Next we monitored intracellular Ca2

Next we monitored intracellular Ca2+ signals induced by menthol in single TRPM8-HEK293 cells co-expressing scPPX1. Figure 2 (A–C) shows representative experiments, where 50 and 500 μM menthol were added to single cells in the
presence of 1.8 mM Ca2+. Menthol-evoked Ca2+ signals were observed as an increase in the fluorescence intensity ratio of fura-2 (340/380). We found that menthol-induced intracellular Ca2+ signals were significantly inhibited (p≤0.005) in
cells with co-expressed scPPX1 (0.156}0.085, n = 9) in comparison to the controlcells (0.9}0.2, n = 6) (Fig. 2A–C). Further we performed analogous measurements in F-11 neuronal cells that were derived from rat dorsal root ganglion neurons.F-11 cells are used as a model for DRG neurons to study sensory TRP channels in a system resembling their native environment [36]. In our experiments, F-11 cells were transiently transfected with TRPM8 (0.4 μg) alone or together with scPPX1 (0.4 μg), and menthol-induced Ca2+ signals were subsequently analyzed (Fig. 2D–F). Similarly to the HEK cells expression system, we found that menthol-evoked Ca2+-entry was significantly inhibited (p≤0.005) in F-11 cells withco-expressed scPPX1 (0.105}0.029, n = 12) in comparison to the control cellsexpressing TRPM8 channels alone (0.85}0.119, n = 11) (Fig. 2D–F).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต่อไป เราตรวจสอบ intracellular Ca2 + สัญญาณเกิดจากอินเดียในเซลล์ TRPM8 HEK293 เดียวที่ร่วมแสดง scPPX1 รูปที่ 2 (A – C) แสดงพนักงานทดลอง ที่มีเพิ่มเซลล์เดียวในอินเดีย μM 50 และ 500 ใบสถานะของ 1.8 มม. Ca2 + นายสุภัค evoked อินเดีย Ca2 + สัญญาณเป็นการเพิ่มอัตราส่วนความเข้ม fluorescence fura 2 (340/380) เราพบว่า อินเดียเกิด intracellular Ca2 + สัญญาณถูกห้ามอย่างมีนัยสำคัญ (p≤0.005) ในเซลล์ที่ มี scPPX1 ร่วมแสดง (0.156 } 0.085, n = 9) โดย controlcells (0.9 } 0.2, n = 6) (Fig. 2A – C) ต่อไป เราทำประเมินคู่ในเซลล์ neuronal F-11 ที่ได้มาจากหนู dorsal root ganglion neurons F-11 เซลล์ใช้เป็นแบบจำลองสำหรับ DRG neurons ศึกษาช่อง TRP ทางประสาทสัมผัสในระบบเท่าใดสภาพแวดล้อมของท้องถิ่น [36] ในการทดลองของเรา F-11 เซลล์ถูก transiently transfected กับ TRPM8 (0.4 μg) คนเดียว หรือร่วม กับ scPPX1 (0.4 μg), และอินเดียเกิด Ca2 + สัญญาณ มาวิเคราะห์ (Fig. 2D – F) ในทำนองเดียวกัน กับระบบนิพจน์ HEK เซลล์ เราพบว่าอินเดีย evoked Ca2 + -รายการถูกห้ามอย่างมีนัยสำคัญ (p≤0.005) F-11 เซลล์แสดง withco scPPX1 (0.105 } 0.029, n = 12) โดยสถานีควบคุม cellsexpressing TRPM8 ที่อยู่คนเดียว (0.85 } 0.119, n = 11) (Fig. 2D – F)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ต่อไปเราตรวจสอบภายในเซลล์ Ca2 + สัญญาณที่เกิดจากเมนทอลในเซลล์ TRPM8-HEK293 เดียวร่วมแสดงความ scPPX1 รูปที่ 2 (A-C) แสดงให้เห็นการทดลองตัวแทนที่ 50 และ 500
ไมครอนเมนทอลถูกเพิ่มเข้าไปในเซลล์เดียวในการปรากฏตัวของ1.8 มิลลิ Ca2 + เมนทอล-ปรากฏ Ca2 + สัญญาณถูกตั้งข้อสังเกตกับการเพิ่มขึ้นในอัตราส่วนความเข้มของแสง fura-2 (340/380) เราพบว่าเมนทอลที่เกิดขึ้นภายในเซลล์ Ca2 + สัญญาณถูกยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญ (p≤0.005)
ในเซลล์ที่มีผู้ร่วมแสดงความscPPX1 (0.156 0.085 ??}, n = 9) ในการเปรียบเทียบกับ controlcells นี้ (0.9 ??} 0.2 n = 6 ) (รูป. 2A-C) ต่อไปเราดำเนินการวัดคล้ายคลึงใน F-11 เซลล์ที่ได้มาจากรากหลังหนูปมประสาท neurons.F-11 เซลล์ที่ใช้เป็นแบบจำลองสำหรับเซลล์ประสาท DRG เพื่อศึกษาช่อง TRP ประสาทสัมผัสในระบบสภาพแวดล้อมที่คล้ายพื้นเมืองของพวกเขา [36] ในการทดลองของเรา F-11 เซลล์ถูก transfected transiently กับ TRPM8 (0.4 ไมโครกรัม) เพียงอย่างเดียวหรือร่วมกับ scPPX1 (0.4 ไมโครกรัม) และเมนทอลที่เกิด Ca2 + สัญญาณวิเคราะห์ต่อมา (รูป. 2D-F) เช่นเดียวกันกับเซลล์ HEK ระบบการแสดงออกของเราพบว่า Ca2 เมนทอล-ปรากฏ + -entry ถูกยับยั้งอย่างมีนัยสำคัญ (p≤0.005) ในเซลล์ F-11-withco แสดง scPPX1 (0.105 0.029 ??}, n = 12) ในการเปรียบเทียบกับการควบคุม ช่อง cellsexpressing TRPM8 เพียงอย่างเดียว (0.85 ??} 0.119, n = 11) (รูป. 2D-F)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ถัดไปที่เราตรวจสอบสัญญาณที่เกิดจากแคลเซียมภายในเซลล์เดียว เซลล์ จำกัด trpm8-hek293 เมนทอลในการแสดง scppx1 . รูปที่ 2 ( ( C ) แสดงให้เห็นว่าตัวแทนการทดลองที่ 50 และ 500 μ M เมนทอลเพิ่มเซลล์เดียวใน
ที่มีแคลเซียม 1.8 มิลลิเมตร เมนทอล ปรากฏพบเป็นสัญญาณแคลเซียมเพิ่มความเข้มในการต่อ fura-2 ( 340 / 380 )เราพบว่าเมนทอลแคลเซียมภายในเซลล์ ยับยั้ง การส่งสัญญาณอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( p ≤ 0.005 ) ในเซลล์ด้วย
scppx1 ( Co ) โดยอ ? } , n = 9 ) ในการเปรียบเทียบกับ controlcells ( 0.9 0.2 ? } , n = 6 ) ( รูปที่ 2A ( C ) ต่อไปเราทำการวัดเทียบใน f-11 ดเซลล์ที่ได้มาจากหนูหลังปมประสาทรากเซลล์ประสาทf-11 เซลล์ที่ใช้เป็นแบบจำลองสำหรับระบบเซลล์ประสาทเพื่อศึกษาช่องทาง TRP ประสาทสัมผัสในระบบสิ่งแวดล้อมพื้นเมืองคล้าย [ 36 ] ในการทดลองของเรา f-11 เซลล์มีบุคคลหรือสิ่งที่อยู่ชั่วคราว transfected กับ trpm8 ( μ 0.4 กรัม ) คนเดียวหรือร่วมกับ scppx1 ( μ 0.4 กรัม ) และนำสัญญาณที่ได้มา วิเคราะห์เมนทอลแคลเซียม ( รูปที่ 2 ) F ) ในทํานองเดียวกันกับ hek เซลล์แสดงระบบเราพบว่าเมนทอลแคลเซียมดีขึ้นอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( p - รายการ ( ≤ 0.005 ) ใน f-11 เซลล์ withco แสดง scppx1 ( 0.105 ? } 0.029 , n = 12 ) ในการเปรียบเทียบกับการควบคุม cellsexpressing trpm8 สถานีคนเดียว ( 0.85 0.119 ? } , n = 11 ) ( รูปที่ 2

( F )