Isolation of the antifungal protein

Isolation of the antifungal protein
The SIP solution was passed through a Bio-Gel P-6
(16 mm 300 mm) gel filtration column on an ÄKTA Prime system
(GE Healthcare, USA) to remove the ammonium sulphate. The column
was first equilibrated with 20 mM buffer SA (pH 5.2). The protein
was then eluted using the same buffer at a flow rate of
1.0 mL min1
. The antifungal activity against A. niger was monitored
in each fraction. The antifungal fraction was used for a cation
exchange chromatography step on a HiPrep 16/10 CM FF column
pre-equilibrated with 20 mM buffer SA (pH 5.2) on an ÄKTA Prime
system. Following removal of the unabsorbed proteins with the
above buffer, the absorbed proteins were eluted with a linear gradient
of NaCl (0–1 M) in the same buffer. The antifungal fractions
were pooled, concentrated and centrifuged at 16,500g for
10 min, and the supernatant was then applied to another gel filtration
column, a HiLoad 16/60 Superdex 30 column, that was preequilibrated
with the same buffer on the same chromatography
system. The column was eluted with 20 mM buffer SA (pH 5.2) at
a flow rate of 0.8 mL min1
. After the antifungal fraction was
concentrated and centrifuged at 16,500g for 10 min, the supernatant
was further purified by reversed-phase high-performance
liquid chromatography (HPLC) using a SOURCE 5RPC column
(4.6 mm 150 mm, 5 lm) equilibrated with distilled water on an
ÄKTA Explorer 10S system (GE Healthcare, USA). The fraction
was eluted with distilled water over 5 min followed by a linear
gradient of 0–50% acetonitrile over 50 min at a flow rate of
1 mL min1
. The individual peak fractions were collected and then
concentrated in 2-kDa molecular weight cut-off dialysis tubing
(Sigma, USA) with 20 kDa molecular mass of polyethylene glycol
as water absorber. After dialysis against ultra purified water, the
samples were further analysed. All purification steps were
perfo

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แยกโปรตีนต้านเชื้อราโซลูชัน SIP ถูกส่งผ่านเป็น P-6 ไบโอเจล(16 มม. 300 มม.) คอลัมน์กรองเจบนระบบ ÄKTA นายก(GE ดูแลสุขภาพ สหรัฐอเมริกา) เพื่อเอาแอมโมเนียมซัลเฟต คอลัมน์เป็นครั้งแรก equilibrated กับ 20 มม.บัฟเฟอร์ (pH 5.2) SA โปรตีนแก้ไขแล้ว eluted ใช้บัฟเฟอร์เดียวที่อัตราการไหลของ1.0 mL min1. แก้ไขการตรวจสอบฤทธิ์ต้านกับ A. ไนเจอร์ในแต่ละส่วน ใช้เศษส่วนเชื้อราสำหรับไอออนexchange chromatography ขั้น HiPrep เป็นคอลัมน์ FF 16/10 ซม.equilibrated ก่อน ด้วยบัฟเฟอร์ขนาด 20 มม. SA (pH 5.2) มีนายก ÄKTAระบบ ต่อการกำจัดโปรตีนแช็คกับการข้างบนบัฟเฟอร์ โปรตีนดูดซึมถูก eluted กับการไล่ระดับสีเชิงเส้นของ NaCl (0 – 1 เมตร) ในบัฟเฟอร์เดียวกัน ส่วนเชื้อรามีพู เข้มข้น และเหวี่ยงที่ 16,500g สำหรับ10 นาที และ supernatant นำมาใช้เพื่อกรองเจอีกคอลัมน์ คอลัมน์ Superdex 30 HiLoad 16/60 ที่ถูก preequilibratedด้วยบัฟเฟอร์บน chromatography เดียวเดียวกันระบบ คอลัมน์ถูก eluted กับ 20 มม. SA บัฟเฟอร์ (pH 5.2) ที่อัตราการไหล 0.8 mL min1. หลังจากเศษส่วนเชื้อราเข้มข้น และเหวี่ยงที่ 16,500g 10 นาที supernatantบริสุทธิ์ โดยเฟสกลับมีประสิทธิภาพสูงต่อไปของเหลว chromatography (HPLC) ใช้คอลัมน์ต้นฉบับ 5RPC(4.6 มม. 150 มม. 5 lm) equilibrated ด้วยน้ำกลั่นในการระบบ ÄKTA Explorer 10S (GE ดูแลสุขภาพ สหรัฐอเมริกา) เศษส่วนมี eluted ด้วยน้ำกลั่นกว่า 5 นาทีตาม ด้วยการเชิงเส้นไล่ระดับสีของ acetonitrile 0-50% กว่า 50 นาทีที่อัตราการไหลของmin1 1 มล.. เศษส่วนแต่ละ peak ถูกรวบรวมไว้แล้วความเข้มข้นในท่อไตตัดน้ำหนักโมเลกุล 2-kDa(ซิกม่า สหรัฐอเมริกา) มีมวลโมเลกุล kDa 20 ของเอทิลีนไกลคอลเป็นตัวดูดซับน้ำ หลังจากฟอกไตกับน้ำบริสุทธิ์พิเศษ การตัวอย่างถูกนำมาวิเคราะห์เพิ่มเติม ทุกขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ได้perfo

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกโปรตีนต้านเชื้อรา
วิธีการแก้ปัญหาที่ถูกส่งผ่าน SIP ผ่าน Bio-Gel P-6
(16 มิลลิเมตร 300 มิลลิเมตร) คอลัมน์กรองเจลในระบบ Akta นายกรัฐมนตรี
(GE Healthcare, สหรัฐอเมริกา) ที่จะเอาแอมโมเนียมซัลเฟต คอลัมน์
เป็นครั้งแรก equilibrated กับ 20 มิลลิเมตรบัฟเฟอร์ SA (pH 5.2) โปรตีนที่
ถูกชะแล้วใช้บัฟเฟอร์เดียวกันในอัตราการไหล
1.0 มล
min1 กิจกรรมต้านเชื้อรา A. กับไนเจอร์ได้รับการตรวจสอบ
ในแต่ละส่วน ส่วนเชื้อราได้ถูกใช้สำหรับไอออนบวก
ขั้นตอนโครมาแลกเปลี่ยนในคอลัมน์ HiPrep 16/10 CM FF
ก่อน equilibrated กับ 20 มิลลิเมตรบัฟเฟอร์ SA (pH 5.2) บน Akta นายกรัฐมนตรี
ระบบ ต่อไปนี้การกำจัดของโปรตีน unabsorbed กับ
กันชนข้างต้นโปรตีนการดูดซึมที่ถูกชะกับลาดเชิงเส้น
ของโซเดียมคลอไรด์ (0-1 เมตร) ในบัฟเฟอร์เดียวกัน เศษส่วนเชื้อรา
ถูกรวบรวมเข้มข้นและหมุนเหวี่ยงที่ 16,500g สำหรับ
10 นาทีและใสถูกนำไปใช้แล้วกรองอีกเจล
คอลัมน์เป็น HiLoad 16/60 Superdex 30 คอลัมน์ที่ preequilibrated
กับบัฟเฟอร์เดียวกันบนโครมาโตเดียวกัน
ระบบ คอลัมน์นี้ถูกชะกับ 20 มิลลิเมตรบัฟเฟอร์ SA (pH 5.2) ที่
มีอัตราการไหล 0.8 มล
min1 หลังจากที่ส่วนเชื้อราได้รับ
ความเข้มข้นและหมุนเหวี่ยงที่ 16,500g เป็นเวลา 10 นาที, ใส
บริสุทธิ์ต่อไปโดยย้อนกลับเฟสที่มีประสิทธิภาพสูง
ของเหลว chromatography (HPLC) โดยใช้แหล่ง 5RPC คอลัมน์
(4.6 มิลลิเมตร 150 มิลลิเมตร, 5 LM) equilibrated ด้วยน้ำกลั่น บน
ระบบ Akta Explorer ที่ 10S (GE Healthcare, สหรัฐอเมริกา) ส่วนที่
ถูกชะด้วยน้ำกลั่นกว่า 5 นาทีตามด้วยการเชิงเส้น
ไล่ระดับ 0-50% acetonitrile กว่า 50 นาทีที่อัตราการไหล
1 มิลลิลิตร
min1 เศษส่วนสูงสุดของแต่ละบุคคลที่ถูกเก็บรวบรวมและจากนั้น
ความเข้มข้นใน 2 กิโลดาลตันน้ำหนักโมเลกุลตัดท่อล้างไต
(Sigma, สหรัฐอเมริกา) 20 kDa มวลโมเลกุลของ polyethylene glycol
เป็นโช้คน้ำ หลังจากการล้างไตกับน้ำบริสุทธิ์พิเศษที่
ตัวอย่างที่ได้มาวิเคราะห์ต่อไป ขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์ทั้งหมดถูก
Perfo

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกโปรตีนสารต้านเชื้อราจิบโซลูชั่นได้ผ่าน p-6 ไบโอ เจล( 16 มม. 300 มม. ) คอลัมน์เจลฟิลที่ IKEA ได้รับเฉพาะระบบ( GE Healthcare , USA ) เพื่อลบแอมโมเนียมซัลเฟต คอลัมน์เป็นครั้งแรกที่ equilibrated กับซาเฟอร์ 20 มม. ( pH 5.2 ) โปรตีนตัวอย่างการใช้บัฟเฟอร์เดียวกันและที่อัตราการไหลของmin1 1.0 มิลลิลิตร. การต่อต้านเชื้อรา A . niger คือการตรวจสอบกิจกรรมในแต่ละเสี้ยว ส่วนเชื้อราที่ใช้สำหรับการแลกเปลี่ยนเทคนิคขั้นตอนใน FF hiprep 16 / 10 เซนติเมตร คอลัมน์ก่อน equilibrated กับซาเฟอร์ 20 มม. ( pH 5.2 ) ใน IKEA ได้รับนายกรัฐมนตรีระบบ ต่อไปนี้การกำจัดโปรตีน unabsorbed กับเหนือกันชน , ดูดซึมโปรตีนได้ตัวอย่างกับลาดเชิงเส้นของเกลือโซเดียมคลอไรด์ ( 0 – 1 M ) ในบัฟเฟอร์เดียวกัน เศษส่วนเชื้อราเป็นพู เข้มข้น ระดับที่ 16500g สำหรับ10 นาที และนำแล้วใช้เจลแบบอื่นคอลัมน์ , hiload 16 / 60 superdex 30 คอลัมน์ นั่นคือ preequilibratedกับบัฟเฟอร์เดียวกันบนเครื่องเดียวกันระบบ คอลัมน์เป็นตัวอย่างกับซาบัฟเฟอร์ pH 5.2 ) ที่ 20 มม.อัตราการไหลของ min1 0.8 มิลลิลิตร. หลัง ส่วนการเจริญของเชื้อราเข้มข้นและระดับที่ 16500g เป็นเวลา 10 นาที น่านเพิ่มเติมโดย reversed-phase บริสุทธิ์ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography ( HPLC ) แหล่งที่ใช้ 5rpc คอลัมน์( 4.6 มิลลิเมตร 150 มม. 5 กล. ) equilibrated ด้วยน้ำกลั่นในระบบ Explorer ที่ IKEA ได้รับ 10s ( GE สุขภาพ , USA ) เศษส่วนมีตัวอย่างด้วยน้ำกลั่นมากกว่า 5 นาที ตามด้วยการเชิงเส้นไล่ระดับ 0 – 50 % ไนกว่า 50 นาที ที่อัตราการไหลของmin1 1 มิลลิลิตร. เศษส่วนสูงสุดแต่ละครั้งนี้แล้วเข้มข้นใน 2-kda น้ำหนักโมเลกุลตัดท่อไต( Sigma , USA ) กับ 20 kDa มวลโมเลกุลของพอลิเอทิลีนไกลคอลเป็นสารดูดซับน้ำ หลังจากฟอกไตกับ อัลตร้า น้ำบริสุทธิ์ ,ตัวอย่างเพิ่มเติม วิเคราะห์ ทุกขั้นตอนที่บริสุทธิ์คือperfo