Apoptotic protein detection. Cells

Apoptotic protein detection. Cells were harvested by trypsinization with trypsin/EDTA solution after 24,
48 and 72 hours of BJLM-C8 treatment, and centrifuged at 1500 rpm. Cells were washed twice with 1x
PBS and fixed with ice-cold 70% ethanol for 1 hour at 4oC, then washed twice with 1x PBS and resuspended
in blocking buffer (2% BSA) for 10 minutes, followed by another washing step. Cell pellet was
re-suspended in PBS to a concentration 1 x 107 cells/ml and 100 μl of cells suspension (1 x 106 cells/ml)
were transferred into each sample tube and 20 μl of FITC/PE conjugated antibody were added into tubes
followed by gently mixing. The antibodies used in this experiment are FITC-conjugated Bcl-XL, PEconjugated
Bax and PE-conjugated p53; all were purchased from Santa Cruz Biotechnology, Inc. The
tubes were incubated at RT for 20-30 minutes in the dark. The pellets were washed with 2 ml of 1x PBS
and the supernatant were discarded. Cell pellets were re-suspended in 500 μl of 1x PBS and ready to
proceed for FCM analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การตรวจหาโปรตีน Apoptotic เซลล์เก็บเกี่ยว โดย trypsinization ด้วยโซลูชั่นทริปซิ น/EDTA หลัง 2448 และ 72 ชั่วโมงการรักษา BJLM-C8 และ centrifuged ที่ 1500 rpm เซลล์ถูกล้างสองครั้ง ด้วย 1 xPBS และถาวรกับเอทานอล 70% ฉ่ำที่ 4oC, 1 ชั่วโมง แล้วล้าง ด้วย PBS 1 x ครั้ง และ resuspendedในบล็อกบัฟเฟอร์ (2% บีเอสเอ) 10 นาที ตาม ด้วยขั้นตอนการล้างอีก มีเซลล์เม็ดชั่วคราวอีกครั้งใน PBS ความเข้มข้น 1 x 107 เซลล์/มล.และ μl 100 การระงับเซลล์ (1 x 106 เซลล์/มล.)มีการถ่ายโอนเป็นตัวอย่างแต่ละ ท่อและ μl 20 ของ FITC/PE กลวงแอนติบอดีถูกเพิ่มเข้าไปในท่อตาม ด้วยผสมเบา ๆ แอนตี้ที่ใช้ในการทดลองนี้มี FITC กลวงที่ Bcl-XL, PEconjugatedBax และ p53 PE กลวง ทั้งหมดซื้อจากซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพ Inc.หลอดถูก incubated ที่ RT 20-30 นาทีในมืด เกล็ดถูกล้าง ด้วย 2 ml ของ 1 x PBSและ supernatant ถูกละทิ้ง เซลล์ขี้ถูกเลื่อนออกไปอีกครั้งใน μl 500 ของ 1 x PBS และพร้อมที่จะดำเนินการวิเคราะห์ FCM

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

apoptotic การตรวจสอบโปรตีน เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดย trypsinization กับการแก้ปัญหา trypsin / EDTA หลังจาก 24,
48 และ 72 ชั่วโมงของการรักษา BJLM-C8 และหมุนเหวี่ยงที่ 1,500 รอบต่อนาที เซลล์ที่ถูกล้างครั้งที่สองกับ 1x
พีบีเอสและแก้ไขด้วยเย็นเอทานอล 70% เป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสจากนั้นล้างครั้งที่สองกับ 1x พีบีเอสและ resuspended
ในการป้องกันบัฟเฟอร์ (2% BSA) เป็นเวลา 10 นาทีตามด้วยขั้นตอนการซักผ้าอีก เม็ดเซลล์ใหม่ที่ลอยอยู่ในพีบีเอสจะมีความเข้มข้น 1 x 107 เซลล์ / มล. และ 100 ไมโครลิตรของเซลล์ระงับ (1 x 106 เซลล์ / มล.) ถูกย้ายลงในหลอดแต่ละตัวอย่างและ 20 ไมโครลิตรของ FITC / PE แอนติบอดีผันถูกเพิ่มเข้าไปในท่อตามด้วยการผสมเบา ๆ แอนติบอดีที่ใช้ในการทดลองนี้มี FITC-ผัน Bcl-XL, PEconjugated แบ็กซ์และ p53 PE-ผัน; ทั้งหมดที่ซื้อมาจากซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพอิงค์หลอดที่ถูกบ่ม RT 20-30 นาทีในที่มืด เม็ดถูกล้างด้วย 2 มิลลิลิตร 1x พีบีเอสและสารละลายที่ถูกทิ้ง เม็ดโทรศัพท์มือถือเป็นอีกครั้งที่ลอยอยู่ใน 500 ไมโครลิตรของ 1x พีบีเอสและพร้อมที่จะดำเนินการต่อไปสำหรับการวิเคราะห์ FCM

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจหาโปรตีนในกลุ่มที่มี . เซลล์ที่ถูกเก็บเกี่ยวโดย trypsinization กับทริป / EDTA ทางออกหลัง 24 , 48 และ 72 ชั่วโมง
bjlm-c8 รักษา และระดับที่ 1 , 500 รอบต่อนาที เซลล์มีการล้างสองครั้งกับ 1x
PBS และแก้ไขด้วยเย็น 70% เอทานอล 1 ชั่วโมง ที่ 4oc แล้วล้าง 2 ครั้ง และใช้ PBS resuspended
ในบล็อกบัฟเฟอร์ ( 2 % BSA ) 10 นาที ตามด้วยอีกซักก้าวเซลล์เม็ดคือ
Re แขวนลอยใน PBS เพื่อความเข้มข้น 1 x 107 เซลล์ / มิลลิลิตรและ 100 μชั้นของเซลล์แขวนลอย ( 1 x 106 เซลล์ / มิลลิลิตร )
ถูกย้ายลงในแต่ละหลอดตัวอย่าง 20 μ l fitc / PE และแอนติบอดีที่ถูกเพิ่มลงในหลอด
ตามมา โดยค่อย ๆผสม แอนติบอดีที่ใช้ในการทดลองนี้ fitc และ BCL XL peconjugated
BAX และ PE conjugated โปรตีน p53 ;ทั้งหมดซื้อมาจาก ซานตา ครูซ , เทคโนโลยีชีวภาพ Inc .
ท่ออุณหภูมิ RT 20-30 นาที ในที่มืด เม็ดถูกล้างด้วย 2 ml 1x PBS
และน่านถูกทิ้ง เซลล์แขวนลอยในอัตราใหม่ 500 μ L ของ PBS 1X และพร้อมที่จะดำเนินการวิเคราะห์
FCM