DNA Isolation from Strawberries Dev

DNA Isolation from Strawberries Developed by Diane Sweeney http://www.caseciw.org/first_light_case/horn/strawberries/strawbdnaproc.html
Teacher Background This is a simple, effective protocol for spooling DNA. Ripe strawberries are an excellent source for extracting DNA because they are easy to pulverize and contain enzymes called pectinases and cellulases that help to break down cell walls. And most important, strawberries have eight copies of each chromosome (they are octoploid), so there is a lot of DNA to isolate.
The purpose of each ingredient in the procedure is as follows:
Shampoo or dishwasher soap helps to dissolve the cell membrane, which is a lipid bilayer. Sodium chloride helps to remove proteins that are bound to the DNA. It also helps to keep the proteins dissolved in the aqueous layer so they don’t precipitate in the alcohol along with the DNA. Ethanol or isopropyl alcohol causes the DNA to precipitate. When DNA comes out of solution it tends to clump together, which makes it visible. The long strands of DNA will wrap around the stirrer or transfer pipet when it is swirled at the interface between the two layers.
Notes on Materials and Recipes • Use Ziploc TM freezer bags rather than sandwich bags, as they are thicker. • Fresh or frozen strawberries can be used. Be sure to thaw the frozen berries at room temperature. Bananas or kiwi fruit can also be used but yield less DNA. • Use non-iodized table salt or laboratory-grade sodium chloride. • 95% ethanol or 91 or 100% isopropyl alcohol can be used to precipitate the DNA. Isopropyl alcohol can be purchased from a pharmacy. Whichever you use, make sure it is ice cold by placing in an ice-water bath or in the freezer.
DNA Extraction Buffer • 100 ml (3/8 cup) shampoo (without conditioner) or 50 ml dishwasher detergent • 15 grams sodium chloride (2 teaspoons) • water to 1 liter
The GENETICS Project Department of Genome Sciences University of Washington http://chroma.mbt.washington.edu/outreach/genetics 2
DNA Isolation from Strawberries Student Directions
Materials per student group • 1-3 strawberries (about the volume of a golf ball). Frozen strawberries should be thawed at room temperature. • 10 ml DNA Extraction Buffer (soapy salty water) • about 20 ml ice cold 91% or 100% isopropyl alcohol • 1 Ziploc TM bag • 1 clear test tube • 1 funnel lined with a moistened paper towel • 1 coffee stirrer or transfer pipet
Directions 1. Remove the green sepals from the strawberries. 2. Place strawberries into a Ziploc TM bag and seal shut. 3. Squish for a few minutes to completely squash the fruit. 4. Add 10 ml DNA Extraction Buffer (soapy salty water) and squish for a few more minutes. Try not to make a lot of soap bubbles. 5. Filter through a moistened paper towel set in a funnel, and collect the liquid in a clear tube. Do not squeeze the paper towel. Collect about 3 ml liquid. 6. Add 2 volumes ice cold isopropyl alcohol to the strawberry liquid in the tube. Pour the isopropyl alcohol carefully down the side of the tube so that it forms a separate layer on top of the strawberry liquid. 7. Watch for about a minute. What do you see? You should see a white fluffy cloud at the interface between the two liquids. That’s DNA! 8. Spin and stir the coffee stirrer or transfer pipet in the tangle of DNA, wrapping the DNA around the stirrer. 9. Pull out the stirrer and transfer the DNA to a piece of saran wrap or clean tube. The fibers are thousands and millions of DNA strands. 10. To view in a microscope, put the glob on a clean slide and gently tease/stretch apart using 2 toothpicks or dissecting pins. The fibers will be easier to see in the teased-apart area. 11. Rinse your funnel. Put the Ziploc TM bag and paper towel in the garbage. ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ดีเอ็นเอแยกจากสตรอเบอร์รี่พัฒนาโดย Sweeney ไดแอน http://www.caseciw.org/first_light_case/horn/strawberries/strawbdnaproc.html
ครูพื้นหลังนี้เป็นโพรโทคอลที่มีประสิทธิภาพ ง่ายสำหรับ DNA ไม่ สตรอเบอร์รี่สุกเป็นแหล่งดีสำหรับการแยกดีเอ็นเอ เพราะจะง่ายต่อการป่น และประกอบด้วยเอนไซม์ที่เรียกว่า pectinases และ cellulases ที่ช่วยทำลายผนังเซลล์ และสำคัญที่สุด สตรอเบอร์รี่มีแปดสำเนาของแต่ละโครโมโซม (จะ octoploid), จึงมีมากมายของดีเอ็นเอจะแยก
วัตถุประสงค์ของแต่ละส่วนผสมในขั้นตอนจะเป็นดังนี้:
สบู่แชมพูหรือเครื่องล้างจานช่วยไปละลายเซลล์เมมเบรน ซึ่งเป็น bilayer กระบวนการ โซเดียมคลอไรด์ช่วยเอาโปรตีนที่ถูกผูกไว้กับดีเอ็นเอ นอกจากนี้ยังช่วยให้โปรตีนที่ละลายในชั้นอควีดังนั้นพวกเขาไม่ precipitate ในแอลกอฮอล์กับดีเอ็นเอ เอทานอลหรือแอลกอฮอล์ isopropyl ทำให้ดีเอ็นเอเพื่อ precipitate เมื่อดีเอ็นเอออกจากโซลูชันที่จะมีแนวโน้มการ clump กัน ซึ่งทำให้มองเห็น Strands ยาวของดีเอ็นเอจะตัดรอบ ๆ ช้อนคนโอน pipet เมื่อเป็น swirled ที่อินเตอร์เฟซระหว่างเลเยอร์สอง
บันทึกบนวัสดุและสูตร• TM Ziploc ใช้แช่ถุงแทนที่เป็นแซนวิช ถุงจะหนาขึ้น สตรอเบอร์รี่สด หรือแช่แข็ง•สามารถใช้ ตรวจสอบให้แน่ใจว่าทรานครบแช่แข็งที่อุณหภูมิห้อง กล้วยหรือผลไม้กีวียังสามารถใช้ แต่ผลผลิตดีเอ็นเอน้อยกว่า •ใช้ไม่ใช่ไอโอดีนเกลือหรือโซเดียมคลอไรด์ระดับห้องปฏิบัติการ • 95% เอทานอล หรือ 91 หรือ 100% isopropyl แอลกอฮอล์สามารถใช้ precipitate ดีเอ็นเอ แอลกอฮอล์ isopropyl สามารถหาซื้อได้จากร้านขายยาเป็น แล้วที่คุณใช้ ให้แน่ใจว่าเป็นน้ำแข็งเย็น โดยทำ ในห้องน้ำเป็นน้ำแข็ง หรือ ในตู้เย็นที่
บัฟเฟอร์การสกัดดีเอ็นเอ• 100 ml (3/8 ถ้วย) แชมพู (ไม่ปรับอากาศ) หรือ 50 ml เครื่องล้างจานผงซักฟอก• 15 กรัมโซเดียมคลอไรด์ (2 ช้อนชา) •น้ำ 1 ลิตร
ที่พันธุศาสตร์โครงการกรมมหาวิทยาลัยวอชิงตันวิทยาศาสตร์กลุ่ม http://chroma.mbt.washington.edu/outreach/genetics 2
แยกดีเอ็นเอจากสตรอเบอร์รี่นักศึกษาทิศ
วัสดุต่อนักเรียนกลุ่ม•สตรอเบอร์รี่ 1-3 (เกี่ยวกับปริมาตรของลูกกอล์ฟ) ควรเป็น thawed สตรอเบอร์รี่แช่แข็งที่อุณหภูมิห้อง ••บัฟเฟอร์การสกัดดีเอ็นเอ (soapy น้ำเค็ม) ประมาณ 20 ml 10 ml น้ำแข็งเย็น 91% หรือ 100% แอลกอฮอล์ isopropyl • 1 Ziploc TM กระเป๋า• 1 หลอดทดสอบชัดเจน• 1 กรวยเต็มไป ด้วย•ผ้าขนหนูกระดาษ moistened 1 กาแฟช้อนคนหรือโอน pipet
1 ทิศทางการ ออก sepals เขียวสตรอเบอร์รี่ 2. สตรอเบอร์รี่วางลงในถุง Ziploc TM และปิดผนึก 3. squish สำหรับสควอชผลไม้ทั้งหมดกี่นาที 4. 10 ml เพิ่มบัฟเฟอร์การสกัดดีเอ็นเอ (soapy น้ำเค็ม) และ squish กี่นาทีเพิ่มเติม พยายามที่ไม่ทำให้จำนวนมากของฟองสบู่ 5. กรองผ่านชุดผ้าขนหนูกระดาษ moistened ในปล่อง และรวบรวมของเหลวในหลอดใส บีบผ้ากระดาษ รวบรวมของเหลวประมาณ 3 ml 6. เพิ่ม 2 ปริมาณน้ำแข็งเย็น isopropyl แอลกอฮอล์เหลวสตรอเบอร์รี่ในหลอด เทแอลกอฮอล์ isopropyl อย่างระมัดระวังลงด้านของท่อเพื่อให้แบบแยกชั้นบนของเหลวสตรอเบอร์รี่ 7. ดูการเพียงไม่กี่นาที สิ่งที่คุณเห็น คุณจะเห็นก้อนเมฆสีขาวนุ่มที่อินเทอร์เฟซระหว่างของเหลวสอง นั่นคือดีเอ็นเอ 8. หมุน และผัดกาแฟช้อนคนหรือโอน pipet ในขนาดของดีเอ็นเอ การตัดดีเอ็นเอสถานที่ช้อนคน 9. ช้อนคนที่ถอน และโอนย้ายดีเอ็นเอของสราญตัดชิ้นส่วน หรือทำความสะอาดท่อ เส้นใยเป็นหลักพัน และ strands ล้านของดีเอ็นเอ 10. เมื่อต้องการดูในกล้องจุลทรรศน์ ใส่ glob การบนภาพนิ่งสะอาด และเบา ๆ หยอก/ยืดใช้ 2 toothpicks หรือ dissecting หมุดออกจากกัน เส้นใยจะขึ้นบริเวณ teased-แร 11. ล้างของกรวย ใส่ Ziploc TM ถุงและกระดาษผ้าในถังขยะ ง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดดีเอ็นเอจากสตรอเบอร์รี่ที่พัฒนาโดยไดแอน สวีนีย์ http://www.caseciw.org/first_light_case/horn/strawberries/strawbdnaproc.html
ครูหลังนี้เป็นง่ายโปรโตคอลที่มีประสิทธิภาพ , ดีเอ็นเอ สตรอเบอร์รี่สุกเป็นแหล่งที่ดีสำหรับการแยกดีเอ็นเอ เพราะพวกเขาจะง่ายต่อการยิงและมีเอนไซม์เพคติเนส และเรียกได้ว่าช่วยทำลายลงผนังเซลล์และที่สำคัญที่สุด , สตรอเบอร์รี่ , สำเนาของแต่ละโครโมโซม ( พวกเขาจะ octoploid ) ดังนั้นมีจำนวนมากของดีเอ็นเอที่แยก .
วัตถุประสงค์ของแต่ละส่วนผสมในขั้นตอนมีดังนี้ :
แชมพูหรือสบู่เครื่องล้างจานจะช่วยละลายเซลล์เมมเบรน ซึ่งเป็นไขมัน bilayer . โซเดียม คลอไรด์ ช่วยกำจัดโปรตีนที่ถูกผูกไว้กับ DNAมันยังช่วยให้โปรตีนที่ละลายในชั้นน้ำ ดังนั้นพวกเขาไม่ตกตะกอนในแอลกอฮอล์พร้อมกับดีเอ็นเอ เอทานอลหรือ isopropyl แอลกอฮอล์เป็นสาเหตุทำให้ดีเอ็นเอในตะกอน เมื่อ DNA ออกมาจากโซลูชั่นมันมีแนวโน้มที่จะรวมตัวกัน ซึ่งทำให้มันสามารถมองเห็นได้ถักยาวของดีเอ็นเอจะห่อรอบหมุน หรือ ปิเปตโอนเมื่อมัน swirled ที่รอยต่อระหว่างสองชั้น
บันทึกในวัสดุและเค้ก - ตู้แช่ Ziploc TM ใช้ถุงมากกว่าถุงแซนวิช ตามที่พวกเขาจะหนาขึ้น - สดหรือแช่แข็งสตรอเบอร์รี่สามารถใช้ ให้แน่ใจว่าผลเบอร์รี่แช่แข็งละลายที่อุณหภูมิห้องกล้วยหรือผลไม้กีวียังสามารถใช้แต่ผลผลิตดีเอ็นเอน้อยกว่า - ไม่ใช้เกลือป่นหรือโซเดียมคลอไรด์เกรดห้องปฏิบัติการ - 95 หรือ 91 เอทานอล 100% หรือ isopropyl แอลกอฮอล์สามารถใช้ตกตะกอน DNA ไอโซโพรพิลแอลกอฮอล์สามารถซื้อได้จากร้านขายยา ใดที่คุณใช้ ให้แน่ใจว่ามันเย็น โดยวางในน้ำแข็ง น้ำอาบ หรือในช่องแช่แข็ง
การสกัดดีเอ็นเอบัฟเฟอร์ - 100 มิลลิลิตร ( 1 / 8 ถ้วย ) แชมพู ( ไม่มีแอร์ ) หรือ 50 ml เครื่องล้างจานผงซักฟอก - 15 กรัม โซเดียม คลอไรด์ ( 2 ช้อนชา น้ำ 1 ลิตร ) -
โครงการภาควิชาพันธุศาสตร์พันธุกรรมศาสตร์มหาวิทยาลัยวอชิงตัน http://chroma.mbt.washington.edu/outreach/genetics 2
การสกัดดีเอ็นเอจากสตรอเบอร์รี่เส้นทางนักศึกษาพยาบาลวัสดุ / กลุ่มนักศึกษา - 1-3 สตรอเบอร์รี่ ( เกี่ยวกับปริมาณของลูกกอล์ฟ ) สตรอเบอรี่แช่แข็ง ควรละลายในอุณหภูมิห้อง - 10 มิลลิลิตรการสกัดดีเอ็นเอบัฟเฟอร์ ( โซปเค็มน้ำ ) - 20 ml เย็น 91 % หรือ 100 % แอลกอฮอล์ isopropyl - 1 ถุง Ziploc TM - 1 หลอดทดสอบที่ชัดเจน - 1 ช่องทางเรียงรายไปด้วยผ้าขนหนูกระดาษชุบ - 1 กาแฟหมุนหรือเส้นทางไปเปต
โอน 1เอากลีบเลี้ยงสีเขียวจากสตรอเบอร์รี่ 2 . วางสตรอเบอรี่ลงในถุง Ziploc TM และ ซีลปิด 3 . คนไม่กี่นาทีที่จะสมบูรณ์สควอชผลไม้ 4 . เพิ่ม 10 มิลลิลิตรการสกัดดีเอ็นเอบัฟเฟอร์ ( โซป เค็ม น้ำ ) และ squish สำหรับไม่กี่นาที พยายามที่จะไม่ทำสบู่ฟอง 5 . กรองผ่านชุบผ้าขนหนูกระดาษ ตั้งกรวย และเก็บรวบรวมของเหลวในหลอดใสไม่บีบผ้าขนหนูกระดาษ เก็บประมาณ 3 มล. ของของเหลว 6 . เพิ่ม 2 ปริมาณน้ำแข็งเย็น isopropyl แอลกอฮอล์กับสตรอเบอรี่ ของเหลวในท่อ เท isopropyl แอลกอฮอล์อย่างระมัดระวังลงด้านข้างของท่อเพื่อให้รูปแบบการแยกชั้นด้านบนของสตรอเบอรี่ ของเหลว 7 . ดูประมาณ 1 นาที คุณเห็นอะไรบ้าง ? คุณควรจะเห็นสีขาวปุยเมฆที่รอยต่อระหว่างสองทัพที่ DNA ! 8 . ปั่นและปั่นกาแฟหมุนหรือปิเปตโอนในการพันกันของดีเอ็นเอ การตัดดีเอ็นเอรอบหมุน . 9 . ดึงหมุนออกและถ่ายโอนดีเอ็นเอชิ้นห่อ saran หรือท่อทำความสะอาด เส้นใยเป็นหลักพันและหลักล้านของเส้นดีเอ็นเอ 10 . ดูในกล้องจุลทรรศน์ ใส่ Glob ในสะอาด สไลด์ และค่อย ๆแหย่ / ยืด นอกจากการใช้ 2 ชิ้น หรือผ่าขาเส้นใยจะง่ายต่อการดูล้อกันในพื้นที่ 11 . ล้างช่องทางของคุณ ใส่ถุง Ziploc TM และผ้าขนหนูกระดาษในกองขยะ ง