Materials and methodsThe adults of

Materials and methods
The adults of S. bispinosa were collected from the paddy field of Kuttanadu of Southern Kerala. The genomic DNA was extracted using GeNei Ultrapure Mammalian Genomic DNA Prep Kit (Bangalore GeNei, Bangalore) as per the Manufacturer’s instruction. The partial gene sequence of COI of S. bispinosa was PCR amplified using the forward primer with DNA sequence 5'CATTGGAGATGACCAAATTTATAATG3' and the reverse primer with DNA sequence 5' TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA 3'. The PCR reaction mixture consisted of 2 nanogram of genomic DNA in 1 μl , 1 μl each forward and reverse primers at a concentration of 10 μM, 2.5 μl of dNTPs (2 mM), 2.5 μl 10X reaction buffer, 0.20 μl Taq polymerase (5 U/μl) and 16.8 μl H2O. The PCR temperature profile consisted of 950C/3 minutes as initial denaturation and followed by 45 cycles of 950C/10 seconds, 500C/45 seconds, 720C/45 seconds and with a final extension of 720C for 3 minutes. The PCR amplified product was column purified using Mo Bio UltraClean PCR Clean-up Kit (Mo Bio Laboratories, Inc. California) as per the manufacturer’s instructions. The purified product was sequenced with forward and reverse primers using the Sanger’s sequencing method at SciGenom Labs, Cochin. The forward and reverse sequence was aligned and the consensus sequence was used for analysis. The phylogeny analysis was done using the MEGA5 software.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการผู้ใหญ่ของ S. bispinosa ได้รวบรวมจากนาของเกรละ Kuttanadu ภาคใต้ ดีเอ็นเอ genomic ถูกสกัดโดยใช้ GeNei Ultrapure Mammalian Genomic DNA เตรียมชุด (GeNei บังกาลอร์ บังกาลอร์) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ลำดับยีนบางส่วนของ COI ของ S. bispinosa ถูกขยายโดยใช้รองพื้นไปข้างหน้ากับ DNA PCR ลำดับ 5' CATTGGAGATGACCAAATTTATAATG3 'และพื้นกลับกับ DNA ลำดับ TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA 3 5' ' ส่วนผสมของปฏิกิริยา PCR ประกอบด้วยของ nanogram 2 ของ genomic DNA ใน μl 1, 1 μl ละไพรเมอร์ไปข้างหน้า และย้อนกลับที่ความเข้มข้นของ 10 μM, μl 2.5 ของ dNTPs (2 มิลลิเมตร) 2.5 μl 10 X บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 0.20 μl พอลิเมอเรส Taq (5 U/μl) และ 16.8 μl H2O โพรไฟล์อุณหภูมิ PCR consisted ของ 950C/3 นาทีเป็น denaturation แรก และตาม ด้วย 45 รอบ 950C/10 วินาที 45 วินาที 500C, 720C/45 วินาที และสุดท้ายขยายของ 720C นาที 3 ผลิตภัณฑ์ PCR เอาต์เป็นคอลัมน์ที่บริสุทธิ์โดยใช้ชุดการล้างหม้อไบ UltraClean PCR (ห้องปฏิบัติการชีวภาพ Mo, Inc. แคลิฟอร์เนีย) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์ถูกเรียงลำดับ โดยใช้วิธีจัดลำดับของ Sanger ที่ SciGenom Labs ชิไพรเมอร์ไปข้างหน้า และย้อนกลับ มีจัดลำดับไปข้างหน้า และย้อนกลับ และลำดับมติที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ วิเคราะห์ phylogeny ใช้ซอฟต์แวร์ MEGA5

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการที่ผู้ใหญ่ของ bispinosa เอสที่ถูกเก็บรวบรวมจากนาข้าวของ Kuttanadu ทางใต้ของเกรละ
ดีเอ็นเอจีโนมถูกสกัดโดยใช้ GeNei บริสุทธิ์ Mammalian จีโนมดีเอ็นเอเตรียม Kit (บังกาลอร์ GeNei บังกาลอร์) ตามคำสั่งของผู้ผลิต ลำดับยีน COI บางส่วนของเอส bispinosa เป็นขยาย PCR โดยใช้ไพรเมอร์ไปข้างหน้าด้วยลำดับดีเอ็นเอ 5'CATTGGAGATGACCAAATTTATAATG3 และไพรเมอร์กลับมีลำดับดีเอ็นเอ 5 'TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA 3' ผสมปฏิกิริยา PCR ประกอบด้วย 2 นาโนกรัมของดีเอ็นเอใน 1 ไมโครลิตร 1 ไมโครลิตรแต่ละข้างหน้าและไพรเมอร์กลับที่ความเข้มข้น 10 ไมครอนขนาด 2.5 ไมโครลิตรของ dNTPs (2 มิลลิเมตร) 2.5 ไมโครลิตร 10X บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 0.20 ไมโครลิตรโพลิเมอร์ Taq (5 U / ไมโครลิตร) และ 16.8 ไมโครลิตร H2O รายละเอียดอุณหภูมิ PCR ประกอบด้วย 950C / 3 นาทีเป็น denaturation เริ่มต้นและตามด้วย 45 รอบของ 950C / 10 วินาที 500C / 45 วินาที 720C / 45 วินาทีและมีนามสกุลสุดท้ายของ 720C เป็นเวลา 3 นาที ผลิตภัณฑ์ที่ได้รับการขยาย PCR คอลัมน์บริสุทธิ์โดยใช้ไบโอโม ultraclean PCR ชุดทำความสะอาด (ไบโอโม Laboratories, Inc แคลิฟอร์เนีย) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ผลิตภัณฑ์ที่บริสุทธิ์ได้ติดใจกับไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์โดยใช้วิธีการจัดลำดับแซงเจอร์ที่ SciGenom Labs ตะเภา ไปข้างหน้าและย้อนกลับลำดับสอดคล้องและลำดับฉันทามติที่ถูกใช้ในการวิเคราะห์ การวิเคราะห์เชื้อชาติที่ได้กระทำโดยใช้ซอฟต์แวร์ MEGA5

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
ผู้ใหญ่ของสหรัฐอเมริกา bispinosa ที่เก็บจากนาข้าวของ kuttanadu ทางใต้ของเกรละ ดีเอ็นเอจีโนมถูกสกัดโดยใช้ genei ดีเอ็นเอบริสุทธิ์มาก ) เตรียมชุด ( บังกาลอร์ genei Bangalore ) ตามคำสั่งของผู้ผลิต ส่วนยีน ลำดับผม S .bispinosa คือ PCR โดยใช้ไพรเมอร์ของไปข้างหน้ากับ 5'cattggagatgaccaaatttataatg3 ' ลำดับดีเอ็นเอและย้อนกลับ ไพรเมอร์กับดีเอ็นเอลำดับ taaacttcagggtgaccaaaaaatca 5 ' 3 ' การตรวจปฏิกิริยาผสมประกอบด้วย 2 นาโนกรัมของดีเอ็นเอใน 1 μ L 1 μ L แต่ละไปข้างหน้าและย้อนกลับชนิดที่ระดับความเข้มข้น 10 μ M 2.5 μ l dntps ( 2 มม. ) , 2.5 μผม 10x ปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ , 0ผมใช้ 20 μทัค ( 5 U / μ L ) และ 16.8 μ L h2o pcr โปรไฟล์อุณหภูมิ จำนวน 950c / 3 นาที เป็นครั้งแรก ( และตามด้วย 45 รอบ 950c / 10 วินาที , 500C / 45 วินาที 720c / 45 วินาที และงานสุดท้ายของ 720c เป็นเวลา 3 นาที ร่วมขยายผลิตภัณฑ์คอลัมน์บริสุทธิ์ใช้โมไบโอ สะอาดปราศจากเชื้อโรค PCR ทำความสะอาดชุด ( โมไบห้องปฏิบัติการ , Incแคลิฟอร์เนีย ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ทำให้ผลิตภัณฑ์นี้ไปข้างหน้าและย้อนกลับด้วยไพรเมอร์โดยใช้วิธีการจัดลำดับของแซงเกอร์ที่ scigenom Labs , ไก่ตะเภา ไปข้างหน้าและย้อนกลับลำดับเป็นลำดับสอดคล้องและฉันทามติที่ใช้ในการวิเคราะห์ การวิเคราะห์ระบบเชื้อชาติ โดยใช้ mega5 ซอฟต์แวร์