adjusted to 2.8 units/ml by additio

adjusted to 2.8 units/ml by addition of water (665 ml
were required).
Powdered extract of the papaya latex (Type II
latex) was obtained from Sigma Chemical Co., St.
Louis, MO.
Papain from laboratory prepared extract of the
papaya latex. Solid sodium chloride, 0.344 g/ml was
added slowly to a freshly prepared stirred solution of
the extract at pH 5 (see above). After standing 2 hr at
room temperature, the precipitate was collected by
centrifugation at 10,OOOg for 40 min. The precipitate
was dissolved in 900 ml activating buffer (20 mM
EDTA, 10 mM acetate buffer at pH 5.0 to which 0.72
ml of P-mercaptoethanol per 900 ml had been added
prior to use). Insoluble material was removed by
centrifugation at 10,OOOg for 30 min. The clear supernatant
solution of papain containing 2600 units of
papain in 990 ml was subjected to affinity chromatography
on a 4.3~cm diam x 6 cm column of Sepharose
4B containing covalently linked Gly-Gly-Tyr(Bzl)-
Arg, which was prepared and operated according to a
method similar to that of Blumberg et al. (5).
After equilibrating the column by washing it with
150 ml of eluting solution (20 mM EDTA, 5.6 mM
@-mercaptoethanol at pH 4.21), the solution of papain
was applied to the column at a flow rate of 20 ml
min- I. The nonbinding fraction began to come off the
column before the entire sample was applied to the
column. After the entire sample was on the column,
elution was continued with 20 mru EDTA, 5.6 mM
P-mercaptoethanol at pH 4.21 until most of the
nonbinding material was removed from the column as
judged by the absorbance (A,) of the eluent at 280 nm
(approximately 700 ml of eluent was required before
A, < 0.15). After further elution with 200 ml of 20 mM
EDTA, pH 4.21 to remove @-mercaptoethanol and
remaining nonbinding material (A, < 0.05); the
papain was eluted from the column with water. The
yield of pure papain was 976 units in 356 ml or 715 mg
of pure papain as judged from the absorbance of the
solution at 280 nm and a value of czBO of 24.7 (7). The
affinity column used in this work bound approximately
760 mg of papain from the solution of the
sodium chloride precipitate of the papaya latex extract.
It should be noted that the affinity column has
been purposely overloaded in this procedure. The
papain was converted to its Hg-derivative by addition
of a 10% excess of HgCl, to the papain and stored at
5T.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ปรับที่ 2.8 หน่วย/มล. โดยเติมน้ำเปล่า (665 mlที่ถูกต้อง)ผงสารสกัดจากยางมะละกอ (Type IIยาง) ได้รับจาก บริษัทสารเคมี Sigma เซนต์หลุยส์ เดือนเอนไซม์ปาเปนจากห้องปฏิบัติการเตรียมสารสกัดของการน้ำยางมะละกอ แข็งโซเดียมคลอไรด์ 0.344 g/ml เป็นเพิ่มช้าที่เตรียมสดใหม่กวนสารละลายสารสกัดที่ pH 5 (ดูข้างต้น) หลังจากเวลา 2 ชั่วโมงอุณหภูมิห้อง ตะกอนถูกรวบรวมโดยหมุนเหวี่ยงที่ 10, OOOg สำหรับ 40 นาที ตะกอนละลายใน 900 มล.ใช้บัฟเฟอร์ (20 มม.EDTA, 10 มมอะซิเตบัฟเฟอร์ที่ pH 5.0 0.72 ซึ่งมีการเพิ่ม P mercaptoethanol มิลลิลิตรต่อมล.ก่อนที่จะใช้) วัสดุที่ไม่ละลายน้ำถูกเอาออกโดยหมุนเหวี่ยงที่ 10, OOOg 30 นาที Supernatant ชัดเจนการแก้ปัญหาของเอนไซม์ปาเปนที่ประกอบด้วยหน่วย 2600เอนไซม์ปาเปนใน 990 ml ได้ภายใต้การความสัมพันธ์ chromatographyบน 4.3 ~ ซม.ซม. diam x 6 คอลัมน์ของ Sepharose4B ที่มีเชื่อมโยงด้วย Gly-Gly-Tyr(Bzl)-อาร์กิวเมนต์ของค่า ซึ่งถูกจัดทำ และดำเนินการตามวิธีการคล้ายกับที่ของ Blumberg et al. (5)หลังจาก equilibrating คอลัมน์ซักด้วย150 ml eluting โซลูชัน (20 mM EDTA, 5.6 มม.@-mercaptoethanol ที่ pH 4.21), การแก้ปัญหาของเอนไซม์ปาเปนใช้คอลัมน์ที่อัตราการไหล 20 mlนาที - ฉัน เศษส่วน nonbinding เริ่มหลุดออกมาคอลัมน์ก่อนใช้ตัวอย่างทั้งหมดคอลัมน์ หลังจากตัวอย่างทั้งหมดในคอลัมน์แก้ไขต่อชะ mru 20 EDTA, 5.6 มม.P mercaptoethanol ที่ pH ที่ 4.21 จนถึงมากที่สุดของการnonbinding วัสดุถูกเอาออกจากคอลัมน์ตัดสิน โดยค่า (A,) ของ eluent ที่ 280 nm(ประมาณ 700 ml ของ eluent ถูกต้องก่อนA, < 0.15) หลังจากเพิ่มเติมชะกับ 200 มล. 20 มม.EDTA, pH 4.21 การเอา@ mercaptoethanol และวัสดุ nonbinding ที่เหลือ (A, < 0.05); การพาเพอินถูก eluted จากคอลัมน์น้ำ การผลผลิตของเอนไซม์ปาเปนบริสุทธิ์คือ 976 หน่วย 356 ml หรือ 715 มิลลิกรัมของเอนไซม์ปาเปนบริสุทธิ์ขณะที่การตัดสินจากค่าของการโซลูชันที่ 280 nm และค่า czBO ของ 24.7 (7) การผูกความสัมพันธ์ของคอลัมน์ที่ใช้ในงานนี้ประมาณ760 มิลลิกรัมของเอนไซม์ปาเปนจากการแก้ปัญหาของการโซเดียมคลอไรด์ตะกอนของสารสกัดน้ำยางมะละกอควรสังเกตว่า มีคอลัมน์ความสัมพันธ์การจงใจมากเกินไปในขั้นตอนนี้ การพาเพอินถูกแปลงไปเป็น Hg อนุพันธ์ โดยเพิ่ม10% ให้ส่วนเกินของ HgCl การเอนไซม์ปาเปน และเก็บไว้ที่ต.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปรับให้ 2.8 / หน่วยมล. โดยการเติมน้ำ (665 มล.
ถูกต้อง).
สารสกัดจากผงมะละกอน้ำยาง (Type II
น้ำยาง) ที่ได้รับจากซิก Chemical Co. , St.
Louis, มิสซูรี.
ปาเปนสารสกัดจากห้องปฏิบัติการเตรียมของ
มะละกอ น้ำยาง โซเดียมคลอไรด์ที่เป็นของแข็ง 0.344 g / ml ถูก
เพิ่มช้าไปที่การแก้ปัญหากวนปรุงสดใหม่ของ
สารสกัดที่ pH 5 (ดูด้านบน) หลังจากที่ยืน 2 ชั่วโมงที่
อุณหภูมิห้องตะกอนที่ถูกเก็บรวบรวมโดย
การหมุนเหวี่ยงที่ 10, OOOg สำหรับ 40 นาที ตะกอน
ถูกละลายใน 900 มลเปิดใช้งานบัฟเฟอร์ (20 มิลลิเมตร
EDTA, 10 มมอะซิเตตบัฟเฟอร์ที่ pH 5.0 ที่ 0.72
มล P-mercaptoethanol ต่อ 900 มล. ได้รับการเพิ่ม
ก่อนที่จะใช้) วัสดุที่ไม่ละลายน้ำถูกลบออกโดย
การหมุนเหวี่ยงที่ 10, OOOg เป็นเวลา 30 นาที ใส
แก้ปัญหาของปาเปนที่มี 2,600 หน่วย
ปาเปนใน 990 มล. ได้ภายใต้การโครมาความสัมพันธ์
บนซม. เส้นผ่านศูนย์กลาง x 6 ซม. คอลัมน์ 4.3 ~ ของ Sepharose
4B มี covalently เชื่อมโยง Gly-Gly-เทอร์ (Bzl) -
Arg ซึ่งได้รับการเตรียมความพร้อมและ ดำเนินการตาม
วิธีการคล้ายกับที่ของ Blumberg et al, (5).
หลังจากที่เข้าสู่ดุลยภาพคอลัมน์โดยการล้างด้วย
150 มล. ของการแก้ปัญหา eluting (20 มิลลิเมตร EDTA 5.6 มิลลิ
@ -mercaptoethanol ที่ pH 4.21) การแก้ปัญหาของปาเปน
ถูกนำไปใช้กับคอลัมน์ที่อัตราการไหล 20 ml
min- ครั้งที่หนึ่งส่วน nonbinding เริ่มเข้ามาปิด
คอลัมน์ก่อนที่กลุ่มตัวอย่างทั้งหมดถูกนำไปใช้กับ
คอลัมน์ หลังจากที่กลุ่มตัวอย่างทั้งหมดอยู่ในคอลัมน์
elution ได้อย่างต่อเนื่องที่มี 20 EDTA MRU 5.6 มิลลิ
P-mercaptoethanol ที่ pH 4.21 จนถึงที่สุดของ
วัสดุ nonbinding ถูกลบออกจากคอลัมน์เป็น
ตัดสินโดยการดูดกลืนแสง (A) ของตัวชะที่ 280 นาโนเมตร
(ประมาณ 700 มิลลิลิตรชะที่ถูกต้องก่อนที่จะ
A, <0.15) หลังจากชะอีกด้วยขนาด 200 มิลลิลิตร 20 มิลลิเมตร
EDTA, ค่า pH 4.21 เพื่อลบ @ -mercaptoethanol และ
ที่เหลือวัสดุ nonbinding (A, <0.05);
ปาเปนถูกชะจากคอลัมน์ที่มีน้ำ
ผลผลิตของปาเปนบริสุทธิ์เป็น 976 หน่วยใน 356 มล. หรือ 715 มิลลิกรัม
ของปาเปนบริสุทธิ์เป็นตัดสินจากการดูดกลืนแสงของ
การแก้ปัญหาที่ 280 นาโนเมตรและมูลค่าของ czBO 24.7 (7)
คอลัมน์สัมพันธ์ที่ใกล้ชิดนำมาใช้ในงานนี้ถูกผูกไว้ประมาณ
760 มิลลิกรัมของปาเปนจากการแก้ปัญหาของ
ตะกอนโซเดียมคลอไรด์ของสารสกัดจากมะละกอน้ำยาง.
มันควรจะตั้งข้อสังเกตว่าคอลัมน์สัมพันธ์ที่ใกล้ชิดได้
รับมากเกินไปจงใจในขั้นตอนนี้
ปาเปนที่ถูกดัดแปลงของ HG-อนุพันธ์โดยนอกเหนือ
จากส่วนที่เกิน 10% ของ HgCl เพื่อปาเปนและเก็บไว้ที่
5T

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ปรับเป็น 2.8 หน่วย / ml โดยนอกเหนือจากน้ำ ( 665 กรัมถูกต้อง )สารสกัดจากผงมะละกอยาง ( ชนิดที่ 2ยาง ) ได้จาก Sigma Chemical Co . , เซนต์หลุยส์ โมโดยเตรียมสารสกัดจากห้องปฏิบัติการของยางมะละกอ โซเดียมคลอไรด์แข็ง 344 กรัม / มิลลิลิตร คือเพิ่มอย่างช้าๆเพื่อเตรียมสดกวนสารละลายสารสกัดที่ pH 5 ( ดูด้านบน ) หลังจากยืน 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิของห้องที่ถูกรวบรวมโดยปั่นที่ 10 , ooog 40 นาทีที่ละลายใน 900 ml ใช้บัฟเฟอร์ ( 20 มม.EDTA 10 มิลอะซิเตทบัฟเฟอร์ pH 5.0 ที่ 0.72มิลลิลิตรต่อ p-mercaptoethanol 900 มล. ได้รับการเพิ่มก่อนใช้งาน ) วัสดุที่ไม่ละลายน้ำจะถูกลบออกโดยปั่นที่ 10 , ooog 30 นาทีนำที่ชัดเจนโซลูชั่นของปาเปนที่ประกอบด้วย 2 , 600 หน่วยปาเปน 990 ml ถูกยัดเยียดให้ขี้รังแคใน 4.3 ~ cm x 6 เซนติเมตร คอลัมน์ที่เกี่ยวข้องเดียม4B ที่มี covalently เชื่อมโยง GLY GLY tyr ( bzl )ARG ที่เตรียม และดำเนินการตามที่เป็นวิธีการคล้ายกับที่ของ Blumberg et al . ( 5 )หลังจากที่เดือนก่อนคอลัมน์โดยการล้างด้วย150 มิลลิลิตรของสารละลาย hexane ( 20 mM EDTA 5.6 มิลลิเมตร@ - mercaptoethanol pH 4.21 ) , โซลูชันของปาเปนใช้คอลัมน์ในอัตรา 20 มิลลิลิตรมิน - . nonbinding เศษส่วนเริ่มหลุดออกมาคอลัมน์ก่อนตัวอย่างทั้งหมดถูกใช้กับคอลัมน์ หลังจากตัวอย่างทั้งหมดได้ในคอลัมน์ได้มาต่อ 20 Mru EDTA , 5.6 มิลลิเมตรp-mercaptoethanol pH 4.21 จนมากที่สุดของnonbinding วัสดุจะถูกลบออกจากคอลัมน์ตัดสินโดยการดูดกลืนแสง ( A ) ของสารละลายที่ 280 nm( ประมาณ 700 มิลลิลิตรของสารละลายที่ถูกต้องก่อน, < 0.15 ) หลังจากเพิ่มเติม ( 200 มล. 20 มม.EDTA pH 4.21 ลบ @ - mercaptoethanol และที่เหลือ nonbinding วัสดุ ( < 0.05 ) ;ปาเปนตัวอย่าง จากคอลัมน์ กับน้ำ ที่ผลผลิตของปาเปนบริสุทธิ์ 1 หน่วยใน 356 มิลลิลิตรหรือที่มก.ปาเปนบริสุทธิ์ เมื่อพิจารณาจากค่าของโซลูชั่นที่ 280 nm และมูลค่าของ czbo 24.7 ( 7 ) ที่จากคอลัมน์ที่ใช้ในงานนี้ไว้ประมาณ760 มิลลิกรัมของปาเปนจากโซลูชั่นของโซเดียม คลอไรด์ และสารสกัดจากยางมะละกอ .มันควรจะสังเกตว่ามี affinity คอลัมน์จงใจมากเกินไป ในขั้นตอนนี้ ที่โดยเปลี่ยนเป็นอนุพันธ์โดยการเพิ่มของปรอทของ 10% เกิน HgCl , ปาเปนและเก็บรักษาที่5T .