We have developed methods for coval

We have developed methods for covalently joining duplex DNA molecules to one another and have used these techniques to construct circular dimers of SV40 DNA and to insert a DNA segment containing lambda phage genes and the galactose operon of E. coli into SV40 DNA. The method involves: (a) converting circular SV40 DNA to a linear form, (b) adding single-stranded homodeoxypolymeric extensions of defined composition and length to the 3′ ends of one of the DNA strands with the enzyme terminal deoxynucleotidyl transferase (c) adding complementary homodeoxypolymeric extensions to the other DNA strand, (d) annealing the two DNA molecules to form a circular duplex structure, and (e) filling the gaps and sealing nicks in this structure with E. coli DNA polymerase and DNA ligase to form a covalently closed-circular DNA molecule.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เรามีพัฒนาวิธีที่ covalently ร่วมสองโมเลกุลดีเอ็นเอเดียวกัน และใช้เทคนิคเหล่านี้ เพื่อสร้าง dimers กลมของ SV40 ดีเอ็นเอ และแทรกส่วนดีเอ็นเอที่ประกอบด้วยยีน phage แลมบ์ดาและ operon กาแล็กโทสของ E. coli ลงในดีเอ็นเอของ SV40 วิธีการ: (ก) แปลงดีเอ็นเอ SV40 วงการแบบเส้นตรง (ข) เพิ่ม homodeoxypolymeric เดียวที่ควั่นส่วนขยายการกำหนดองค์ประกอบ และยาวปลาย 3′ ของดีเอ็นเอหนึ่งปอยกับ transferase deoxynucleotidyl นัลเอนไซม์ (c) เพิ่มส่วนขยาย homodeoxypolymeric เสริมดาวดีเอ็นเออื่น ๆ การหลอมทั้งสองโมเลกุลดีเอ็นเอแบบสองโครงสร้างแบบวงกลม (d) และ (จ) เติมช่องว่าง และปิดผนึก nicks ในโครงสร้างนี้มีพอลิเมอเรส DNA ไลและ DNA ligase จะ แบบโมเลกุลดีเอ็นเอ covalently ปิดวงเดือน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เราได้มีการพัฒนาวิธีการในการเข้าร่วมโควาเลนต์เพล็กซ์โมเลกุลดีเอ็นเอกับอีกคนหนึ่งและได้ใช้เทคนิคเหล่านี้เพื่อสร้าง dimers วงกลม SV40 DNA และการแทรกส่วนดีเอ็นเอที่มียีนแลมบ์ดา phage และ operon กาแลคโตของเชื้อ E. coli เข้า SV40 ดีเอ็นเอ วิธีการที่เกี่ยวข้องกับ (ก) การแปลงดีเอ็นเอ SV40 วงกลมเพื่อเป็นรูปแบบเชิงเส้น (ข) การเพิ่มส่วนขยาย homodeoxypolymeric เดียวควั่นขององค์ประกอบที่กำหนดไว้และระยะเวลาในการ 3 'ปลายแห่งหนึ่งของดีเอ็นเอกับ transferase ขั้วเอนไซม์ deoxynucleotidyl (c) เพิ่มส่วนขยาย homodeoxypolymeric ประกอบกับกลุ่มสาระอื่น ๆ ดีเอ็นเอ (ง) การเผาสองโมเลกุลดีเอ็นเอในรูปแบบโครงสร้างวงกลมเพล็กซ์และ (จ) การเติมช่องว่างและการปิดผนึกชื่อเล่นในโครงสร้างนี้กับอีดีเอ็นเอโพลิเมอร์ coli และลิกาเซดีเอ็นเอในรูปแบบ ดีเอ็นเอโมเลกุลโควาเลนต์ปิดวงกลม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เราได้พัฒนาวิธีการ covalently เข้าร่วมเพล็กซ์ดีเอ็นเอโมเลกุลอีกแบบหนึ่ง และ ได้ใช้เทคนิคเหล่านี้เพื่อสร้างวงกลมของดีเอ็นเอ และสาย sv40 แทรกส่วนดีเอ็นเอที่มียีนและแลมด้าฟากาแลกโตสโอเปอรอนของ E . coli ใน sv40 ดีเอ็นเอ วิธีนี้เกี่ยวข้องกับ ( ก ) แปลงดีเอ็นเอ sv40 กลมรูปแบบเชิงเส้น , ( ข ) การเพิ่มเดียวติด homodeoxypolymeric ขยายกำหนดองค์ประกอบและความยาวถึงปลาย 3 ’ของดีเอ็นเอเส้นด้วยเอนไซม์ของ deoxynucleotidyl เทอร์มินัล ( C ) เพิ่มเสริม homodeoxypolymeric ส่วนขยายของเส้นดีเอ็นเอ อื่น ๆ , ( D ) อบที่สองดีเอ็นเอของโมเลกุลในรูปแบบโครงสร้าง ดูเพล็กซ์ วงกลม และ ( จ ) การอุดช่องว่างและปิดผนึก Nicks ในโครงสร้างนี้กับ E . coli และ DNA polymerase ดีเอ็นเอไลเกส ในรูปแบบโมเลกุลดีเอ็นเอรูปวงกลม covalently ถูกปิด