- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
โครงสร้างองค์กรของยีน polygalacturo
โครงสร้างองค์กรของยีน polygalacturonase - การเข้ารหัส frompenicillium
O griseoroseumandréa B . C . มาริสาแอนนิต้า ribon V queiroz และ elza F . de araújodepartamento
de microbiologia bioagro universidade Federal de viçosa viçosa
มีนัสเชไรส์บราซิล.
ระบบ pectinolytic abstractthe ของ griseoroseum penicillium ได้รับการศึกษาเป็นรุ่นที่ในการสืบสวนสอบสวน
ในทุกแง่มุมของ geneorganization เห็ด filamentous ณที่นี่เราแสดงให้เห็นว่ายีน endopolygalacturonase - การเข้ารหัสที่ก่อนหน้านี้ isolatedexist
เป็นชุดเดียวในยีนเห็ด ลบการวิเคราะห์ดีเอ็นเอเปิดเผยว่าการมีอยู่ของยีนที่เกี่ยวข้อง inother
สายพันธุ์ penicillium แม้ว่าจะเพียงหนึ่งหรือสองยีนก็พบว่าในการคัดค้าน familyreported ยีน endopg
สำหรับเห็ด filamentous อื่นๆ ซีเควนซ์ nucleotide และกรดอะมิโนของยีนที่ PG penicillium ของ
ธนาคารมีข้อมูล retrievedfrom เมื่อเทียบกับความยาวของ intron codon และจำนวนการใช้งาน
ไซต์และการเริ่มต้นซีเควนซ์ของฉันทามติ fortranslation introns ที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันกับที่แม้ว่าจะไม่มี oftheir
nucleotide ซีเควนซ์ของการอนุรักษ์ โดดเด่นไปด้วยตามลำดับอื่นๆคล้ายกับที่เห็นใน aspergillus neurospora ยีนและ
คำหลัก griseoroseum penicillium เห็ด filamentous pectinase polygalacturonase องค์กรยีน.
ได้รับ วันที่ 26 สิงหาคม 2002 ได้รับการยอมรับ วันที่ 14 พฤศจิกายน 2002 .
introductionthe
penicillium กะกะคือทั่วโลกมีชื่อเสียงในด้าน
ของการผลิตในกระทรวงของตนและ metabolites extracellularenzymes รอง
ของมูลค่าทางการค้าซึ่งรวมถึง thepectinases
ใช้ในอุตสาหกรรมน้ำผลไม้ในระหว่าง thestage
ของ maceration ของโถแยกกากผลไม้น้ำผลไม้กลายเป็นน้ำ ordepectinization
( Cullen และ kersten 1992 ที่ sakaguchi et al .
1992; grassin และ fauquembergue 1996 )
ระบบ pectinolytic ที่ประกอบไปด้วยหลายแบบมีห้องน้ำในตัว
zymes กระจายตัวอยู่ใน 2 กลุ่มหลัก pectinesterases ,
ซึ่งปฏิกริยาที่ De - esterification ของ methoxyl กลุ่ม ofpectin
และ depolymerases ที่ cleaveα -1,4 glycosidic ลิงค์
ช่วงวัยโดยหลักด้วยหรือบริษัทข้ามชาติ - การกำจัดเกิดปฏิกิริยา(พวกซา - ไก etal
. 1993). polygalacturonases ( PGS )มี depolymerases thatspecifically
hydrolyze glycosidic พันธบัตรของ
กรด Poly - galacturonic
การเข้ารหัสในยีนที่ PG penicillium สายพันธุ์ havebeen
จำลองไว้และลักษณะอันเนื่องจากการใช้นี้ enzymein
ที่ทางชีววิทยาการบำบัดของเสียน้ำมี pectinand
ของบทบาทในการติดเชื้อและโรคพืช( ishida et al . 1997;
วากเนอร์ et al . 2000). ความโดดเด่นที่น่าสนใจของ
การ isthe PG เชื้อราของสารตกค้างสงวนไว้บางส่วนที่มี recentlybeen
ได้รับการพิสูจน์ว่ามีความจำเป็นสำหรับการทำงานของเอนไซม์( vansanten
et al . 1999).
การลอกแบบยีนได้เปิดให้บริการรูปแบบใหม่ในการขอรับ fungalstrains
พร้อมด้วยระดับการแสดงออกทางความคิดเห็นเพิ่มมากขึ้นของโปรตีนที่
สำคัญอุตสาหกรรม areof การแนะนำของตำรวจ -
- ของยีนของดอกเบี้ยและยีน - การผสมผสานกลยุทธ์ havebeen
ใช้ในการเพิ่มการผลิตโปรตีนเช่น gluco -
amylase , endoglucanase , xylanase ,วัวอีก prochymosin ,
และมนุษย์ interleukin - 6 ( hata et al . 1991; saarelainen etal
. 1993; sánchez - Fernando Torres et al . 1994; tsuchiya et al . 1994;
gouka et al . 1996).
กลุ่มของเรายังได้รับการศึกษา
griseoroseum penicillium systemof pectinolytic เป็นระบบรุ่นสำหรับยีนหรือ -
ganization และกฎระเบียบในเห็ด filamentous isto จุดมุ่งหมายของเรา
ได้รับพันธุ์ overproducing ที่สามารถนำไปใช้ใน tx -
อุตสาหกรรมกระเบื้องที่จะ degum ไฟเบอร์จากธรรมชาติ Two genes encoding
endoPGs, pgg1 and pgg2, have been cloned and are differ-
entially expressed in response to the growth medium
(Ribon et al. 1999; Ribon et al. 2002). Studies are being
done to investigate the molecular mechanisms that control
their expression. Here we show the organization of both
genes in P. griseoroseum and compare it to the organization
of homologous DNA sequences in the genome of other
Penicillium species. Some features found in Aspergillus
and Neurospora genes are also seen in Penicillium as re-
vealed by the comparison of the structural unit of the genes
encoding PG cloned until now.
Materials and Methods
Fungal strains and inoculum production
Penicillium charlesii (CCT 4752), P. chrysogenum,
P. citrinum (CCT 3281), P. expansum, P. griseoroseum
Genetics and Molecular Biology, 25, 4, 489-493 (2002)
Copyright by the Brazilian Society of Genetics. Printed in Brazil
www.sbg.org.br
Send correspondence to: Elza F. de Araújo. E-mail: ezfa@mail.
ufv.br.
Research Article
(CCT 6241), P. italicum, P. janthinellum (CCT 3162), and
P. purpurogenum (CCT 2008) were employed in this study.
The stock cultures were maintained in glycerol at 4 °C.
Petri dishes containing minimal medium (Pontecorvo et al.
1953) covered with cellophane membrane were inoculated
with 105 conidia and incubated for two days at 28 °C. The
mycelia were removed from the cellophane for DNA ex-
traction.
DNA isolation and Southern blot
Total DNA from the Penicillium species was ex-
tracted as described by Specht et al. (1982), and cleaved
with EcoRI, SacI, and SalI. The reactions were analyzed on
0.8% agarose gel, and then transferred to Duralon mem-
branes (Stratagene) according to Sambrook et al. (1989).
The probe consisted of a DNA fragment amplified from to-
tal DNA from P. griseoroseum, purified from the gel and
radiolabelled with the Random Prime-It II Labeling Kit
(Stratagene). This fragment contains a 420-bp homologous
domain observed in endoPG genes from several filamen-
tous fungi and bacteria, and was generated as described by
Cary et al. (1995). Hybridization was carried out overnight
at 60 °C in standard hybridization buffer (Sambrook et al.
1989), washed twice with 2 X SSC, 0.1% SDS, for 20 min,
and once with 1 X SSC, 0.1% SDS for 10 min. Auto-
radiographs were made by five-day exposure of XOMAT
K film (Kodak), with an intensifying screen.
Nucleotide sequence accession number
GenBank and EMBL databases were scanned for
PG-encoding genes from Penicillium species. Seven genes
were retrieved and employed for the comparisons:
AB015286 (P. digitatum), AF047713 (P. expansum),
AF085238 and AF195790 (P. griseoroseum), D79980 (P.
janthinellum), AJ243521 and AJ243522 (P. olsonii).
Results and Discussion
Genomic organization of PG-encoding genes in
Penicillium griseoroseum
All endoPG genes described until now for filamen-
tous fungi have a homologous domain of approximately
400 bp assumed to contain residues that are relevant for PG
activity. A 420 bp-DNA fragment containing the corre-
sponding domain of P. griseoroseum was used as probe in
Southern blot analysis of the genomic DNA to investigate
the existence of an endoPG gene family in the genome of
this fungus. Few hybridizing fragments were seen even
when low stringency conditions were employed during the
hybridization step (Figure 1). Re-probing of the membrane
with the radiolabelled pgg1 and pgg2 genes was conducted
at 65 °C. The bands detected corresponded to those seen in
Figure 1 confirming the presence of only two endoPG
genes in the fungus genome (data not shown). The exis-
tence of exoPG genes is possible although not detected in
our study due to the low similarity with the endoPG genes.
As seen in Figure 1 we can conclude that the pgg1 and
pgg2 genes exist as single copies in the P. griseoroseum ge-
nome since there are no internal restriction sites for the en-
zymes EcoRI, SacI, and XbaI. Single copies have been
demonstrated for other PG genes including the clpg1 and
clpg2 genes of Colletotrichum lindemuthianum, pg1 and
pg2 of P. olsonii, and bcpg1 of Botrytis cinerea (Centis et
al. 1996; Centis et al. 1997; ten Have et al. 1998; Wagner et
al. 2000). It also seems that pgg1 and pgg2 are present in
the same copy number and that the differential levels of ex-
pression reported for these genes by Ribon et al. (2002) are
probably due to gene position in the genome. The possibil-
ity that they are controlled by different cis-acting factors is
now under investigation.
Occurrence of corresponding PG genes in other
Penicillium species
The presence of DNA sequences homologous to
endoPG genes was investigated throughout the Penicillium
species under low stringency hybridization (Figure 2). All
species tested have at least one endoPG gene. However,
most of them showed two strongly hybridizing bands, al-
though with some length polymorphism, that may corre-
spond to homologous genes. As opposed to Penicillium,
gene families consisting of at least five PG members have
been detected in Aspergillus niger, B. cinerea, and
490 Ribon et al.
Figure 1 - Southern blot analysis of total DNA from Penicillium
griseoroseum. Total DNA was digested
O griseoroseumandréa B . C . มาริสาแอนนิต้า ribon V queiroz และ elza F . de araújodepartamento
de microbiologia bioagro universidade Federal de viçosa viçosa
มีนัสเชไรส์บราซิล.
ระบบ pectinolytic abstractthe ของ griseoroseum penicillium ได้รับการศึกษาเป็นรุ่นที่ในการสืบสวนสอบสวน
ในทุกแง่มุมของ geneorganization เห็ด filamentous ณที่นี่เราแสดงให้เห็นว่ายีน endopolygalacturonase - การเข้ารหัสที่ก่อนหน้านี้ isolatedexist
เป็นชุดเดียวในยีนเห็ด ลบการวิเคราะห์ดีเอ็นเอเปิดเผยว่าการมีอยู่ของยีนที่เกี่ยวข้อง inother
สายพันธุ์ penicillium แม้ว่าจะเพียงหนึ่งหรือสองยีนก็พบว่าในการคัดค้าน familyreported ยีน endopg
สำหรับเห็ด filamentous อื่นๆ ซีเควนซ์ nucleotide และกรดอะมิโนของยีนที่ PG penicillium ของ
ธนาคารมีข้อมูล retrievedfrom เมื่อเทียบกับความยาวของ intron codon และจำนวนการใช้งาน
ไซต์และการเริ่มต้นซีเควนซ์ของฉันทามติ fortranslation introns ที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันกับที่แม้ว่าจะไม่มี oftheir
nucleotide ซีเควนซ์ของการอนุรักษ์ โดดเด่นไปด้วยตามลำดับอื่นๆคล้ายกับที่เห็นใน aspergillus neurospora ยีนและ
คำหลัก griseoroseum penicillium เห็ด filamentous pectinase polygalacturonase องค์กรยีน.
ได้รับ วันที่ 26 สิงหาคม 2002 ได้รับการยอมรับ วันที่ 14 พฤศจิกายน 2002 .
introductionthe
penicillium กะกะคือทั่วโลกมีชื่อเสียงในด้าน
ของการผลิตในกระทรวงของตนและ metabolites extracellularenzymes รอง
ของมูลค่าทางการค้าซึ่งรวมถึง thepectinases
ใช้ในอุตสาหกรรมน้ำผลไม้ในระหว่าง thestage
ของ maceration ของโถแยกกากผลไม้น้ำผลไม้กลายเป็นน้ำ ordepectinization
( Cullen และ kersten 1992 ที่ sakaguchi et al .
1992; grassin และ fauquembergue 1996 )
ระบบ pectinolytic ที่ประกอบไปด้วยหลายแบบมีห้องน้ำในตัว
zymes กระจายตัวอยู่ใน 2 กลุ่มหลัก pectinesterases ,
ซึ่งปฏิกริยาที่ De - esterification ของ methoxyl กลุ่ม ofpectin
และ depolymerases ที่ cleaveα -1,4 glycosidic ลิงค์
ช่วงวัยโดยหลักด้วยหรือบริษัทข้ามชาติ - การกำจัดเกิดปฏิกิริยา(พวกซา - ไก etal
. 1993). polygalacturonases ( PGS )มี depolymerases thatspecifically
hydrolyze glycosidic พันธบัตรของ
กรด Poly - galacturonic
การเข้ารหัสในยีนที่ PG penicillium สายพันธุ์ havebeen
จำลองไว้และลักษณะอันเนื่องจากการใช้นี้ enzymein
ที่ทางชีววิทยาการบำบัดของเสียน้ำมี pectinand
ของบทบาทในการติดเชื้อและโรคพืช( ishida et al . 1997;
วากเนอร์ et al . 2000). ความโดดเด่นที่น่าสนใจของ
การ isthe PG เชื้อราของสารตกค้างสงวนไว้บางส่วนที่มี recentlybeen
ได้รับการพิสูจน์ว่ามีความจำเป็นสำหรับการทำงานของเอนไซม์( vansanten
et al . 1999).
การลอกแบบยีนได้เปิดให้บริการรูปแบบใหม่ในการขอรับ fungalstrains
พร้อมด้วยระดับการแสดงออกทางความคิดเห็นเพิ่มมากขึ้นของโปรตีนที่
สำคัญอุตสาหกรรม areof การแนะนำของตำรวจ -
- ของยีนของดอกเบี้ยและยีน - การผสมผสานกลยุทธ์ havebeen
ใช้ในการเพิ่มการผลิตโปรตีนเช่น gluco -
amylase , endoglucanase , xylanase ,วัวอีก prochymosin ,
และมนุษย์ interleukin - 6 ( hata et al . 1991; saarelainen etal
. 1993; sánchez - Fernando Torres et al . 1994; tsuchiya et al . 1994;
gouka et al . 1996).
กลุ่มของเรายังได้รับการศึกษา
griseoroseum penicillium systemof pectinolytic เป็นระบบรุ่นสำหรับยีนหรือ -
ganization และกฎระเบียบในเห็ด filamentous isto จุดมุ่งหมายของเรา
ได้รับพันธุ์ overproducing ที่สามารถนำไปใช้ใน tx -
อุตสาหกรรมกระเบื้องที่จะ degum ไฟเบอร์จากธรรมชาติ Two genes encoding
endoPGs, pgg1 and pgg2, have been cloned and are differ-
entially expressed in response to the growth medium
(Ribon et al. 1999; Ribon et al. 2002). Studies are being
done to investigate the molecular mechanisms that control
their expression. Here we show the organization of both
genes in P. griseoroseum and compare it to the organization
of homologous DNA sequences in the genome of other
Penicillium species. Some features found in Aspergillus
and Neurospora genes are also seen in Penicillium as re-
vealed by the comparison of the structural unit of the genes
encoding PG cloned until now.
Materials and Methods
Fungal strains and inoculum production
Penicillium charlesii (CCT 4752), P. chrysogenum,
P. citrinum (CCT 3281), P. expansum, P. griseoroseum
Genetics and Molecular Biology, 25, 4, 489-493 (2002)
Copyright by the Brazilian Society of Genetics. Printed in Brazil
www.sbg.org.br
Send correspondence to: Elza F. de Araújo. E-mail: ezfa@mail.
ufv.br.
Research Article
(CCT 6241), P. italicum, P. janthinellum (CCT 3162), and
P. purpurogenum (CCT 2008) were employed in this study.
The stock cultures were maintained in glycerol at 4 °C.
Petri dishes containing minimal medium (Pontecorvo et al.
1953) covered with cellophane membrane were inoculated
with 105 conidia and incubated for two days at 28 °C. The
mycelia were removed from the cellophane for DNA ex-
traction.
DNA isolation and Southern blot
Total DNA from the Penicillium species was ex-
tracted as described by Specht et al. (1982), and cleaved
with EcoRI, SacI, and SalI. The reactions were analyzed on
0.8% agarose gel, and then transferred to Duralon mem-
branes (Stratagene) according to Sambrook et al. (1989).
The probe consisted of a DNA fragment amplified from to-
tal DNA from P. griseoroseum, purified from the gel and
radiolabelled with the Random Prime-It II Labeling Kit
(Stratagene). This fragment contains a 420-bp homologous
domain observed in endoPG genes from several filamen-
tous fungi and bacteria, and was generated as described by
Cary et al. (1995). Hybridization was carried out overnight
at 60 °C in standard hybridization buffer (Sambrook et al.
1989), washed twice with 2 X SSC, 0.1% SDS, for 20 min,
and once with 1 X SSC, 0.1% SDS for 10 min. Auto-
radiographs were made by five-day exposure of XOMAT
K film (Kodak), with an intensifying screen.
Nucleotide sequence accession number
GenBank and EMBL databases were scanned for
PG-encoding genes from Penicillium species. Seven genes
were retrieved and employed for the comparisons:
AB015286 (P. digitatum), AF047713 (P. expansum),
AF085238 and AF195790 (P. griseoroseum), D79980 (P.
janthinellum), AJ243521 and AJ243522 (P. olsonii).
Results and Discussion
Genomic organization of PG-encoding genes in
Penicillium griseoroseum
All endoPG genes described until now for filamen-
tous fungi have a homologous domain of approximately
400 bp assumed to contain residues that are relevant for PG
activity. A 420 bp-DNA fragment containing the corre-
sponding domain of P. griseoroseum was used as probe in
Southern blot analysis of the genomic DNA to investigate
the existence of an endoPG gene family in the genome of
this fungus. Few hybridizing fragments were seen even
when low stringency conditions were employed during the
hybridization step (Figure 1). Re-probing of the membrane
with the radiolabelled pgg1 and pgg2 genes was conducted
at 65 °C. The bands detected corresponded to those seen in
Figure 1 confirming the presence of only two endoPG
genes in the fungus genome (data not shown). The exis-
tence of exoPG genes is possible although not detected in
our study due to the low similarity with the endoPG genes.
As seen in Figure 1 we can conclude that the pgg1 and
pgg2 genes exist as single copies in the P. griseoroseum ge-
nome since there are no internal restriction sites for the en-
zymes EcoRI, SacI, and XbaI. Single copies have been
demonstrated for other PG genes including the clpg1 and
clpg2 genes of Colletotrichum lindemuthianum, pg1 and
pg2 of P. olsonii, and bcpg1 of Botrytis cinerea (Centis et
al. 1996; Centis et al. 1997; ten Have et al. 1998; Wagner et
al. 2000). It also seems that pgg1 and pgg2 are present in
the same copy number and that the differential levels of ex-
pression reported for these genes by Ribon et al. (2002) are
probably due to gene position in the genome. The possibil-
ity that they are controlled by different cis-acting factors is
now under investigation.
Occurrence of corresponding PG genes in other
Penicillium species
The presence of DNA sequences homologous to
endoPG genes was investigated throughout the Penicillium
species under low stringency hybridization (Figure 2). All
species tested have at least one endoPG gene. However,
most of them showed two strongly hybridizing bands, al-
though with some length polymorphism, that may corre-
spond to homologous genes. As opposed to Penicillium,
gene families consisting of at least five PG members have
been detected in Aspergillus niger, B. cinerea, and
490 Ribon et al.
Figure 1 - Southern blot analysis of total DNA from Penicillium
griseoroseum. Total DNA was digested
0/5000
โครงสร้างองค์กรของยีน polygalacturonase - การเข้ารหัส frompenicillium
o griseoroseumandréaข ค มาริสาแอนนิต้า Queiroz Ribon v และ Elza ฉ เดaraújodepartamento
เด microbiologia bioagro Universidade รัฐบาลกลางเดViçosaViçosa
มีนัสเชไรส์บราซิล
ระบบ pectinolytic abstractthe ของ griseoroseum Penicillium ได้รับการศึกษาเป็นรุ่นที่ในการสืบสวนสอบสวน
ในทุกแง่มุมของ geneorganization เห็ดใย ณ ที่นี่เราแสดงให้เห็นว่ายีน endopolygalacturonase - การเข้ารหัสที่ก่อนหน้านี้ isolatedexist
เป็นชุดเดียวในยีนเห็ด ลบการวิเคราะห์ดีเอ็นเอเปิดเผยว่าการมีอยู่ของยีนที่เกี่ยวข้อง inother
สายพันธุ์ Penicillium แม้ว่าจะเพียงหนึ่งหรือสองยีนก็พบว่าในการคัดค้าน familyreported ยีน endopg
สำหรับเห็ดใยอื่น ๆ ซีเควนซ์เบื่อหน่ายและกรดอะมิโนของยีนที่พิ Penicillium
ของธนาคารมีข้อมูล retrievedfrom เมื่อเทียบกับความยาวของ intron codon และจำนวนการใช้งาน
ไซต์และการเริ่มต้นซีเควนซ์ของฉันทามติ fortranslation introns ที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันกับที่แม้ว่าจะไม่มี oftheir
เบื่อหน่ายซีเควนซ์ของการอนุรักษ์ โดดเด่นไปด้วยตามลำดับอื่นๆคล้ายกับที่เห็นใน Aspergillus Neurospora ยีนและ
คำหลัก griseoroseum Penicillium เห็ดใยเพคติเน polygalacturonase องค์กรยีน
ได้รับได้รับการยอมรับวันที่ 14 พฤศจิกายน 2002 วันที่ 26 สิงหาคม 2002
introductionthe Penicillium กะกะคือทั่วโลกมีชื่อเสียงในด้าน
ของการผลิตในกระทรวงของตนและ extracellularenzymes สารรอง
ของมูลค่าทางการค้าซึ่งรวมถึง thepectinases
ใช้ในอุตสาหกรรมน้ำผลไม้ในระหว่าง thestage
ของยุ่ย ของโถแยกกากผลไม้น้ำผลไม้กลายเป็นน้ำ ordepectinization
(cullen และ kersten 1992 ที่ซาคาเอตอัล
1992;. grassin และ fauquembergue 1996)
ระบบ pectinolytic ที่ประกอบไปด้วยหลายแบบมีห้องน้ำในตัว
zymes กระจายตัวอยู่ใน 2 กลุ่มหลัก pectinesterases
ซึ่งปฏิกริยาที่เดอ - ฟ esterification ของกลุ่มเมท ธ อกซิ ofpectin
และ depolymerases ที่cleaveα -14 glycosidic ลิงค์
ช่วงวัยโดยหลักด้วยหรือบริษัทข้ามชาติ - การกำจัดเกิดปฏิกิริยา (พวกซา -. ไกอีตัล
1993) polygalacturonases (pgs) มี depolymerases thatspecifically
สลาย glycosidic พันธบัตรของ
กรดโพลี - กาแลค
การเข้ารหัสในยีนที่พิ Penicillium สายพันธุ์ havebeen
จำลองไว้และลักษณะอันเนื่องจากการใช้นี้ enzymein
ที่ทางชีววิทยาการบำบัดของเสียน้ำมี pectinand
ของบทบาทในการติดเชื้อและโรคพืช( อิชิดะและอัล 1997;
วากเนอร์และอัล 2000) ความโดดเด่นที่น่าสนใจของ
การ isthe PG เชื้อราของสารตกค้างสงวนไว้บางส่วนที่มี recentlybeen
ได้รับการพิสูจน์ว่ามีความจำเป็นสำหรับการทำงานของเอนไซม์( vansanten
เอตอัล 1999).
การลอกแบบยีนได้เปิดให้บริการรูปแบบใหม่ในการขอรับ fungalstrains
พร้อมด้วยระดับการแสดงออกทางความคิดเห็นเพิ่มมากขึ้นของโปรตีนที่
สำคัญอุตสาหกรรม areof การแนะนำของตำรวจ -
- ของยีนของดอกเบี้ยและยีน - การผสมผสานกลยุทธ์ havebeen
ใช้ในการเพิ่มการผลิตโปรตีนเช่น GLUCO -
อะไมเลส endoglucanase, ไซลาเนส,. วัวอีก prochymosin,
และมนุษย์ interleukin - 6 (Hata et al, 1991; saarelainen อีตัล
1993; Sánchez - Fernando Torres et al, 1994;... Tsuchiya et al, 1994;
Gouka ตอัล 1996).
กลุ่มของเรายังได้รับการศึกษา
griseoroseum Penicillium systemof pectinolytic เป็นระบบรุ่นสำหรับยีนหรือ -
ganization และกฎระเบียบในเห็ด isto ใยจุดมุ่งหมายของเรา
ได้รับพันธุ์ overproducing ที่สามารถนำไปใช้ในเท็กซัส -
อุตสาหกรรมกระเบื้องที่จะ degum ไฟเบอร์จากธรรมชาติสองยีนเข้ารหัส
endopgs pgg1 และ pgg2 ได้รับการโคลนและมีความแตกต่างกัน -
แสดง entially ในการตอบสนองต่อสื่อการเจริญเติบโต
(Ribon et al, 1999;.. Ribon et al, 2002) การศึกษาที่ถูก
ทำเพื่อตรวจสอบกลไกระดับโมเลกุลที่ควบคุมการแสดงออกของพวกเขา
ที่นี่เราจะแสดงองค์กรของทั้งสอง
ยีนในพี griseoroseum และเปรียบเทียบกับองค์กร
ของลำดับดีเอ็นเอคล้ายคลึงกันในจีโนมของสปีชีส์อื่น ๆ
Penicillium คุณลักษณะบางอย่างที่พบใน Aspergillus
และยีน Neurospora จะเห็นยังอยู่ใน Penicillium เป็นอีกครั้ง
vealed โดยเปรียบเทียบของหน่วยโครงสร้างของยีน
เข้ารหัส PG โคลนจนตอนนี้.
วัสดุและวิธีการ
สายพันธุ์เชื้อราและเชื้อผลิต
Penicillium charlesii (CCT 4752) พี chrysogenum
พี citrinum (CCT 3281) พี expansum พี griseoroseum
พันธุศาสตร์และชีววิทยาโมเลกุล, 25, 4, 489-493 (2002)
ลิขสิทธิ์โดยสังคมบราซิลของพันธุศาสตร์ พิมพ์ในบราซิล
www.sbg.org.br ส่งจดหมายไป: Elza ฉ โช E-mail:. ezfa @
เมล ufv.br.
บทความวิจัย (CCT 6241) พี Italicum พี janthinellum (CCT 3162) และ
พี purpurogenum (CCT 2008) มีการใช้ในการศึกษานี้.
วัฒนธรรมหุ้นที่ถูกเก็บรักษาไว้ในกลีเซอรอลที่อุณหภูมิ 4 องศา c.
จานเพาะเชื้อที่มีขนาดน้อย (Pontecorvo ตอัล.
1953) ปกคลุมด้วยเยื่อหุ้มกระดาษแก้วถูกเชื้อ
105 สปอร์และบ่มเป็นเวลาสองวันที่ 28 องศาเซลเซียส
เส้นใยที่ถูกถอดออกจากกระดาษแก้วเพื่อ dna อดีตฉุด
.
dna แยกและทางตอนใต้ของดวง
dna รวมจากสายพันธุ์ Penicillium เป็นอดีต
tracted ตามที่อธิบาย Specht ตอัล (1982) และตัดด้วย
EcoRI, saci และ sali ปฏิกิริยาการวิเคราะห์บน
0.8% เจล agarose,แล้วย้ายไป branes ข่าว-
duralon (Stratagene) ตาม Sambrook et al, (1989).
สอบสวนประกอบด้วยส่วน dna ขยายจากการ
dna ตาลจากพี griseoroseum, บริสุทธิ์จากเจลและ
รังสีแบบสุ่มที่มีสำคัญมัน ii ชุดติดฉลาก
(Stratagene) ส่วนนี้มีคล้ายคลึงกัน
โดเมน 420-bp พบในยีน endopg จากหลาย filamen-
tous เชื้อราและแบคทีเรียและถูกสร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้โดย
แคตอัล (1995) พันธุ์ถูกหามออกในชั่วข้ามคืน
ที่ 60 องศาเซลเซียสในบัฟเฟอร์พันธุ์มาตรฐาน (Sambrook et al,.
1989), ล้างสองครั้งด้วย 2 x SSC, sds 0.1% เป็นเวลา 20 นาที,
และครั้งเดียวกับ 1 x SSC, sds 0.1% เพื่อ 10 นาที อัตโนมัติ
เอ็กซ์เรย์ที่ถูกสร้างขึ้นจากการสัมผัสห้าวันของ xomat
k ฟิล์ม (โกดัก) กับหน้าจอทวีความรุนแรง.
เบื่อหน่ายลำดับหมายเลขภาคยานุวัติ
genbank และฐานข้อมูล EMBL ถูกสแกน
PG-เข้ารหัสยีนจาก Penicillium ชนิด เจ็ดยีน
ถูกดึงและการจ้างงานสำหรับการเปรียบเทียบ:
ab015286 (พี digitatum) af047713 (พี expansum)
af085238 และ af195790 (พี griseoroseum) d79980 (พี
janthinellum) aj243521 และ aj243522 (พี olsonii).
ผลและการอภิปราย
องค์กรจีโนมของยีน PG-เข้ารหัสใน
Penicillium griseoroseumยีน endopg ทั้งหมดที่อธิบายจนตอนนี้สำหรับ filamen-
เชื้อรา tous มีโดเมนคล้ายคลึงกันประมาณ
400 bp สันนิษฐานว่าจะมีสารตกค้างที่เกี่ยวข้องกับ PG
กิจกรรม 420 ส่วน bp-dna มี Corre-
sponding โดเมนของพี griseoroseum ถูกใช้เป็นหัววัดใน
วิเคราะห์ blot ใต้ของดีเอ็นเอจีโนมในการตรวจสอบ
การดำรงอยู่ของครอบครัวที่ถ่ายทอดทางพันธุกรรมในจีโนม endopg ของ
เชื้อรานี้เศษ hybridizing ไม่กี่ได้เห็นแม้
เมื่อเงื่อนไขเข้มงวดต่ำเป็นลูกจ้างในระหว่างขั้นตอนการผสมข้ามพันธุ์
(รูปที่ 1) ได้ดำเนินการอีกครั้งละเอียดของเมมเบรน
ด้วยรังสี pgg1 และ pgg2 ยีน
ที่ 65 องศาเซลเซียส วงที่ตรวจพบสอดคล้องกับที่เห็นในรูปที่ 1
ยืนยันว่ามีเพียงสอง endopg
ยีนในจีโนมของเชื้อรา (ไม่ได้แสดงข้อมูล) Exis-
Tence ของยีน exopg เป็นไปได้แม้ว่าจะไม่ตรวจพบในการศึกษาของเรา
เนื่องจากความคล้ายคลึงกันต่ำที่มียีน endopg.
เท่าที่เห็นในรูปที่ 1 เราสามารถสรุปได้ว่า pgg1 และ
ยีน pgg2 อยู่เล่มเดียวในพี griseoroseum ge-
nome เนื่องจากไม่มีข้อ จำกัด เว็บไซต์ภายในสำหรับ en-
zymes EcoRI, saci และ xbai เล่มเดียวที่ได้รับ
แสดงให้เห็นถึงยีน PG อื่น ๆ รวมทั้ง clpg1 และ
ยีน clpg2 ของ lindemuthianum Colletotrichum, PG1 และ
PG2 ของพี olsonii และ bcpg1 Botrytis cinerea ของ (Centis เอ
อัล 1996.. Centis et al, 1997; สิบมี et al, 1998;.. วากเนอร์และรหัส
อัล 2000) ก็ยังดูเหมือนว่า pgg1 และ pgg2 มีอยู่ใน
จำนวนสำเนาเดียวกันและที่ระดับความแตกต่างของอดีต
Pression รายงานยีนเหล่านี้โดย Ribon ตอัล (2002) เป็น
อาจเป็นเพราะตำแหน่งของยีนในจีโนม possibil-
ity ว่าพวกเขาจะถูกควบคุมโดยปัจจัยที่ถูกต้องทำหน้าที่แตกต่างกันคือ
ตอนนี้อยู่ภายใต้การตรวจสอบ.
การเกิดขึ้นของยีนที่เกี่ยวข้องใน PG อื่น ๆ
Penicillium สายพันธุ์ที่มี dna ลำดับคล้ายคลึงกันกับยีน
endopg ถูกตรวจสอบตลอด Penicillium
ชนิดพันธุ์ภายใต้ความเข้มงวดต่ำ (รูปที่ 2)
ทุกชนิดมีการทดสอบยีน endopg อย่างน้อยหนึ่ง แต่
ส่วนใหญ่ของพวกเขาแสดงให้เห็นว่าสองวงขอ hybridizing, อัล
แม้ว่า spond กับบางความแตกต่างความยาวที่อาจ Corre-
ยีนคล้ายคลึงกัน ตรงข้ามกับการ Penicillium,
ครอบครัวยีนประกอบด้วยอย่างน้อยห้าสมาชิก PG
ได้รับการตรวจพบในไนเจอร์, Aspergillus ข ซีเนเรียและ
490 Ribon et al,
รูปที่ 1 -. การวิเคราะห์ดวงทางตอนใต้ของ dna รวมจาก Penicillium
griseoroseum dna รวมถูกย่อย
o griseoroseumandréaข ค มาริสาแอนนิต้า Queiroz Ribon v และ Elza ฉ เดaraújodepartamento
เด microbiologia bioagro Universidade รัฐบาลกลางเดViçosaViçosa
มีนัสเชไรส์บราซิล
ระบบ pectinolytic abstractthe ของ griseoroseum Penicillium ได้รับการศึกษาเป็นรุ่นที่ในการสืบสวนสอบสวน
ในทุกแง่มุมของ geneorganization เห็ดใย ณ ที่นี่เราแสดงให้เห็นว่ายีน endopolygalacturonase - การเข้ารหัสที่ก่อนหน้านี้ isolatedexist
เป็นชุดเดียวในยีนเห็ด ลบการวิเคราะห์ดีเอ็นเอเปิดเผยว่าการมีอยู่ของยีนที่เกี่ยวข้อง inother
สายพันธุ์ Penicillium แม้ว่าจะเพียงหนึ่งหรือสองยีนก็พบว่าในการคัดค้าน familyreported ยีน endopg
สำหรับเห็ดใยอื่น ๆ ซีเควนซ์เบื่อหน่ายและกรดอะมิโนของยีนที่พิ Penicillium
ของธนาคารมีข้อมูล retrievedfrom เมื่อเทียบกับความยาวของ intron codon และจำนวนการใช้งาน
ไซต์และการเริ่มต้นซีเควนซ์ของฉันทามติ fortranslation introns ที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันกับที่แม้ว่าจะไม่มี oftheir
เบื่อหน่ายซีเควนซ์ของการอนุรักษ์ โดดเด่นไปด้วยตามลำดับอื่นๆคล้ายกับที่เห็นใน Aspergillus Neurospora ยีนและ
คำหลัก griseoroseum Penicillium เห็ดใยเพคติเน polygalacturonase องค์กรยีน
ได้รับได้รับการยอมรับวันที่ 14 พฤศจิกายน 2002 วันที่ 26 สิงหาคม 2002
introductionthe Penicillium กะกะคือทั่วโลกมีชื่อเสียงในด้าน
ของการผลิตในกระทรวงของตนและ extracellularenzymes สารรอง
ของมูลค่าทางการค้าซึ่งรวมถึง thepectinases
ใช้ในอุตสาหกรรมน้ำผลไม้ในระหว่าง thestage
ของยุ่ย ของโถแยกกากผลไม้น้ำผลไม้กลายเป็นน้ำ ordepectinization
(cullen และ kersten 1992 ที่ซาคาเอตอัล
1992;. grassin และ fauquembergue 1996)
ระบบ pectinolytic ที่ประกอบไปด้วยหลายแบบมีห้องน้ำในตัว
zymes กระจายตัวอยู่ใน 2 กลุ่มหลัก pectinesterases
ซึ่งปฏิกริยาที่เดอ - ฟ esterification ของกลุ่มเมท ธ อกซิ ofpectin
และ depolymerases ที่cleaveα -14 glycosidic ลิงค์
ช่วงวัยโดยหลักด้วยหรือบริษัทข้ามชาติ - การกำจัดเกิดปฏิกิริยา (พวกซา -. ไกอีตัล
1993) polygalacturonases (pgs) มี depolymerases thatspecifically
สลาย glycosidic พันธบัตรของ
กรดโพลี - กาแลค
การเข้ารหัสในยีนที่พิ Penicillium สายพันธุ์ havebeen
จำลองไว้และลักษณะอันเนื่องจากการใช้นี้ enzymein
ที่ทางชีววิทยาการบำบัดของเสียน้ำมี pectinand
ของบทบาทในการติดเชื้อและโรคพืช( อิชิดะและอัล 1997;
วากเนอร์และอัล 2000) ความโดดเด่นที่น่าสนใจของ
การ isthe PG เชื้อราของสารตกค้างสงวนไว้บางส่วนที่มี recentlybeen
ได้รับการพิสูจน์ว่ามีความจำเป็นสำหรับการทำงานของเอนไซม์( vansanten
เอตอัล 1999).
การลอกแบบยีนได้เปิดให้บริการรูปแบบใหม่ในการขอรับ fungalstrains
พร้อมด้วยระดับการแสดงออกทางความคิดเห็นเพิ่มมากขึ้นของโปรตีนที่
สำคัญอุตสาหกรรม areof การแนะนำของตำรวจ -
- ของยีนของดอกเบี้ยและยีน - การผสมผสานกลยุทธ์ havebeen
ใช้ในการเพิ่มการผลิตโปรตีนเช่น GLUCO -
อะไมเลส endoglucanase, ไซลาเนส,. วัวอีก prochymosin,
และมนุษย์ interleukin - 6 (Hata et al, 1991; saarelainen อีตัล
1993; Sánchez - Fernando Torres et al, 1994;... Tsuchiya et al, 1994;
Gouka ตอัล 1996).
กลุ่มของเรายังได้รับการศึกษา
griseoroseum Penicillium systemof pectinolytic เป็นระบบรุ่นสำหรับยีนหรือ -
ganization และกฎระเบียบในเห็ด isto ใยจุดมุ่งหมายของเรา
ได้รับพันธุ์ overproducing ที่สามารถนำไปใช้ในเท็กซัส -
อุตสาหกรรมกระเบื้องที่จะ degum ไฟเบอร์จากธรรมชาติสองยีนเข้ารหัส
endopgs pgg1 และ pgg2 ได้รับการโคลนและมีความแตกต่างกัน -
แสดง entially ในการตอบสนองต่อสื่อการเจริญเติบโต
(Ribon et al, 1999;.. Ribon et al, 2002) การศึกษาที่ถูก
ทำเพื่อตรวจสอบกลไกระดับโมเลกุลที่ควบคุมการแสดงออกของพวกเขา
ที่นี่เราจะแสดงองค์กรของทั้งสอง
ยีนในพี griseoroseum และเปรียบเทียบกับองค์กร
ของลำดับดีเอ็นเอคล้ายคลึงกันในจีโนมของสปีชีส์อื่น ๆ
Penicillium คุณลักษณะบางอย่างที่พบใน Aspergillus
และยีน Neurospora จะเห็นยังอยู่ใน Penicillium เป็นอีกครั้ง
vealed โดยเปรียบเทียบของหน่วยโครงสร้างของยีน
เข้ารหัส PG โคลนจนตอนนี้.
วัสดุและวิธีการ
สายพันธุ์เชื้อราและเชื้อผลิต
Penicillium charlesii (CCT 4752) พี chrysogenum
พี citrinum (CCT 3281) พี expansum พี griseoroseum
พันธุศาสตร์และชีววิทยาโมเลกุล, 25, 4, 489-493 (2002)
ลิขสิทธิ์โดยสังคมบราซิลของพันธุศาสตร์ พิมพ์ในบราซิล
www.sbg.org.br ส่งจดหมายไป: Elza ฉ โช E-mail:. ezfa @
เมล ufv.br.
บทความวิจัย (CCT 6241) พี Italicum พี janthinellum (CCT 3162) และ
พี purpurogenum (CCT 2008) มีการใช้ในการศึกษานี้.
วัฒนธรรมหุ้นที่ถูกเก็บรักษาไว้ในกลีเซอรอลที่อุณหภูมิ 4 องศา c.
จานเพาะเชื้อที่มีขนาดน้อย (Pontecorvo ตอัล.
1953) ปกคลุมด้วยเยื่อหุ้มกระดาษแก้วถูกเชื้อ
105 สปอร์และบ่มเป็นเวลาสองวันที่ 28 องศาเซลเซียส
เส้นใยที่ถูกถอดออกจากกระดาษแก้วเพื่อ dna อดีตฉุด
.
dna แยกและทางตอนใต้ของดวง
dna รวมจากสายพันธุ์ Penicillium เป็นอดีต
tracted ตามที่อธิบาย Specht ตอัล (1982) และตัดด้วย
EcoRI, saci และ sali ปฏิกิริยาการวิเคราะห์บน
0.8% เจล agarose,แล้วย้ายไป branes ข่าว-
duralon (Stratagene) ตาม Sambrook et al, (1989).
สอบสวนประกอบด้วยส่วน dna ขยายจากการ
dna ตาลจากพี griseoroseum, บริสุทธิ์จากเจลและ
รังสีแบบสุ่มที่มีสำคัญมัน ii ชุดติดฉลาก
(Stratagene) ส่วนนี้มีคล้ายคลึงกัน
โดเมน 420-bp พบในยีน endopg จากหลาย filamen-
tous เชื้อราและแบคทีเรียและถูกสร้างขึ้นตามที่อธิบายไว้โดย
แคตอัล (1995) พันธุ์ถูกหามออกในชั่วข้ามคืน
ที่ 60 องศาเซลเซียสในบัฟเฟอร์พันธุ์มาตรฐาน (Sambrook et al,.
1989), ล้างสองครั้งด้วย 2 x SSC, sds 0.1% เป็นเวลา 20 นาที,
และครั้งเดียวกับ 1 x SSC, sds 0.1% เพื่อ 10 นาที อัตโนมัติ
เอ็กซ์เรย์ที่ถูกสร้างขึ้นจากการสัมผัสห้าวันของ xomat
k ฟิล์ม (โกดัก) กับหน้าจอทวีความรุนแรง.
เบื่อหน่ายลำดับหมายเลขภาคยานุวัติ
genbank และฐานข้อมูล EMBL ถูกสแกน
PG-เข้ารหัสยีนจาก Penicillium ชนิด เจ็ดยีน
ถูกดึงและการจ้างงานสำหรับการเปรียบเทียบ:
ab015286 (พี digitatum) af047713 (พี expansum)
af085238 และ af195790 (พี griseoroseum) d79980 (พี
janthinellum) aj243521 และ aj243522 (พี olsonii).
ผลและการอภิปราย
องค์กรจีโนมของยีน PG-เข้ารหัสใน
Penicillium griseoroseumยีน endopg ทั้งหมดที่อธิบายจนตอนนี้สำหรับ filamen-
เชื้อรา tous มีโดเมนคล้ายคลึงกันประมาณ
400 bp สันนิษฐานว่าจะมีสารตกค้างที่เกี่ยวข้องกับ PG
กิจกรรม 420 ส่วน bp-dna มี Corre-
sponding โดเมนของพี griseoroseum ถูกใช้เป็นหัววัดใน
วิเคราะห์ blot ใต้ของดีเอ็นเอจีโนมในการตรวจสอบ
การดำรงอยู่ของครอบครัวที่ถ่ายทอดทางพันธุกรรมในจีโนม endopg ของ
เชื้อรานี้เศษ hybridizing ไม่กี่ได้เห็นแม้
เมื่อเงื่อนไขเข้มงวดต่ำเป็นลูกจ้างในระหว่างขั้นตอนการผสมข้ามพันธุ์
(รูปที่ 1) ได้ดำเนินการอีกครั้งละเอียดของเมมเบรน
ด้วยรังสี pgg1 และ pgg2 ยีน
ที่ 65 องศาเซลเซียส วงที่ตรวจพบสอดคล้องกับที่เห็นในรูปที่ 1
ยืนยันว่ามีเพียงสอง endopg
ยีนในจีโนมของเชื้อรา (ไม่ได้แสดงข้อมูล) Exis-
Tence ของยีน exopg เป็นไปได้แม้ว่าจะไม่ตรวจพบในการศึกษาของเรา
เนื่องจากความคล้ายคลึงกันต่ำที่มียีน endopg.
เท่าที่เห็นในรูปที่ 1 เราสามารถสรุปได้ว่า pgg1 และ
ยีน pgg2 อยู่เล่มเดียวในพี griseoroseum ge-
nome เนื่องจากไม่มีข้อ จำกัด เว็บไซต์ภายในสำหรับ en-
zymes EcoRI, saci และ xbai เล่มเดียวที่ได้รับ
แสดงให้เห็นถึงยีน PG อื่น ๆ รวมทั้ง clpg1 และ
ยีน clpg2 ของ lindemuthianum Colletotrichum, PG1 และ
PG2 ของพี olsonii และ bcpg1 Botrytis cinerea ของ (Centis เอ
อัล 1996.. Centis et al, 1997; สิบมี et al, 1998;.. วากเนอร์และรหัส
อัล 2000) ก็ยังดูเหมือนว่า pgg1 และ pgg2 มีอยู่ใน
จำนวนสำเนาเดียวกันและที่ระดับความแตกต่างของอดีต
Pression รายงานยีนเหล่านี้โดย Ribon ตอัล (2002) เป็น
อาจเป็นเพราะตำแหน่งของยีนในจีโนม possibil-
ity ว่าพวกเขาจะถูกควบคุมโดยปัจจัยที่ถูกต้องทำหน้าที่แตกต่างกันคือ
ตอนนี้อยู่ภายใต้การตรวจสอบ.
การเกิดขึ้นของยีนที่เกี่ยวข้องใน PG อื่น ๆ
Penicillium สายพันธุ์ที่มี dna ลำดับคล้ายคลึงกันกับยีน
endopg ถูกตรวจสอบตลอด Penicillium
ชนิดพันธุ์ภายใต้ความเข้มงวดต่ำ (รูปที่ 2)
ทุกชนิดมีการทดสอบยีน endopg อย่างน้อยหนึ่ง แต่
ส่วนใหญ่ของพวกเขาแสดงให้เห็นว่าสองวงขอ hybridizing, อัล
แม้ว่า spond กับบางความแตกต่างความยาวที่อาจ Corre-
ยีนคล้ายคลึงกัน ตรงข้ามกับการ Penicillium,
ครอบครัวยีนประกอบด้วยอย่างน้อยห้าสมาชิก PG
ได้รับการตรวจพบในไนเจอร์, Aspergillus ข ซีเนเรียและ
490 Ribon et al,
รูปที่ 1 -. การวิเคราะห์ดวงทางตอนใต้ของ dna รวมจาก Penicillium
griseoroseum dna รวมถูกย่อย
การแปล กรุณารอสักครู่..
Polygalacturonase โครงสร้างองค์กรของยีน - การเข้ารหัส frompenicillium
O griseoroseumandréa B C มาริสาแอนนิต้า ribon V queiroz และ elza F araújodepartamento เดอ
เดอ microbiologia bioagro universidade เดอกลาง viçosa viçosa
มีนัสเชไรส์บราซิล
ระบบฯลฯ แล้วแต่ pectinolytic abstractthe นั้น ๆ griseoroseum penicillium ได้รับการศึกษาเป็นรุ่นที่ในการสืบสวนสอบสวน
ในทุกแง่มุมของ geneorganization เห็ด filamentous ณที่นี่เราแสดงให้เห็นว่ายีน endopolygalacturonase - การเข้ารหัสที่ก่อนหน้านี้ isolatedexist
เป็นชุดเดียวในยีนเห็ดลบการวิเคราะห์ดีเอ็นเอเปิดเผยว่าการมีอยู่ของยีนที่เกี่ยวข้อง inother
สายพันธุ์ penicillium แม้ว่าจะเพียงหนึ่งหรือสองยีนก็พบว่าในการคัดค้าน familyreported ยีน endopg
สำหรับเห็ด filamentous อื่น ๆ ซีเควนซ์นิวคลีโอไทด์และกรดอะมิโนของยีนที่ PG penicillium นั้น ๆ
ธนาคารมีข้อมูล retrievedfrom เมื่อเทียบกับความยาวของ intron รหัสพันธุกรรมและจำนวนการใช้งาน
ไซต์และการเริ่มต้นซีเควนซ์ของฉันทามติ fortranslation introns ที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันกับที่แม้ว่าจะไม่มี oftheir
นิวคลีโอไทด์ซีเควนซ์ของการอนุรักษ์โดดเด่นไปด้วยตามลำดับอื่นๆคล้ายกับที่เห็นใน aspergillus neurospora ยีนและ
คำหลัก griseoroseum penicillium เห็ด filamentous pectinase polygalacturonase องค์กรยีน
ได้รับวันที่ 26 สิงหาคม 2002 ได้รับการยอมรับในวันที่ 14 พฤศจิกายน 2002
introductionthe
penicillium กะกะคือทั่วโลกมีชื่อเสียงในด้าน
ของการผลิตในกระทรวงของตนและ metabolites extracellularenzymes รอง
ของมูลค่าทางการค้าซึ่งรวมถึง thepectinases
ใช้ในอุตสาหกรรมน้ำผลไม้ในระหว่าง thestage
นั้น ๆ maceration ของโถแยกกากผลไม้น้ำผลไม้กลายเป็นน้ำ ordepectinization
(คุลเลนและ kersten 1992 sakaguchi et al.
1992; grassin และ fauquembergue 1996)
ที่ประกอบไปด้วยหลายแบบมีห้องน้ำในตัว pectinolytic ระบบฯลฯ แล้วแต่
zymes กระจายตัวอยู่ใน 2 กลุ่มหลัก pectinesterases,
ซึ่งปฏิกริยาที่เดอ - esterification นั้น ๆ methoxyl กลุ่ม ofpectin
และ depolymerases cleaveα -14 glycosidic ลิงค์
ช่วงวัยโดยหลักด้วยหรือบริษัทข้ามชาติ - การกำจัดเกิดปฏิกิริยา (พวกซา - ไก etal
. 1993) polygalacturonases (พีจีเอสแซนดี้) มี depolymerases thatspecifically
hydrolyze glycosidic พันธบัตรของ
กรดโพลี - galacturonic
การเข้ารหัสในยีนที่ PG penicillium สายพันธุ์ได้
จำลองไว้และลักษณะอันเนื่องจากการใช้นี้ enzymein
ที่ทางชีววิทยาการบำบัดของเสียน้ำมี pectinand
ของบทบาทในการติดเชื้อและโรคพืช (อิชิดะ et al. 1997;
วากเนอร์ et al. 2000) ความโดดเด่นที่น่าสนใจของ
ตามหลักคือ PG เชื้อราของสารตกค้างสงวนไว้บางส่วนที่มี recentlybeen
ได้รับการพิสูจน์ว่ามีความจำเป็นสำหรับการทำงานของเอนไซม์ (vansanten
et al. 1999)
การลอกแบบยีนได้เปิดให้บริการรูปแบบใหม่ในการขอรับ fungalstrains
พร้อมด้วยระดับการแสดงออกทางความคิดเห็นเพิ่มมากขึ้นของโปรตีนที่
สำคัญอุตสาหกรรม areof การแนะนำของตำรวจ-
-ของยีนของดอกเบี้ยและยีน - การผสมผสานกลยุทธ์ได้
คนหนึใช้ในการเพิ่มการผลิตโปรตีนเช่น-
amylase, endoglucanase ไซลา เนสProchymosin วัวอีก
และมนุษย์ interleukin - 6 (ฮาตะ et al. 1991; saarelainen etal
1993; sánchez - เฟอร์นันโดทอร์เรส et al. 1994 สึจิยะ et al. 1994;
gouka et al. 1996)
กลุ่มของเรายังได้รับการศึกษา
griseoroseum penicillium systemof pectinolytic เป็นระบบรุ่นสำหรับยีนหรือ-
ganization และกฎระเบียบในเห็ด filamentous isto จุดมุ่งหมายของเรา
ได้รับพันธุ์ overproducing ที่สามารถนำไปใช้ใน tx-
อุตสาหกรรมกระเบื้องที่จะ degum ไฟเบอร์จากธรรมชาติสองยีนเข้า
endoPGs, pgg1 และ pgg2 ได้ถูก cloned และแตกต่าง-
แสดงตอบสนองปานกลางเจริญเติบโต entially
(Ribon et al. 1999 Ribon et al. 2002) การศึกษากำลัง
ทำการตรวจสอบกลไกระดับโมเลกุลที่ควบคุม
นิพจน์ของพวกเขา ที่นี่เราแสดงองค์กรทั้ง
ยีนใน P. griseoroseum และเปรียบเทียบกับองค์กร
homologous ลำดับดีเอ็นเอในกลุ่มของอื่น ๆ
พันธุ์ Penicillium คุณลักษณะบางอย่างที่พบใน Aspergillus
และยีน Neurospora เห็นอีกใน Penicillium ใหม่-
vealed โดยการเปรียบเทียบหน่วยโครงสร้างของยีน
เข้า PG cloned จนทันที
วัสดุและวิธีการ
สายพันธุ์เชื้อราและผลิต inoculum
Penicillium charlesii (CCT 4752), P. chrysogenum,
P. citrinum (CCT 3281), P. expansum, P. griseoroseum
พันธุศาสตร์และอณูชีววิทยา 25, 4, 489-493 (2002)
ลิขสิทธิ์ โดยสมาคมพันธุศาสตร์บราซิล พิมพ์ในบราซิล
www.sbg.org.br
ส่งจดหมายไปที่: Elza F. เด Araújo อีเมล์: ezfa@mail.
ufv.br.
Research บทความ
(CCT 6241), P. italicum, P. janthinellum (CCT 3162), และ
purpurogenum P. (CCT 2008) ได้รับการว่าจ้างในการศึกษานี้
วัฒนธรรมสินค้าคงคลังถูกจัดเก็บอยู่ในกลีเซอรที่ 4 ° C.
จาน Petri ประกอบด้วยปานกลางน้อยที่สุด (Pontecorvo et al.
1953) ปกคลุม ด้วย cellophane เมมเบรนถูก inoculated
ด้วย 105 conidia และ incubated สองวันที่ 28 องศาเซลเซียส ใน
mycelia ออกจาก cellophane ในอดีตดีเอ็นเอ-
ลาก
แยกดีเอ็นเอและคืนในใต้ตา
DNA ที่รวมจากสายพันธุ์ Penicillium เก่า
tracted อธิบายไว้โดย Specht et al. (1982), และ cleaved
EcoRI, SacI และสลี่ ปฏิกิริยาที่ถูกวิเคราะห์ on
0.8% agarose เจล แล้ว โอนย้ายไปหน่วยความจำ Duralon-
branes (Stratagene) ตาม Sambrook et al. (1989) .
โพรบประกอบด้วยดีเอ็นเอส่วนที่ขยายจากการ-
ทัลดีเอ็นเอจาก P. griseoroseum บริสุทธิ์จากเจ และ
radiolabelled กับการสุ่มมันนายก II ติดฉลาก Kit
(Stratagene) ส่วนนี้ประกอบด้วย 420-bp homologous
โดพบในยีน endoPG จากหลาย filamen-
tous เชื้อราและแบคทีเรีย และสร้างตามที่อธิบายไว้โดย
al. et แครีแกรนต์ (1995) ทำ hybridization ออกแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์
ที่ 60 ° C ในบัฟเฟอร์มาตรฐาน hybridization (Sambrook et al.
1989), หินสองเท่ากับ 2 X SSC, 0.1% SDS สำหรับ 20 นาที,
และหนึ่งครั้ง ด้วย SSC X 1, 0.1% SDS สำหรับ 10 นาทีอัตโนมัติ-
radiographs ทำตามวันที่ห้าของ XOMAT
K ฟิล์ม (โกดัก), กับการ intensifying จอ.
เลขทะเบียนลำดับนิวคลีโอไทด์
ฐานข้อมูล GenBank และ EMBL ถูกสแกนสำหรับ
PG เข้ารหัสยีนสายพันธุ์ Penicillium ยีนเจ็ด
ถูกดึง และลูกจ้างสำหรับการเปรียบเทียบ:
AB015286 (P. digitatum), AF047713 (P. expansum),
AF085238 และ AF195790 (P. griseoroseum), D79980 (P.
janthinellum), AJ243521 และ AJ243522 (P. olsonii)
ผลลัพธ์และสนทนา
Genomic องค์กรของยีน PG รหัสใน
Penicillium griseoroseum
ยีน endoPG ทั้งหมดที่อธิบายไว้จนถึงปัจจุบันสำหรับ filamen-
tous เชื้อรามีโดเมนเป็น homologous ประมาณ
400 ถือว่าประกอบด้วยตกค้างที่เกี่ยวข้องกับ PG bp
กิจกรรม ส่วน bp 420-ดีเอ็นเอที่ประกอบด้วยคอร์-
sponding P. griseoroseum โดเมนถูกใช้เป็นโพรบใน
คืนในตาภาคใต้วิเคราะห์เอ็น genomic สืบ
การดำรงอยู่ของครอบครัวเป็นยีน endoPG ในจีโนมของ
เชื้อรานี้ บางส่วนของ hybridizing ที่ไม่ได้เห็นแม้
เมื่อเงื่อนไขต่ำสุดที่ stringency ถูกจ้างในระหว่าง
hybridization ขั้นตอน (รูปที่ 1) อีกครั้งโดยอาศัยของเมมเบรน
กับ radiolabelled pgg1 และ pgg2 ยีนถูกดำเนิน
ที่ 65 องศาเซลเซียส วงพบ corresponded กับใน
1 รูปยืนยันสถานะของ endoPG เพียงสอง
ยีนในกลุ่มเห็ดรา (ข้อมูลไม่แสดง) Exis-
tence ของยีน exoPG เป็นไปได้แม้ว่าจะไม่พบใน
ของเราศึกษาจากต่ำคล้ายคลึงกับยีน endoPG
ที่เห็นในรูปที่ 1 เราสามารถสรุปที่ pgg1 และ
pgg2 ยีนอยู่เป็นสำเนาเดียวใน P. griseoroseum ge-
nome เนื่องจากมีเว็บไซต์ไม่จำกัดภายในสำหรับห้องน้ำในตัว-
zymes EcoRI, SacI และ XbaI สำเนาเดียวได้
แสดงสำหรับยีน PG อื่น ๆ รวมถึงการ clpg1 และ
clpg2 ยีนของ Colletotrichum lindemuthianum, pg1 และ
pg2 ของ P. olsonii และ bcpg1 ของ Botrytis cinerea (Centis et
al. 1996 Centis et al. 1997 มีสิบเอ็ด al. 1998 วากเนอร์ร้อยเอ็ด
al. 2000) มันยังดูเหมือนว่า pgg1 และ pgg2 อยู่ใน
เหมือนคัดลอกหมายเลขและที่ระดับแตกต่างของเก่า
pression รายงานโดย Ribon et al. (2002) ยีนเหล่านี้จะ
ท่องตำแหน่งยีนในกลุ่ม Possibil-
ity ที่พวกเขาถูกควบคุม โดยปัจจัยทำหน้าที่ cis เป็น
ตอนนี้ใต้สอบสวน
ของยีน PG ที่สอดคล้องกันในอีก
พันธุ์ Penicillium
ของ DNA ลำดับ homologous กับ
endoPG ยีนถูกสอบสวนตลอด Penicillium
พันธุ์ภายใต้ stringency ต่ำ hybridization (2 รูป) ทั้งหมด
พันธุ์ทดสอบมียีน endoPG น้อย อย่างไรก็ตาม,
ส่วนใหญ่จะพบสองขอ hybridizing วง อัล-
แม้ว่า มีบางความยาวโพลิมอร์ฟิซึม ที่อาจคอร์-
spond สู่ homologous ยีน จำกัด Penicillium,
มียีนครอบครัวประกอบด้วยสมาชิก PG น้อย 5
ถูกตรวจพบในไนเจอร์ Aspergillus, cinerea เกิด และ
490 Ribon et al.
รูปที่ 1 - คืนในตาภาคใต้วิเคราะห์ดีเอ็นเอรวมจาก Penicillium
griseoroseum ดีเอ็นเอทั้งหมดถูกต้อง
O griseoroseumandréa B C มาริสาแอนนิต้า ribon V queiroz และ elza F araújodepartamento เดอ
เดอ microbiologia bioagro universidade เดอกลาง viçosa viçosa
มีนัสเชไรส์บราซิล
ระบบฯลฯ แล้วแต่ pectinolytic abstractthe นั้น ๆ griseoroseum penicillium ได้รับการศึกษาเป็นรุ่นที่ในการสืบสวนสอบสวน
ในทุกแง่มุมของ geneorganization เห็ด filamentous ณที่นี่เราแสดงให้เห็นว่ายีน endopolygalacturonase - การเข้ารหัสที่ก่อนหน้านี้ isolatedexist
เป็นชุดเดียวในยีนเห็ดลบการวิเคราะห์ดีเอ็นเอเปิดเผยว่าการมีอยู่ของยีนที่เกี่ยวข้อง inother
สายพันธุ์ penicillium แม้ว่าจะเพียงหนึ่งหรือสองยีนก็พบว่าในการคัดค้าน familyreported ยีน endopg
สำหรับเห็ด filamentous อื่น ๆ ซีเควนซ์นิวคลีโอไทด์และกรดอะมิโนของยีนที่ PG penicillium นั้น ๆ
ธนาคารมีข้อมูล retrievedfrom เมื่อเทียบกับความยาวของ intron รหัสพันธุกรรมและจำนวนการใช้งาน
ไซต์และการเริ่มต้นซีเควนซ์ของฉันทามติ fortranslation introns ที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันกับที่แม้ว่าจะไม่มี oftheir
นิวคลีโอไทด์ซีเควนซ์ของการอนุรักษ์โดดเด่นไปด้วยตามลำดับอื่นๆคล้ายกับที่เห็นใน aspergillus neurospora ยีนและ
คำหลัก griseoroseum penicillium เห็ด filamentous pectinase polygalacturonase องค์กรยีน
ได้รับวันที่ 26 สิงหาคม 2002 ได้รับการยอมรับในวันที่ 14 พฤศจิกายน 2002
introductionthe
penicillium กะกะคือทั่วโลกมีชื่อเสียงในด้าน
ของการผลิตในกระทรวงของตนและ metabolites extracellularenzymes รอง
ของมูลค่าทางการค้าซึ่งรวมถึง thepectinases
ใช้ในอุตสาหกรรมน้ำผลไม้ในระหว่าง thestage
นั้น ๆ maceration ของโถแยกกากผลไม้น้ำผลไม้กลายเป็นน้ำ ordepectinization
(คุลเลนและ kersten 1992 sakaguchi et al.
1992; grassin และ fauquembergue 1996)
ที่ประกอบไปด้วยหลายแบบมีห้องน้ำในตัว pectinolytic ระบบฯลฯ แล้วแต่
zymes กระจายตัวอยู่ใน 2 กลุ่มหลัก pectinesterases,
ซึ่งปฏิกริยาที่เดอ - esterification นั้น ๆ methoxyl กลุ่ม ofpectin
และ depolymerases cleaveα -14 glycosidic ลิงค์
ช่วงวัยโดยหลักด้วยหรือบริษัทข้ามชาติ - การกำจัดเกิดปฏิกิริยา (พวกซา - ไก etal
. 1993) polygalacturonases (พีจีเอสแซนดี้) มี depolymerases thatspecifically
hydrolyze glycosidic พันธบัตรของ
กรดโพลี - galacturonic
การเข้ารหัสในยีนที่ PG penicillium สายพันธุ์ได้
จำลองไว้และลักษณะอันเนื่องจากการใช้นี้ enzymein
ที่ทางชีววิทยาการบำบัดของเสียน้ำมี pectinand
ของบทบาทในการติดเชื้อและโรคพืช (อิชิดะ et al. 1997;
วากเนอร์ et al. 2000) ความโดดเด่นที่น่าสนใจของ
ตามหลักคือ PG เชื้อราของสารตกค้างสงวนไว้บางส่วนที่มี recentlybeen
ได้รับการพิสูจน์ว่ามีความจำเป็นสำหรับการทำงานของเอนไซม์ (vansanten
et al. 1999)
การลอกแบบยีนได้เปิดให้บริการรูปแบบใหม่ในการขอรับ fungalstrains
พร้อมด้วยระดับการแสดงออกทางความคิดเห็นเพิ่มมากขึ้นของโปรตีนที่
สำคัญอุตสาหกรรม areof การแนะนำของตำรวจ-
-ของยีนของดอกเบี้ยและยีน - การผสมผสานกลยุทธ์ได้
คนหนึใช้ในการเพิ่มการผลิตโปรตีนเช่น-
amylase, endoglucanase ไซลา เนสProchymosin วัวอีก
และมนุษย์ interleukin - 6 (ฮาตะ et al. 1991; saarelainen etal
1993; sánchez - เฟอร์นันโดทอร์เรส et al. 1994 สึจิยะ et al. 1994;
gouka et al. 1996)
กลุ่มของเรายังได้รับการศึกษา
griseoroseum penicillium systemof pectinolytic เป็นระบบรุ่นสำหรับยีนหรือ-
ganization และกฎระเบียบในเห็ด filamentous isto จุดมุ่งหมายของเรา
ได้รับพันธุ์ overproducing ที่สามารถนำไปใช้ใน tx-
อุตสาหกรรมกระเบื้องที่จะ degum ไฟเบอร์จากธรรมชาติสองยีนเข้า
endoPGs, pgg1 และ pgg2 ได้ถูก cloned และแตกต่าง-
แสดงตอบสนองปานกลางเจริญเติบโต entially
(Ribon et al. 1999 Ribon et al. 2002) การศึกษากำลัง
ทำการตรวจสอบกลไกระดับโมเลกุลที่ควบคุม
นิพจน์ของพวกเขา ที่นี่เราแสดงองค์กรทั้ง
ยีนใน P. griseoroseum และเปรียบเทียบกับองค์กร
homologous ลำดับดีเอ็นเอในกลุ่มของอื่น ๆ
พันธุ์ Penicillium คุณลักษณะบางอย่างที่พบใน Aspergillus
และยีน Neurospora เห็นอีกใน Penicillium ใหม่-
vealed โดยการเปรียบเทียบหน่วยโครงสร้างของยีน
เข้า PG cloned จนทันที
วัสดุและวิธีการ
สายพันธุ์เชื้อราและผลิต inoculum
Penicillium charlesii (CCT 4752), P. chrysogenum,
P. citrinum (CCT 3281), P. expansum, P. griseoroseum
พันธุศาสตร์และอณูชีววิทยา 25, 4, 489-493 (2002)
ลิขสิทธิ์ โดยสมาคมพันธุศาสตร์บราซิล พิมพ์ในบราซิล
www.sbg.org.br
ส่งจดหมายไปที่: Elza F. เด Araújo อีเมล์: ezfa@mail.
ufv.br.
Research บทความ
(CCT 6241), P. italicum, P. janthinellum (CCT 3162), และ
purpurogenum P. (CCT 2008) ได้รับการว่าจ้างในการศึกษานี้
วัฒนธรรมสินค้าคงคลังถูกจัดเก็บอยู่ในกลีเซอรที่ 4 ° C.
จาน Petri ประกอบด้วยปานกลางน้อยที่สุด (Pontecorvo et al.
1953) ปกคลุม ด้วย cellophane เมมเบรนถูก inoculated
ด้วย 105 conidia และ incubated สองวันที่ 28 องศาเซลเซียส ใน
mycelia ออกจาก cellophane ในอดีตดีเอ็นเอ-
ลาก
แยกดีเอ็นเอและคืนในใต้ตา
DNA ที่รวมจากสายพันธุ์ Penicillium เก่า
tracted อธิบายไว้โดย Specht et al. (1982), และ cleaved
EcoRI, SacI และสลี่ ปฏิกิริยาที่ถูกวิเคราะห์ on
0.8% agarose เจล แล้ว โอนย้ายไปหน่วยความจำ Duralon-
branes (Stratagene) ตาม Sambrook et al. (1989) .
โพรบประกอบด้วยดีเอ็นเอส่วนที่ขยายจากการ-
ทัลดีเอ็นเอจาก P. griseoroseum บริสุทธิ์จากเจ และ
radiolabelled กับการสุ่มมันนายก II ติดฉลาก Kit
(Stratagene) ส่วนนี้ประกอบด้วย 420-bp homologous
โดพบในยีน endoPG จากหลาย filamen-
tous เชื้อราและแบคทีเรีย และสร้างตามที่อธิบายไว้โดย
al. et แครีแกรนต์ (1995) ทำ hybridization ออกแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์
ที่ 60 ° C ในบัฟเฟอร์มาตรฐาน hybridization (Sambrook et al.
1989), หินสองเท่ากับ 2 X SSC, 0.1% SDS สำหรับ 20 นาที,
และหนึ่งครั้ง ด้วย SSC X 1, 0.1% SDS สำหรับ 10 นาทีอัตโนมัติ-
radiographs ทำตามวันที่ห้าของ XOMAT
K ฟิล์ม (โกดัก), กับการ intensifying จอ.
เลขทะเบียนลำดับนิวคลีโอไทด์
ฐานข้อมูล GenBank และ EMBL ถูกสแกนสำหรับ
PG เข้ารหัสยีนสายพันธุ์ Penicillium ยีนเจ็ด
ถูกดึง และลูกจ้างสำหรับการเปรียบเทียบ:
AB015286 (P. digitatum), AF047713 (P. expansum),
AF085238 และ AF195790 (P. griseoroseum), D79980 (P.
janthinellum), AJ243521 และ AJ243522 (P. olsonii)
ผลลัพธ์และสนทนา
Genomic องค์กรของยีน PG รหัสใน
Penicillium griseoroseum
ยีน endoPG ทั้งหมดที่อธิบายไว้จนถึงปัจจุบันสำหรับ filamen-
tous เชื้อรามีโดเมนเป็น homologous ประมาณ
400 ถือว่าประกอบด้วยตกค้างที่เกี่ยวข้องกับ PG bp
กิจกรรม ส่วน bp 420-ดีเอ็นเอที่ประกอบด้วยคอร์-
sponding P. griseoroseum โดเมนถูกใช้เป็นโพรบใน
คืนในตาภาคใต้วิเคราะห์เอ็น genomic สืบ
การดำรงอยู่ของครอบครัวเป็นยีน endoPG ในจีโนมของ
เชื้อรานี้ บางส่วนของ hybridizing ที่ไม่ได้เห็นแม้
เมื่อเงื่อนไขต่ำสุดที่ stringency ถูกจ้างในระหว่าง
hybridization ขั้นตอน (รูปที่ 1) อีกครั้งโดยอาศัยของเมมเบรน
กับ radiolabelled pgg1 และ pgg2 ยีนถูกดำเนิน
ที่ 65 องศาเซลเซียส วงพบ corresponded กับใน
1 รูปยืนยันสถานะของ endoPG เพียงสอง
ยีนในกลุ่มเห็ดรา (ข้อมูลไม่แสดง) Exis-
tence ของยีน exoPG เป็นไปได้แม้ว่าจะไม่พบใน
ของเราศึกษาจากต่ำคล้ายคลึงกับยีน endoPG
ที่เห็นในรูปที่ 1 เราสามารถสรุปที่ pgg1 และ
pgg2 ยีนอยู่เป็นสำเนาเดียวใน P. griseoroseum ge-
nome เนื่องจากมีเว็บไซต์ไม่จำกัดภายในสำหรับห้องน้ำในตัว-
zymes EcoRI, SacI และ XbaI สำเนาเดียวได้
แสดงสำหรับยีน PG อื่น ๆ รวมถึงการ clpg1 และ
clpg2 ยีนของ Colletotrichum lindemuthianum, pg1 และ
pg2 ของ P. olsonii และ bcpg1 ของ Botrytis cinerea (Centis et
al. 1996 Centis et al. 1997 มีสิบเอ็ด al. 1998 วากเนอร์ร้อยเอ็ด
al. 2000) มันยังดูเหมือนว่า pgg1 และ pgg2 อยู่ใน
เหมือนคัดลอกหมายเลขและที่ระดับแตกต่างของเก่า
pression รายงานโดย Ribon et al. (2002) ยีนเหล่านี้จะ
ท่องตำแหน่งยีนในกลุ่ม Possibil-
ity ที่พวกเขาถูกควบคุม โดยปัจจัยทำหน้าที่ cis เป็น
ตอนนี้ใต้สอบสวน
ของยีน PG ที่สอดคล้องกันในอีก
พันธุ์ Penicillium
ของ DNA ลำดับ homologous กับ
endoPG ยีนถูกสอบสวนตลอด Penicillium
พันธุ์ภายใต้ stringency ต่ำ hybridization (2 รูป) ทั้งหมด
พันธุ์ทดสอบมียีน endoPG น้อย อย่างไรก็ตาม,
ส่วนใหญ่จะพบสองขอ hybridizing วง อัล-
แม้ว่า มีบางความยาวโพลิมอร์ฟิซึม ที่อาจคอร์-
spond สู่ homologous ยีน จำกัด Penicillium,
มียีนครอบครัวประกอบด้วยสมาชิก PG น้อย 5
ถูกตรวจพบในไนเจอร์ Aspergillus, cinerea เกิด และ
490 Ribon et al.
รูปที่ 1 - คืนในตาภาคใต้วิเคราะห์ดีเอ็นเอรวมจาก Penicillium
griseoroseum ดีเอ็นเอทั้งหมดถูกต้อง
การแปล กรุณารอสักครู่..
โครงสร้างองค์กรของยีน polygalacturonase - การเข้ารหัส frompenicillium
O griseoroseumandréa B . C . มาริสาแอนนิต้า ribon V queiroz และ elza F . de araújodepartamento
de microbiologia Federal de universidade bioagro viçosa viçosa
มีนัสเชไรส์บราซิล.
ระบบ pectinolytic abstractthe ของ griseoroseum penicillium ได้รับการศึกษาเป็นรุ่นที่ในการสืบสวนสอบสวน
geneorganization เห็ด filamentous ณที่นี่เราแสดงให้เห็นว่ายีน endopolygalacturonase - การเข้ารหัสที่ก่อนหน้านี้ isolatedexist
เป็นชุดเดียวในยีนเห็ดลบการวิเคราะห์ดีเอ็นเอเปิดเผยว่าการมีอยู่ข inother
สายพันธุ์ penicillium แม้ว่าจะเพียงหนึ่งหรือสองยีนก็พบว่าในการคั familyreported ยีน endopg
ตามมาตรฐานสำหรับเห็ด filamentous codon penicillium ของ
ธนาคารมีข้อมูล retrievedfrom เมื่อเทียบกับความยาวของ intron อื่นๆซีเควนซ์ nucleotide และกรดอะมิโนของยีนที่ PG และจำนวนการใช้งาน
ไซต์และการเริ่มต้นซีเควนซ์ของฉันทามติ fortranslation introns ที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันกับที่แม้ว่าจะไม่ม oftheir
nucleotide ซีเควนซ์ของการอนุรักษ์โดดเด่นไปด้วยตามลำดับอื่นๆคล้ายกับที่เห็นใ aspergillus neurospora ยีนและ
penicillium คำหลัก griseoroseum เห็ด filamentous polygalacturonase pectinase องค์กรยีน
ได้รับวันที่ 26 สิงหาคม 2002 ได้รับการยอมรับวันที่ 14 พฤศจิกายน 2002 .
introductionthe penicillium กะกะคือทั่วโลกมีชื่อเสียงในด้าน
ตามมาตรฐานของการผลิตในกระทรวงของตนและ metabolites extracellularenzymes รอง
ของมูลค่าทางการค้าซึ่งรวมถึง thepectinases ใช้ในอุตสาหกรรมน้ำผลไม้ในระหว่าง thestage
ของ maceration ของโถแยกกากผลไม้น้ำผลไม้กลายเป็นน้ำ ordepectinization
( Cullen และ kersten 1992 ที่ sakaguchi et al .
1992 ; grassin และ fauquembergue 1996 )ระบบ
pectinolytic ที่ประกอบไปด้วยหลายแบบมีห้องน้ำในตัว zymes กระจายตัวอยู่ใน 2 กลุ่มหลัก pectinesterases ,
ซึ่งปฏิกริยาที่ de - esterification ของกลุ่ม methoxyl ofpectin
และ depolymerases ที่ cleaveα - 1 ,4 glycosidic ลิงค์
ช่วงวัยโดยหลักด้วยหรือบริษัทข้ามชาติ - การกำจัดเกิดปฏิกิริยา(พวกซา - ไก etal
) 1993 ) polygalacturonases ( PGS )มี depolymerases thatspecifically penicillium
การเข้ารหัสในยีนที่ PG glycosidic พันธบัตรของ
กรด Poly - galacturonic
hydrolyze สายพันธุ์ havebeen
จำลองไว้และลักษณะอันเนื่องจากการใช้นี้ enzymein
ที่ทางชีววิทยาการบำบัดของเสียน้ำมี pectinand ของบทบาทในการติดเชื้อและโรคพืช( ishida et al . 1997
วากเนอร์ et al . 2000 ) ความโดดเด่นที่น่าสนใจของ
ตามมาตรฐานการ isthe PG เชื้อราของสารตกค้างสงวนไว้บางส่วนที่มี recentlybeen
ได้รับการพิสูจน์ว่ามีความจำเป็นสำหรับก vansanten
et al . 1999).
การลอกแบบยีนได้เปิดให้บริการรูปแบบใหม่ใน fungalstrains
ตามมาตรฐานพร้อมด้วยระดับการแสดงออกทางความคิดเห็นเพิ่ areof การแนะนำของตำรวจ -
- - ของยีนของดอกเบี้ยและยีน - การผสมผสานกลยุทธ์ havebeen
ใช้ในการเพิ่มการผลิตโปรตีนเช่น gluco -
amylase , endoglucanase , xylanase ,วัวอีก prochymosin
และมนุษย์ interleukin - 6 ( hata et al . 1991 saarelainen etal
) 1993 sánchez - Fernando Torres et al . 1994 tsuchiya et al . 1994
gouka et al . 1996 )..
กลุ่มของเรายังได้รับการศึกษา griseoroseum penicillium systemof pectinolytic เป็นระบบรุ่นสำหรับยีนหรือ -
ganization ยีนและกฎระเบียบในเห็ด filamentous isto จุดมุ่งหมายของเรา
ได้รับพันธุ์ overproducing ที่สามารถนำไปใช้ใน tx -
อุตสาหกรรมกระเบื้องที่จะ degum ไฟเบอร์จากธรรมชาติสองการเข้ารหัส
endopgs pgg pgg 1 และ 2 มีการจำลองไว้และได้รับแตกต่าง -
entially แสดงความจำนงในการตอบสนองมีขนาดกลางการขยายตัวที่
( ribon et al . 1999 ribon et al . 2002 ) การศึกษามีการ
ซึ่งจะช่วยทำให้ทำการสอบสวนกลไกระดับโมเลกุลที่ทำหน้าที่ควบคุมการแสดงออกของเขา
ณที่นี่เราแสดงองค์กรที่ของยีน
ซึ่งจะช่วยทั้งใน griseoroseum p .และเปรียบเทียบกับองค์กรที่
ของซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกันลำดับดีเอ็นเอในยีนของสายพันธุ์อื่นๆ
penicillium คุณสมบัติบางอย่างอยู่ใน aspergillus
ตามมาตรฐานneurospora ยีนและยังได้เห็นใน penicillium เป็นอีกครั้ง
vealed โดยการเปรียบเทียบที่โครงสร้างของยีน
การเข้ารหัส PG จำลองไว้จนถึงบัดนี้.
วัสดุและวิธีการเชื้อรา inoculum พันธุ์และการผลิต
penicillium charlesii ( cct 4752 ), p . chrysogenum ,
p . citrinum ( cct 3281 ), p . expansum , p . p . griseoroseum
และพันธุกรรมชีววิทยาโมเลกุล, 25 , 4 , 489-493 ( 2002 )
สงวนลิขสิทธิ์พ.ศ.โดยบราซิลสังคมของพันธุกรรม. พิมพ์ในการติดต่อสื่อสารทาง
www.sbg.org.br
send บราซิลเพื่อ elza F . de araújo E - mail : ezfa @ mail .
ufv . br .
การวิจัยข้อ
( cct 6241 ) italicum p . p . janthinellum ( cct 3162 )และ
p . purpurogenum ( cct 2008 )ในการศึกษานี้.
วัฒนธรรมหุ้นที่มีการดูแลรักษาเป็นอย่างดีในกลีซ - เออะรินที่ 4 ° C .
อาหาร PETRI มีขนาดกลางน้อยที่สุด( pontecorvo et al .
1953 )แบบมีหลังคาพร้อมด้วย membrane )ซึ่งวุ้นเส้นก็ inoculated
พร้อมด้วย 105 incubated และ conidia สำหรับสองวันที่ 28 ° C ที่
mycelia ได้ถูกลบออกจากวุ้นเส้นสำหรับดีเอ็นเอ ex -
การยึดเกาะ.
ดีเอ็นเอและการแยกตัวออกไปทางตอนใต้
ซึ่งจะช่วยทำให้เสียไปทั้งหมดดีเอ็นเอจาก penicillium สายพันธุ์เป็น ex -
tracted เช่นที่อธิบายไว้ใน specht et al . (ปี 1982 แล้ว) saci สาและและติด
ด้วย ecori . ปฏิกิริยาตอบสนองที่ยังนำมาวิเคราะห์หาบนเจล agarose
0.8%และจะพาท่านไปส่งถึงยังเท้า Duralon หนาแหม่ม -
branes ( stratagene )ตาม sambrook et al . ( 1989 )..
งัดแงะที่ประกอบไปด้วยส่วนท้ายของดีเอ็นเอที่แอมพลิฟายจากดีเอ็นเอเพื่อ -
มังตาลจาก griseoroseum , p .บริสุทธิ์จากเจลและ
radiolabelled ที่พร้อมด้วยการสุ่ม prime-it II ที่ติดฉลากชุด
( stratagene ) แยกส่วนนี้ประกอบด้วยยีน 420 - BP ซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกัน
โดเมนสังเกตเห็นใน endopg จากแบคทีเรียและเชื้อรา filamen -
tous หลายแห่งและถูกสร้างขึ้นตามที่ได้อธิบายไว้โดย
นิยมจาก Cary Grant ผู้มีชื่อเสียงซึ่งเข้าพัก et al . ( 1995 ) hybridization ก็ถูกหามออกไปพักค้างคืน
ที่ 60 ° C ในมาตรฐาน hybridization Buffer ( sambrook et al .
1989 ),ล้างสองครั้งด้วย 2 x SSC , 0.1% เซิร์ฟเวอร์ SDS ,สำหรับ 20 นาที,
และเมื่อมี 1 x SSC , 0.1% เซิร์ฟเวอร์ SDS เป็นเวลา 10 นาทีโดยอัตโนมัติ -
radiographs ก็ทำได้โดย 5 - 1 วันความเสี่ยงของ xomat
K ภาพยนตร์ ( Kodak )ด้วยความรุนแรงขึ้นหน้าจอ.
nucleotide ตามลำดับ ภาค ยานุวัติหมายเลข
เลี้ยงดู embl ฐานข้อมูลและสแกนเพื่อค้นหายีน
PG - การเข้ารหัสจากสายพันธุ์ penicillium เจ็ดยีน
ซึ่งจะช่วยจะเรียกและมีการเปรียบเทียบสำหรับ:
AB 015286 ( p . digitatum ), AF 047713 ( p . expansum ),
AF 085238 และ AF 195790 ( p . griseoroseum ), D 79980 ( p .
janthinellum ), AJ 243521 และ AJ 243522 ( p . olsonii )..
และผลการประชุม genomic องค์กรของ PG - การเข้ารหัสในยีน
penicillium griseoroseumendopg ยีนทั้งหมดที่อธิบายไว้จนกว่าในตอนนี้สำหรับเห็ดพิษ filamen -
tous มีโดเมนซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกันของประมาณ
400 BP จะมีแนวโน้มมีสารตกค้างที่มีความเกี่ยวข้องกับกิจกรรม PG
ที่ 420 BP - ดีเอ็นเอที่สักเท่าไหร่ corre -
sponding โดเมนของ P . griseoroseum ได้เคยถูกใช้เป็นอุปกรณ์ในการวิเคราะห์
ซึ่งจะช่วยทำให้เสียไปทางตอนใต้ของดีเอ็นเอที่ genomic
ซึ่งจะช่วยในการสืบสวนสอบสวนให้การดำรงอยู่ของ endopg ยีนในแบบครอบครัวในที่ยีนของ
นี้เห็ดหูหนู.เศษ hybridizing เพียงไม่กี่คนแม้
เมื่อเป็นไปตามเงื่อนไข(กฎต่ำถูกว่าจ้างในระหว่างขั้นตอน
hybridization (รูปที่ 1 ) อีกครั้งของยีนหลักๆเยื่อ
พร้อมด้วย pgg radiolabelled pgg ที่ 1 และ 2 ที่ได้จัดทำขึ้น
ที่ 65 ° C คลื่นความถี่ที่ตรวจพบส่วนใหญ่เป็นผู้ที่เคยเห็นใน
รูปที่ 1 ยืนยันการมีอยู่ของเพียงสอง endopg
ยีนในยีนเห็ด(ข้อมูลไม่ได้แสดงไว้) exis -
ได้tence exopg ของยีนมีความเป็นไปได้แม้จะไม่ตรวจพบใน
ของเราการศึกษาเนื่องจากการที่ต่ำอย่างเดียวกันกับที่ endopg ยีน.
ดังที่เห็นในรูปที่ 1 เราจะสามารถสรุปได้ว่าที่ pgg 1 และ
pgg 2 ยีนมีอยู่ตัวเดียวในสำเนาที่ p . griseoroseum , GE -
nome เนื่องจากมีข้อจำกัด ภายใน ไม่มีสถานที่สำหรับที่แบบมีห้องน้ำในตัว
zymes ecori , saci ,และ xbai . สำเนาเดียวได้รับการตอบแทน
แสดงให้เห็นถึงการอื่นๆรวมถึงที่ PG ยีน clpg 1 และ
clpg 2 ยีนของ colletotrichum lindemuthianum , PG 1 และ
PG 2 ของ P . olsonii ,และ bcpg 1 ของ botrytis อีลุ้ม( centis et al .
1996 centis et al . 1997 สิบมี et al . 1998 วากเนอร์ et al .
2000 ) นอกจากนั้นโรงแรมยังมีที่ pgg pgg 1 และ 2 จะมีอยู่ใน
หมายเลขชุดเดียวและว่าระดับที่แตกต่างของ ex -
pression รายงานสำหรับยีนเหล่านี้โดย ribon et al . ( 2002 )มี
อาจจะเนื่องจากตำแหน่งยีนในยีน ที่ possibil -
ความว่าจะถูกควบคุมโดยแตกต่างกันประเทศเครือรัฐเอกราช - การแสดงมี
ซึ่งจะช่วยในการสืบสวนสอบสวนในขณะนี้.
เหตุการณ์ที่เกี่ยวข้องของซีเมนส์ยีนในอื่นๆ
penicillium สายพันธุ์ที่มีอยู่ของดีเอ็นเอซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกันลำดับการ
endopg ยีนเป็นการสอบสวนตลอดทั่วทั้งพื้นที่ที่ penicillium
สายพันธุ์ตามต่ำ(กฎ hybridization (รูปที่ 2 )
พันธุ์ไม้ทั้งหมดได้รับการทดสอบแล้วจะมีอย่างน้อยหนึ่ง endopg ยีน แต่ถึงอย่างไรก็ตาม
ส่วนใหญ่แสดงให้เห็นสองคลื่นความถี่ hybridizing อย่างมาก Al -
แม้ว่าจะมีความยาว polymorphism บางอย่างที่อาจ corre -
spond ยีนซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกันกับ ไม่เหมือนกับ penicillium ครอบครัว
ยีนซึ่งประกอบไปด้วยอย่างน้อยห้าสมาชิก PG มี
การตรวจพบในไนเจอร์ aspergillus B .อีลุ้มและ
การวิเคราะห์ 490 ribon et al .
รูปที่ 1 - ทางตอนใต้ของดีเอ็นเอทำให้เสียไปทั้งหมดจาก griseoroseum penicillium
) ดีเอ็นเอเป็นบ้างนิดหน่อย
O griseoroseumandréa B . C . มาริสาแอนนิต้า ribon V queiroz และ elza F . de araújodepartamento
de microbiologia Federal de universidade bioagro viçosa viçosa
มีนัสเชไรส์บราซิล.
ระบบ pectinolytic abstractthe ของ griseoroseum penicillium ได้รับการศึกษาเป็นรุ่นที่ในการสืบสวนสอบสวน
geneorganization เห็ด filamentous ณที่นี่เราแสดงให้เห็นว่ายีน endopolygalacturonase - การเข้ารหัสที่ก่อนหน้านี้ isolatedexist
เป็นชุดเดียวในยีนเห็ดลบการวิเคราะห์ดีเอ็นเอเปิดเผยว่าการมีอยู่ข inother
สายพันธุ์ penicillium แม้ว่าจะเพียงหนึ่งหรือสองยีนก็พบว่าในการคั familyreported ยีน endopg
ตามมาตรฐานสำหรับเห็ด filamentous codon penicillium ของ
ธนาคารมีข้อมูล retrievedfrom เมื่อเทียบกับความยาวของ intron อื่นๆซีเควนซ์ nucleotide และกรดอะมิโนของยีนที่ PG และจำนวนการใช้งาน
ไซต์และการเริ่มต้นซีเควนซ์ของฉันทามติ fortranslation introns ที่อยู่ในตำแหน่งเดียวกันกับที่แม้ว่าจะไม่ม oftheir
nucleotide ซีเควนซ์ของการอนุรักษ์โดดเด่นไปด้วยตามลำดับอื่นๆคล้ายกับที่เห็นใ aspergillus neurospora ยีนและ
penicillium คำหลัก griseoroseum เห็ด filamentous polygalacturonase pectinase องค์กรยีน
ได้รับวันที่ 26 สิงหาคม 2002 ได้รับการยอมรับวันที่ 14 พฤศจิกายน 2002 .
introductionthe penicillium กะกะคือทั่วโลกมีชื่อเสียงในด้าน
ตามมาตรฐานของการผลิตในกระทรวงของตนและ metabolites extracellularenzymes รอง
ของมูลค่าทางการค้าซึ่งรวมถึง thepectinases ใช้ในอุตสาหกรรมน้ำผลไม้ในระหว่าง thestage
ของ maceration ของโถแยกกากผลไม้น้ำผลไม้กลายเป็นน้ำ ordepectinization
( Cullen และ kersten 1992 ที่ sakaguchi et al .
1992 ; grassin และ fauquembergue 1996 )ระบบ
pectinolytic ที่ประกอบไปด้วยหลายแบบมีห้องน้ำในตัว zymes กระจายตัวอยู่ใน 2 กลุ่มหลัก pectinesterases ,
ซึ่งปฏิกริยาที่ de - esterification ของกลุ่ม methoxyl ofpectin
และ depolymerases ที่ cleaveα - 1 ,4 glycosidic ลิงค์
ช่วงวัยโดยหลักด้วยหรือบริษัทข้ามชาติ - การกำจัดเกิดปฏิกิริยา(พวกซา - ไก etal
) 1993 ) polygalacturonases ( PGS )มี depolymerases thatspecifically penicillium
การเข้ารหัสในยีนที่ PG glycosidic พันธบัตรของ
กรด Poly - galacturonic
hydrolyze สายพันธุ์ havebeen
จำลองไว้และลักษณะอันเนื่องจากการใช้นี้ enzymein
ที่ทางชีววิทยาการบำบัดของเสียน้ำมี pectinand ของบทบาทในการติดเชื้อและโรคพืช( ishida et al . 1997
วากเนอร์ et al . 2000 ) ความโดดเด่นที่น่าสนใจของ
ตามมาตรฐานการ isthe PG เชื้อราของสารตกค้างสงวนไว้บางส่วนที่มี recentlybeen
ได้รับการพิสูจน์ว่ามีความจำเป็นสำหรับก vansanten
et al . 1999).
การลอกแบบยีนได้เปิดให้บริการรูปแบบใหม่ใน fungalstrains
ตามมาตรฐานพร้อมด้วยระดับการแสดงออกทางความคิดเห็นเพิ่ areof การแนะนำของตำรวจ -
- - ของยีนของดอกเบี้ยและยีน - การผสมผสานกลยุทธ์ havebeen
ใช้ในการเพิ่มการผลิตโปรตีนเช่น gluco -
amylase , endoglucanase , xylanase ,วัวอีก prochymosin
และมนุษย์ interleukin - 6 ( hata et al . 1991 saarelainen etal
) 1993 sánchez - Fernando Torres et al . 1994 tsuchiya et al . 1994
gouka et al . 1996 )..
กลุ่มของเรายังได้รับการศึกษา griseoroseum penicillium systemof pectinolytic เป็นระบบรุ่นสำหรับยีนหรือ -
ganization ยีนและกฎระเบียบในเห็ด filamentous isto จุดมุ่งหมายของเรา
ได้รับพันธุ์ overproducing ที่สามารถนำไปใช้ใน tx -
อุตสาหกรรมกระเบื้องที่จะ degum ไฟเบอร์จากธรรมชาติสองการเข้ารหัส
endopgs pgg pgg 1 และ 2 มีการจำลองไว้และได้รับแตกต่าง -
entially แสดงความจำนงในการตอบสนองมีขนาดกลางการขยายตัวที่
( ribon et al . 1999 ribon et al . 2002 ) การศึกษามีการ
ซึ่งจะช่วยทำให้ทำการสอบสวนกลไกระดับโมเลกุลที่ทำหน้าที่ควบคุมการแสดงออกของเขา
ณที่นี่เราแสดงองค์กรที่ของยีน
ซึ่งจะช่วยทั้งใน griseoroseum p .และเปรียบเทียบกับองค์กรที่
ของซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกันลำดับดีเอ็นเอในยีนของสายพันธุ์อื่นๆ
penicillium คุณสมบัติบางอย่างอยู่ใน aspergillus
ตามมาตรฐานneurospora ยีนและยังได้เห็นใน penicillium เป็นอีกครั้ง
vealed โดยการเปรียบเทียบที่โครงสร้างของยีน
การเข้ารหัส PG จำลองไว้จนถึงบัดนี้.
วัสดุและวิธีการเชื้อรา inoculum พันธุ์และการผลิต
penicillium charlesii ( cct 4752 ), p . chrysogenum ,
p . citrinum ( cct 3281 ), p . expansum , p . p . griseoroseum
และพันธุกรรมชีววิทยาโมเลกุล, 25 , 4 , 489-493 ( 2002 )
สงวนลิขสิทธิ์พ.ศ.โดยบราซิลสังคมของพันธุกรรม. พิมพ์ในการติดต่อสื่อสารทาง
www.sbg.org.br
send บราซิลเพื่อ elza F . de araújo E - mail : ezfa @ mail .
ufv . br .
การวิจัยข้อ
( cct 6241 ) italicum p . p . janthinellum ( cct 3162 )และ
p . purpurogenum ( cct 2008 )ในการศึกษานี้.
วัฒนธรรมหุ้นที่มีการดูแลรักษาเป็นอย่างดีในกลีซ - เออะรินที่ 4 ° C .
อาหาร PETRI มีขนาดกลางน้อยที่สุด( pontecorvo et al .
1953 )แบบมีหลังคาพร้อมด้วย membrane )ซึ่งวุ้นเส้นก็ inoculated
พร้อมด้วย 105 incubated และ conidia สำหรับสองวันที่ 28 ° C ที่
mycelia ได้ถูกลบออกจากวุ้นเส้นสำหรับดีเอ็นเอ ex -
การยึดเกาะ.
ดีเอ็นเอและการแยกตัวออกไปทางตอนใต้
ซึ่งจะช่วยทำให้เสียไปทั้งหมดดีเอ็นเอจาก penicillium สายพันธุ์เป็น ex -
tracted เช่นที่อธิบายไว้ใน specht et al . (ปี 1982 แล้ว) saci สาและและติด
ด้วย ecori . ปฏิกิริยาตอบสนองที่ยังนำมาวิเคราะห์หาบนเจล agarose
0.8%และจะพาท่านไปส่งถึงยังเท้า Duralon หนาแหม่ม -
branes ( stratagene )ตาม sambrook et al . ( 1989 )..
งัดแงะที่ประกอบไปด้วยส่วนท้ายของดีเอ็นเอที่แอมพลิฟายจากดีเอ็นเอเพื่อ -
มังตาลจาก griseoroseum , p .บริสุทธิ์จากเจลและ
radiolabelled ที่พร้อมด้วยการสุ่ม prime-it II ที่ติดฉลากชุด
( stratagene ) แยกส่วนนี้ประกอบด้วยยีน 420 - BP ซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกัน
โดเมนสังเกตเห็นใน endopg จากแบคทีเรียและเชื้อรา filamen -
tous หลายแห่งและถูกสร้างขึ้นตามที่ได้อธิบายไว้โดย
นิยมจาก Cary Grant ผู้มีชื่อเสียงซึ่งเข้าพัก et al . ( 1995 ) hybridization ก็ถูกหามออกไปพักค้างคืน
ที่ 60 ° C ในมาตรฐาน hybridization Buffer ( sambrook et al .
1989 ),ล้างสองครั้งด้วย 2 x SSC , 0.1% เซิร์ฟเวอร์ SDS ,สำหรับ 20 นาที,
และเมื่อมี 1 x SSC , 0.1% เซิร์ฟเวอร์ SDS เป็นเวลา 10 นาทีโดยอัตโนมัติ -
radiographs ก็ทำได้โดย 5 - 1 วันความเสี่ยงของ xomat
K ภาพยนตร์ ( Kodak )ด้วยความรุนแรงขึ้นหน้าจอ.
nucleotide ตามลำดับ ภาค ยานุวัติหมายเลข
เลี้ยงดู embl ฐานข้อมูลและสแกนเพื่อค้นหายีน
PG - การเข้ารหัสจากสายพันธุ์ penicillium เจ็ดยีน
ซึ่งจะช่วยจะเรียกและมีการเปรียบเทียบสำหรับ:
AB 015286 ( p . digitatum ), AF 047713 ( p . expansum ),
AF 085238 และ AF 195790 ( p . griseoroseum ), D 79980 ( p .
janthinellum ), AJ 243521 และ AJ 243522 ( p . olsonii )..
และผลการประชุม genomic องค์กรของ PG - การเข้ารหัสในยีน
penicillium griseoroseumendopg ยีนทั้งหมดที่อธิบายไว้จนกว่าในตอนนี้สำหรับเห็ดพิษ filamen -
tous มีโดเมนซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกันของประมาณ
400 BP จะมีแนวโน้มมีสารตกค้างที่มีความเกี่ยวข้องกับกิจกรรม PG
ที่ 420 BP - ดีเอ็นเอที่สักเท่าไหร่ corre -
sponding โดเมนของ P . griseoroseum ได้เคยถูกใช้เป็นอุปกรณ์ในการวิเคราะห์
ซึ่งจะช่วยทำให้เสียไปทางตอนใต้ของดีเอ็นเอที่ genomic
ซึ่งจะช่วยในการสืบสวนสอบสวนให้การดำรงอยู่ของ endopg ยีนในแบบครอบครัวในที่ยีนของ
นี้เห็ดหูหนู.เศษ hybridizing เพียงไม่กี่คนแม้
เมื่อเป็นไปตามเงื่อนไข(กฎต่ำถูกว่าจ้างในระหว่างขั้นตอน
hybridization (รูปที่ 1 ) อีกครั้งของยีนหลักๆเยื่อ
พร้อมด้วย pgg radiolabelled pgg ที่ 1 และ 2 ที่ได้จัดทำขึ้น
ที่ 65 ° C คลื่นความถี่ที่ตรวจพบส่วนใหญ่เป็นผู้ที่เคยเห็นใน
รูปที่ 1 ยืนยันการมีอยู่ของเพียงสอง endopg
ยีนในยีนเห็ด(ข้อมูลไม่ได้แสดงไว้) exis -
ได้tence exopg ของยีนมีความเป็นไปได้แม้จะไม่ตรวจพบใน
ของเราการศึกษาเนื่องจากการที่ต่ำอย่างเดียวกันกับที่ endopg ยีน.
ดังที่เห็นในรูปที่ 1 เราจะสามารถสรุปได้ว่าที่ pgg 1 และ
pgg 2 ยีนมีอยู่ตัวเดียวในสำเนาที่ p . griseoroseum , GE -
nome เนื่องจากมีข้อจำกัด ภายใน ไม่มีสถานที่สำหรับที่แบบมีห้องน้ำในตัว
zymes ecori , saci ,และ xbai . สำเนาเดียวได้รับการตอบแทน
แสดงให้เห็นถึงการอื่นๆรวมถึงที่ PG ยีน clpg 1 และ
clpg 2 ยีนของ colletotrichum lindemuthianum , PG 1 และ
PG 2 ของ P . olsonii ,และ bcpg 1 ของ botrytis อีลุ้ม( centis et al .
1996 centis et al . 1997 สิบมี et al . 1998 วากเนอร์ et al .
2000 ) นอกจากนั้นโรงแรมยังมีที่ pgg pgg 1 และ 2 จะมีอยู่ใน
หมายเลขชุดเดียวและว่าระดับที่แตกต่างของ ex -
pression รายงานสำหรับยีนเหล่านี้โดย ribon et al . ( 2002 )มี
อาจจะเนื่องจากตำแหน่งยีนในยีน ที่ possibil -
ความว่าจะถูกควบคุมโดยแตกต่างกันประเทศเครือรัฐเอกราช - การแสดงมี
ซึ่งจะช่วยในการสืบสวนสอบสวนในขณะนี้.
เหตุการณ์ที่เกี่ยวข้องของซีเมนส์ยีนในอื่นๆ
penicillium สายพันธุ์ที่มีอยู่ของดีเอ็นเอซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกันลำดับการ
endopg ยีนเป็นการสอบสวนตลอดทั่วทั้งพื้นที่ที่ penicillium
สายพันธุ์ตามต่ำ(กฎ hybridization (รูปที่ 2 )
พันธุ์ไม้ทั้งหมดได้รับการทดสอบแล้วจะมีอย่างน้อยหนึ่ง endopg ยีน แต่ถึงอย่างไรก็ตาม
ส่วนใหญ่แสดงให้เห็นสองคลื่นความถี่ hybridizing อย่างมาก Al -
แม้ว่าจะมีความยาว polymorphism บางอย่างที่อาจ corre -
spond ยีนซึ่งมีตำแหน่งอย่างเดียวกันกับ ไม่เหมือนกับ penicillium ครอบครัว
ยีนซึ่งประกอบไปด้วยอย่างน้อยห้าสมาชิก PG มี
การตรวจพบในไนเจอร์ aspergillus B .อีลุ้มและ
การวิเคราะห์ 490 ribon et al .
รูปที่ 1 - ทางตอนใต้ของดีเอ็นเอทำให้เสียไปทั้งหมดจาก griseoroseum penicillium
) ดีเอ็นเอเป็นบ้างนิดหน่อย
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ฝ่ายรัฐบาล กับต่อต้านรัฐบาล
- High quality fabrics.
- Oh, excuse me. ATCHOO!
- result
- You also need some rules of logical infe
- พฤกษาคม
- for stability.
- เดี๋ยวไปหา
- ขอบคุณค่ะ
- It has kept a sense of order, and peace
- เดือนพฤกษาคม
- Currently, in the literature there are f
- ทานอะไรหรือยังคะEat what?
- ต้องการใช้ความรู้ด้านการเงินการบัญชี
- marketed as fresh, frozen, or canned pro
- horny could be better
- Using sterilized forceps, transfer cutti
- All right, But what chief would be crazy
- Well done! This is a trick question, rea
- คุณร้องไห้ทำไม
- เนื้อผ้าคุณภาพดี
- ฉันอยากไปเรียนที่ ประเทศอังกฤษ ฉันชื่นชอ
- With respect to network organization,mos
- ฉันต้องการคนรักและคนที่จะดูแลฉัน
