2.5. Whole muscle protein extractio

2.5. Whole muscle protein extraction, SDS-PAGE electrophoresis, and troponin-T immunoblotting
Whole muscle protein was extracted from frozen 24-h subset (n = 53) of loin subsamples as described by Huff-Lonergan, Mitsuhashi, Parrish, and Robson (1996). Briefly, 0.5 g of muscle tissue was minced and then homogenized in 5 mL of extraction buffer [10 mM sodium phosphate, pH 7.0; 2% (w/v) sodium dodecyl sulfate (SDS)] with a serrated pestle attached to a mechanical homogenizer (Eberbach Corporation, Ann Arbor, MI) at room temperature until well ground. The homogenate was clarified by centrifugation (1500 ×g) for 15 min at room temperature. The protein concentration of each cleared extract was determined using DC Protein Assay Reagents (BioRad Laboratories, Hercules, CA) based on Lowry, Rosebrough, Farr, and Randall (1951). Protein extracts were diluted with water to a final concentration of

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 ทั้งกล้ามเนื้อโปรตีนสกัด electrophoresis SDS-หน้า และ troponin T immunoblottingโปรตีนกล้ามเนื้อทั้งหมดที่สกัดจากน้ำแข็งย่อย 24 h (n = 53) ของ subsamples หยิบตามที่อธิบายไว้ โดย Huff โล Mitsuhashi, Parrish ร็อบ (1996) สั้น ๆ 0.5 กรัมของเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อถูกสับ และ homogenized เป็นกลุ่มแล้ว ใน 5 mL สกัดบัฟเฟอร์ [10 mM โซเดียมฟอสเฟต pH 7.0; 2% (w/v) โซเดียมซัลเฟต dodecyl (SDS)] ด้วย pestle serrated ที่แนบกับตัวเครื่อง homogenizer (Eberbach Corporation, Ann Arbor, MI) ที่อุณหภูมิห้องจนกว่าพื้นดิน Homogenate ถูกขึ้ โดย centrifugation (1500 × g) ใน 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง โปรตีนความเข้มข้นของสารสกัดแต่ละล้างได้กำหนดใช้ DC โปรตีนวิเคราะห์ Reagents (ปฏิบัติ BioRad เฮอร์คิวลิส CA) ตาม Lowry, Rosebrough, Farr, Randall (1951) สารสกัดจากโปรตีนที่ผสมกับน้ำจะเข้มข้นสุดท้ายของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การสกัดโปรตีนของกล้ามเนื้อทั้งอิ SDS-PAGE และนิ-T immunoblotting
โปรตีนของกล้ามเนื้อทั้งถูกสกัดจากเซต 24 ชั่วโมงแช่แข็ง (n = 53) ของ subsamples เนื้อตามที่อธิบายหอบ-เนอร์เกน, Mitsuhashi พาร์ริชและร็อบสัน (1996) . สั้น ๆ , 0.5 กรัมของเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อถูกสับและปั่นแล้วใน 5 มิลลิลิตรของบัฟเฟอร์สกัด [โซเดียมฟอสเฟตมิลลิ 10 พีเอช 7.0 2% (w / v) โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS)] กับสากหยักที่แนบมากับโฮโมจีไนกล (บาคคอร์ปอเรชั่น Ann Arbor, MI) ที่อุณหภูมิห้องจนพื้นดินได้ดี homogenate ได้รับการชี้แจงจากการหมุนเหวี่ยง (1500 × g) เป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ความเข้มข้นของสารสกัดจากโปรตีนแต่ละเคลียร์ถูกกำหนดโดยใช้โปรตีน Assay ซีรีเอเจนต์ (ห้องปฏิบัติการ BioRad ดาว, CA) ตามโลว์รีย์ Rosebrough, ฟาร์และแรนดัล (1951) สารสกัดจากโปรตีนถูกเจือจางด้วยน้ำเพื่อความเข้มข้นสุดท้ายของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 ทั้งกล้ามเนื้อโปรตีนการสกัดเอนไซม์เอนไซม์และ troponin-t )
โปรตีนกล้ามเนื้อทั้งหมดสกัดจาก 24-h ย่อยแช่แข็ง ( n = 53 ) ( subsamples ตามที่อธิบายไว้โดย mitsuhashi โลเนอร์แกน , หอบ , ริช และ ร็อบสัน ( 1996 ) สั้น ๆ , 0.5 กรัมเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อถูกสับและบด 5 มิลลิลิตรการสกัด [ 10 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.0 ;2 % ( w / v ) โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) ] กับฟันปลาสากติดแบบ homogenizer กล ( Eberbach Corporation , Ann Arbor , Mi ) ที่อุณหภูมิห้อง จนพื้นดิน ที่แยกได้มีดังนี้ ( × 1 , 500 กรัม ) สำหรับ 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ระดับโปรตีนของแต่ละล้างสารสกัดโปรตีนเพื่อใช้วิเคราะห์ DC ) ( biorad ห้องปฏิบัติการ , Hercules ,CA ) ตาม rosebrough เบส , , ฟาร์ และ แรนดัลล์ ( 1951 ) สารสกัดโปรตีนถูกเจือจางด้วยน้ำให้ความเข้มข้นสุดท้าย