Sixty microliters of sample was mixed with 2 μ L of H5 and H9 QD-Abs and then added onto the sample pad of the QD-LFIAS strip.
Once the influenza A virus subtype H5 or H9 was added to the sample, the QD-labeled antibodies specifically bound the H5 or H9
subtype viruses and were then captured by the coating antibodies at test line 1 or 2 to form a sandwich complex; QD-labeled antibodies that were not bound to the H5 or H9 subtype virus were captured by the goat anti-mouse IgG antibodies at the control line. In the absence of influenza A virus subtype H5 or H9 in the sample, the QD-labeled antibodies were not captured by the coating antibodies at test line 1 or 2 but were only captured by the goat antimouse IgG antibodies at the control line. When only virus and antibodies were added onto the strip, the coating antibodies capture the complex well, but neither the test line nor the control line will show fluorescence signal. The captured QDs produced a bright fluorescent band in response to 365 nm ultraviolet excitation. The fluorescence signals from the captured QDs were scanned by a fluorescence test strip scanner. The fluorescence intensity is directly proportional to the amount of QD particles and virus complex on the test line of the strip, whereas the lowest fluorescence signal intensity closely correlates with the detection limit of the QD-LFIAS. The detection time was tested by adding H5 and H9 antigens at 16 hemagglutinating units (HAUs) onto the sample pad of the QD-LFIAS strip, which was scanned once per minute from 3 to 50 min by the fluorescence test strip scanner. Fifty negative samples were detected by QDs-LFIAS; the average signal value was calculated, and double this value was defined as the cutoff value. Specifically, the cutoff value for the H5 and H9 test lines were 205 a.u. and 170 a.u., respectively. Fluorescence intensities above and below these values were classified as positive and negative, respectively, for the respective tests. The limit of detection (LOD) of this system was identified by detecting samples containing various amounts of the H5 and H9 antigens. Briefly, high-concentration solutions of H5 and H9 antigens (128 HAU) were twofold diluted with 20 mM PBS (64, 32,16, 8, 4, 2,1,1/2,1/4,1/8,1/16, 1/32, 1/64 and 1/128 HAU) and individually added onto the QD-LFIAS; 20 mM PBS was added as a negative control
Microliters หกสิบอย่างถูกผสมกับ 2 μ L H5 และ H9 QD-Abs จากนั้น เพิ่มลงบนแผ่นตัวอย่างของแถบ QD LFIASเมื่อไข้หวัดใหญ่ไวรัสชนิดย่อย H5 หรือ H9 เพิ่มตัวอย่าง แอนตี้ชื่อ QD เฉพาะผูก H5 หรือ H9ไวรัสชนิดย่อย และจากนั้นถูกจับ โดยแอนตี้เคลือบที่ทดสอบสาย 1 หรือ 2 แบบแซนด์วิชซับซ้อน แอนตี้ที่ชื่อ QD ที่ถูกผูกไว้กับไวรัสชนิดย่อย H5 หรือ H9 ถูกจับ โดยแอนตี้หา igg จำเพาะเมาส์ป้องกันแพะที่บรรทัดควบคุม ในไข้หวัดใหญ่ไวรัสชนิดย่อย H5 หรือ H9 ในตัวอย่าง แอนตี้ชื่อ QD ไม่จับภาพ โดยการเคลือบแอนตี้ที่ทดสอบสาย 1 หรือ 2 แต่ถูกจับเท่านั้น โดยแพะ antimouse หา igg จำเพาะแอนตี้ที่บรรทัดควบคุม เมื่อไวรัสและแอนตี้เท่านั้นถูกเพิ่มลงในแถบ แอนตี้เคลือบจับดีซับซ้อน แต่ไม่ทดสอบบรรทัดหรือบรรทัดควบคุมจะแสดงสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ QDs จับผลิตวงเรืองแสงสว่างที่ 365 nm รังสีไฟฟ้า สัญญาณฟลูออเรสเซนต์จาก QDs จับถูกสแกน ด้วยสแกนเนอร์แถบทดสอบสารเรืองแสง ความเข้มข้นของสารเรืองแสงเป็นสัดส่วนโดยตรงกับจำนวนอนุภาค QD และไวรัสที่ซับซ้อนบนบรรทัดการทดสอบของแถบ ในขณะที่ความเข้มข้นต่ำสุดของสัญญาณเรืองแสงคู่กับ QD-LFIAS จำนวนตรวจสอบอย่างใกล้ชิด เวลาการตรวจสอบทดสอบ โดยการเพิ่ม H5 และ H9 antigens 16 hemagglutinating หน่วย (HAUs) ลงบนแผ่นตัวอย่างของ QD LFIAS สตริป ซึ่งถูกสแกนครั้งต่อนาทีจาก 3 ถึง 50 นาที โดยการเรืองแสง ทดสอบแถบสแกนเนอร์ ตัวอย่างลบห้าสิบพบ โดย QDs-LFIAS คำนวณค่าเฉลี่ยของสัญญาณ และสองค่านี้ถูกกำหนดเป็นค่าที่ตัดยอด เฉพาะ ค่าตัด H5 และ H9 ทดสอบบรรทัดได้ 205 a.u. และ 170 a.u. ตามลำดับ ปลดปล่อยสารเรืองแสงด้านบน และด้าน ล่างค่าเหล่านี้ที่ถูกจัดประเภทเป็นบวก และ ลบ ตามลำดับ การทดสอบที่เกี่ยวข้อง ขีดจำกัดของการตรวจสอบ (LOD) ของระบบนี้พบ โดยการตรวจหาตัวอย่างที่ประกอบด้วยจำนวนต่าง ๆ antigens H5 และ H9 สั้น ๆ โซลูชั่นเข้มข้นสูงของ H5 และ H9 antigens (โห่ 128) ได้สองเท่ากับ 20 มม. PBS (64, 32,16, 8, 4, 2,1,1/2,1/4,1/8,1/16, 1/32, 1/64 และ 1/128 โห่) และแยกเข้า QD-LFIAS 20 มม. PBS ถูกเพิ่มเป็นตัวลบ
การแปล กรุณารอสักครู่..
หกสิบไมโครลิตรของกลุ่มตัวอย่างได้รับการผสมกับ 2 μลิตร H5 และ H9 QD-ABS และเพิ่มแล้วลงบนแผ่นตัวอย่างของแถบ QD-LFIAS.
เมื่อไข้หวัดใหญ่เอ H5 ย่อยไวรัสหรือ H9 ถูกบันทึกอยู่ในตัวอย่างที่ QD ติดฉลาก แอนติบอดีเฉพาะผูกพัน H5 หรือ H9
ย่อยไวรัสและถูกจับแล้วโดยแอนติบอดีเคลือบที่บรรทัดทดสอบ 1 หรือ 2 ในรูปแบบที่ซับซ้อนแซนวิช; แอนติบอดี QD ป้ายที่ไม่ได้ถูกผูกไว้กับ H5 หรือไวรัสชนิดย่อย H9 ถูกจับโดยแพะแอนติบอดีต่อต้านเมาส์ IgG ที่เส้นควบคุม ในกรณีที่ไม่มีโรคไข้หวัดใหญ่ A H5 ย่อยไวรัสหรือ H9 ในตัวอย่างที่แอนติบอดี QD ติดฉลากไม่ถูกจับโดยแอนติบอดีเคลือบที่บรรทัดทดสอบ 1 หรือ 2 แต่ถูกจับโดยแพะ antimouse ละภูมิคุ้มกันที่เส้นควบคุมเท่านั้น เมื่อไวรัสเท่านั้นและแอนติบอดีถูกเพิ่มลงในแถบแอนติบอดีเคลือบจับภาพที่ซับซ้อนได้ดี แต่ก็ยังไม่สายทดสอบมิได้สายควบคุมจะแสดงสัญญาณการเรืองแสง QDS จับผลิตวงเรืองแสงสดใสในการตอบสนองต่อการกระตุ้นอัลตราไวโอเลต 365 นาโนเมตร สัญญาณการเรืองแสงจาก QDS จับถูกสแกนด้วยเครื่องสแกนเนอร์แถบทดสอบการเรืองแสง ความเข้มของการเรืองแสงเป็นสัดส่วนโดยตรงกับปริมาณของอนุภาค QD และซับซ้อนไวรัสบนเส้นทดสอบของแถบในขณะที่ต่ำสุดเรืองแสงความเข้มของสัญญาณอย่างใกล้ชิดมีความสัมพันธ์กับขีด จำกัด ของการตรวจสอบของ QD-LFIAS เวลาการตรวจสอบได้รับการทดสอบโดยการเพิ่ม H5 และ H9 แอนติเจนที่ 16 หน่วย hemagglutinating (Haus) ลงบนแผ่นตัวอย่างของแถบ QD-LFIAS ซึ่งได้รับการสแกนครั้งเดียวต่อนาที 3-50 นาทีโดยการเรืองแสงสแกนเนอร์แถบทดสอบ ห้าสิบตัวอย่างเชิงลบตรวจพบโดย QDS-LFIAS; ค่าเฉลี่ยสัญญาณที่คำนวณได้และดับเบิลค่านี้ถูกกำหนดเป็นค่าตัด โดยเฉพาะค่าตัดสำหรับ H5 และ H9 สายการทดสอบ 205 ฿ 170 ฿ตามลำดับ เรืองแสงความเข้มบนและด้านล่างค่าเหล่านี้ถูกจัดให้เป็นบวกและลบตามลำดับสำหรับการทดสอบที่เกี่ยวข้อง ขีด จำกัด ของการตรวจสอบ (LOD) ของระบบนี้ถูกระบุโดยการตรวจสอบตัวอย่างที่มีปริมาณต่างๆของ H5 และแอนติเจน H9 สั้น ๆ , การแก้ปัญหาความเข้มข้นสูงของ H5 และ H9 แอนติเจน (128 HAU) ได้รับการปรับลดสองเท่ากับ 20 มิลลิเมตรพีบีเอส (64, 32,16, 8, 4, 2,1,1 / 2,1 / 4,1 / 8,1 / 16, 1/32, 1/64 และ 1/128 HAU) และรายบุคคลเพิ่มบน QD-LFIAS; 20 มิลลิเมตรพีบีเอสถูกเพิ่มเข้ามาเป็นตัวควบคุมเชิงลบ
การแปล กรุณารอสักครู่..
หกตัวเลขตัวอย่างผสมกับ 2 μลิตรและควอนตัมด็อต h5 h9 ABS แล้วเพิ่มลงบนแผ่นตัวอย่างของ qd-lfias แถบเมื่อไวรัสไข้หวัดใหญ่ชนิดย่อย h5 หรือ h9 เพิ่มเติมตัวอย่าง , ควอนตัมด็อตติดป้ายแอนติบอดีเฉพาะผูก h5 หรือ h9ทั้งไวรัสและถูกจับโดยเคลือบแอนติบอดีการทดสอบสาย 1 หรือ 2 รูปแบบแซนวิชที่ซับซ้อน ; ควอนตัมด็อตติดป้ายแอนติบอดีที่ไม่ได้ถูกผูกไว้กับ h5 หรือ h9 ชนิดย่อยของไวรัสถูกจับโดยแพะ IgG anti เมาส์ที่เส้นควบคุม ในการขาดของไวรัสไข้หวัดใหญ่ชนิดย่อย h5 หรือ h9 ในตัวอย่าง , ควอนตัมด็อตติดป้ายแอนติบอดีไม่จับ โดยเคลือบแอนติบอดีการทดสอบสาย 1 หรือ 2 แต่แค่จับแพะ antimouse IgG ที่เส้นควบคุม เมื่อไวรัสและภูมิคุ้มกันเพิ่มไปยังแถบเคลือบแอนติบอดีจับที่ซับซ้อนได้ดี แต่ไม่มีการทดสอบเส้นหรือเส้นเรืองแสงควบคุมจะแสดงสัญญาณ ถ่ายสว่างเรืองแสงวงควอนตัมด็อตที่ผลิตในการตอบสนองต่อ 365 nm ยูวีกระตุ้น . เรืองแสงด้วยสัญญาณจากจับควอนตัมด็อตถูกสแกนโดยเรืองแถบทดสอบเครื่องสแกนเนอร์ เรืองแสงเข้มเป็นสัดส่วนโดยตรงกับปริมาณของอนุภาคควอนตัมด็อตและไวรัสที่ซับซ้อนในแนวข้อสอบของแถบ ในขณะที่ค่าความเข้มของสัญญาณการอย่างใกล้ชิดมีความสัมพันธ์กับขีดจำกัดของ qd-lfias . การตรวจสอบเวลา การทดสอบโดยการเพิ่มและ h5 h9 แอนติเจนที่ 16 hemagglutinating หน่วย ( Haus ) ลงบนแผ่นตัวอย่างของ qd-lfias แถบซึ่งได้รับการสแกนครั้งต่อนาที 3 ถึง 50 นาที โดยการทดสอบแถบสแกนเนอร์ ตัวอย่างลบห้าสิบถูกตรวจพบโดยควอนตัมด็อต lfias ; ค่าสัญญาณเฉลี่ยที่คำนวณได้ และสองค่านี้ถูกกำหนดไว้เป็นค่าทางลัด โดยเฉพาะค่าตัดสำหรับ h5 และสายการทดสอบ h9 จำนวน 205 a.u. และ 170 a.u. ตามลำดับ เรืองแสงเข้มด้านบนและด้านล่างค่าเหล่านี้ถูกจัดให้เป็นบวกและลบตามลำดับ สำหรับการทดสอบที่เกี่ยวข้อง ขีดจำกัดของการตรวจหา ( LOD ) ระบบนี้ถูกระบุโดยการตรวจสอบตัวอย่างที่มีปริมาณต่างๆของ h5 และ h9 แอนติเจน สั้น ๆ , ความเข้มข้นสูงและโซลูชั่นของ h5 h9 แอนติเจน ( 128 นี้ ) เป็นสองเท่าที่เจือจางกับ 20 มม. PBS ( 64 , 32,16 , 8 , 4 , 2,1,1 / 2.1 / 4 , 1 / 8,1 / 16 1 / 32 , 1 / 64 1 / 128 นี้ ) และแบบเพิ่มไปยัง qd-lfias 20 มม. มีช่อง เป็นควบคุมลบ
การแปล กรุณารอสักครู่..