศึกษาการแสดงออกของยีน kynureninase จึงเป็นเครื่องมือเพื่อชี้แจงการทำงานของเอนไซม์ การมีอยู่ของไอโซฟอร์ม tissue-specific เป็นไปได้การควบคุมการแสดงออกจากการกระตุ้นภูมิคุ้มกันและการมีส่วนร่วมที่เป็นไปได้ในความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับสมดุลระดับของควีน่า และ kyna . ที่จะได้รับข้อมูลเชิงลึกในสรีรวิทยาและพยาธิวิทยาของ kynurenine ทางเดินที่เราเพิ่งแยก cdnas การเข้ารหัสเอนไซม์อื่น ๆสอง : kynurenine aminotransferase [ 16 ] และ kynurenine 3-hydroxylase [ 17 ]ที่นี่เรารายงานการโคลนยีนของหนู และ kynureninase มนุษย์และลักษณะสมบัติทางชีวเคมีของพวกเขาในบุคคลหรือสิ่งที่อยู่ชั่วคราว transfected cos-1 เซลล์ การแสดงออกของ mRNA และหนู kynureninase คือแสดงใน ตับ ไต สมอง และเนื้อเยื่ออื่น ๆโดยการคัดลอกปฏิกิริยาลูกโซ่ย้อนกลับ ( RT-PCR ) และ Northern blot analysis .