In this study, we sought to further

In this study, we sought to further understand previously reported instabilities of plasmids
expressing the U. californica acyl-ACP thioesterase (Voelker and Davies, 1994) by varying
the copy number of a codon-optimized version of the gene (BTE) on plasmids having
different origins of replication, in an effort to balance the level of active protein with
possible metabolic burden and product toxicity (Jones et al., 2000). Previous studies
expressing acyl-ACP thioesterases in E. coli have been conducted at 30°C owing to this
putative instability (Feng and Cronan, 2009; Lu et al., 2008). However, no additional studies
have been conducted to determine any rationale for this instability. With this information, E.
coli was engineered to overproduce free fatty acids via three modifications: (1) expression of
a codon-optimized acyl-ACP thioesterase from U. californica (BTE) on a suitable plasmid;
(2) deletion of the fadD gene encoding acetyl-CoA synthetase, the first enzyme involved in
β-oxidation; and (3) over-expression of ACC.
Fatty acids can be converted to useful liquid fuels by chemical catalytic or enzymatic
esterification (Fjerbaek et al., 2008; Kalscheuer et al., 2006; Vasudevan and Briggs, 2008),
putative enzymatic decarboxylation (Banerjee et al., 2002), and catalytic decarboxylation
(Mäki-Arvela et al., 2007). Other strategies utilizing intermediates in fatty acid biosynthesis
to enzymatically produce fatty alcohols and olefins have been reported in the patent
literature but have not been reported in peer-reviewed journals (Keasling et al., patent

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในการศึกษานี้ เราขอเพิ่มเติม เข้าใจ instabilities รายงานก่อนหน้านี้ของ plasmidsแสดงสหรัฐ californica acyl ACP thioesterase (Voelker และเดวิส 1994) โดยแตกต่างกันจำนวนสำเนารุ่นปรับรหัสพันธุกรรมของยีน (BTE) บน plasmids มีที่มาแตกต่างกันของจำลอง ในความพยายามที่จะสมดุลระดับของโปรตีนที่ใช้งานอยู่ด้วยสามารถเผาผลาญภาระและผลิตภัณฑ์ความเป็นพิษ (Jones et al., 2000) การศึกษาก่อนหน้านี้ได้ดำเนินการแสดง acyl ACP thioesterases ใน E. coli ที่ 30° C เนื่องจากนี้ความไม่เสถียรของ putative (เฟิงและ Cronan, 2009 Lu et al., 2008) อย่างไรก็ตาม ไม่ศึกษาเพิ่มเติมได้ดำเนินการกำหนดเหตุผลต่าง ๆ สำหรับความไม่ ด้วยข้อมูลนี้ อีcoli ถูกออกแบบทางวิศวกรรม overproduce กรดไขมันอิสระผ่านการแก้ไขสาม: (1) ค่าของthioesterase ปรับรหัสพันธุกรรม acyl-ACP จากสหรัฐ californica (BTE) ใน plasmid เหมาะ(2) ลบของยีน fadD เข้า acetyl-CoA synthetase เอนไซม์แรกเกี่ยวข้องกับΒออกซิเดชัน และ (3) มากกว่าของบัญชีกรดไขมันสามารถแปลงเป็นเชื้อเพลิงเหลวที่มีประโยชน์จากสารเคมีตัวเร่งปฏิกิริยา หรือเอนไซม์ในระบบesterification (Fjerbaek et al., 2008 Kalscheuer และ al., 2006 Vasudevan และบริกส์ 2008),เอนไซม์ในระบบ putative decarboxylation (Banerjee และ al., 2002), และตัวเร่งปฏิกิริยา decarboxylation(Mäki Arvela et al., 2007) กลยุทธ์อื่น ๆ ที่ใช้ตัวกลางในการสังเคราะห์กรดไขมันenzymatically ผลิต ไขมัน alcohols และโอเลฟินส์ได้ถูกรายงานในสิทธิบัตรวรรณคดี แต่ไม่มีการรายงานในเพื่อนตรวจสอบสมุดรายวัน (Keasling et al. สิทธิบัตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการศึกษาครั้งนี้เราพยายามที่จะเข้าใจรายงานก่อนหน้านี้ไม่เสถียรของพลาสมิดแสดง U. californica acyl-ACP thioesterase (Voelker และเดวีส์, 1994) โดยการเปลี่ยนแปลงจำนวนสำเนาของรุ่นcodon ที่ดีที่สุดของยีน (BTE) บนพลาสมิดที่มีต้นกำเนิดที่แตกต่างกันของการจำลองแบบในความพยายามที่จะรักษาความสมดุลของระดับของโปรตีนที่ใช้งานที่มีภาระการเผาผลาญอาหารที่เป็นไปได้และความเป็นพิษของผลิตภัณฑ์ (โจนส์ et al., 2000) ศึกษาก่อนหน้านี้แสดง thioesterases acyl-ACP ในเชื้อ E. coli ได้รับการดำเนินการที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเนื่องจากนี้ความไม่แน่นอนสมมุติ(ฮและ Cronan 2009;. Lu et al, 2008) อย่างไรก็ตามยังไม่มีการศึกษาเพิ่มเติมที่ได้รับการดำเนินการเพื่อตรวจสอบเหตุผลใด ๆ สำหรับความไม่แน่นอนนี้ ด้วยข้อมูลนี้อีโคไลได้รับการออกแบบมาเพื่อ overproduce กรดไขมันอิสระผ่านสามการปรับเปลี่ยน (1) การแสดงออกของ codon ที่เหมาะสม thioesterase acyl-ACP จาก U. californica (BTE) ในพลาสมิดที่เหมาะสม(2) ลบ fadD ยีน synthetase acetyl-CoA, เอนไซม์แรกที่มีส่วนร่วมในβออกซิเดชัน; . และ (3) มากกว่าการแสดงออกของแม็กกรดไขมันสามารถแปลงเป็นเชื้อเพลิงเหลวที่มีประโยชน์จากสารเคมีตัวเร่งปฏิกิริยาหรือเอนไซม์esterification (Fjerbaek et al, 2008;.. Kalscheuer et al, 2006; Vasudevan และบริกส์ 2008) decarboxylation เอนไซม์สมมุติ (Banerjee et al., 2002) และ decarboxylation ตัวเร่งปฏิกิริยา(Mäki-Arvela et al., 2007) กลยุทธ์อื่น ๆ ที่ใช้ในการสังเคราะห์ตัวกลางกรดไขมันจะผลิตเอนไซม์แอลกอฮอล์ไขมันและโอเลฟินได้รับการรายงานในสิทธิบัตรวรรณกรรมแต่ยังไม่ได้รับรายงานในวารสาร peer-reviewed (Keasling et al., สิทธิบัตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในการศึกษานี้เราพยายามที่จะเข้าใจก่อนหน้านี้รายงานเสถียรภาพของพลาสมิด
แสดง U . californica , ACP thioesterase ( voelker และ เดวีส์ , 1994 ) โดยการเปลี่ยนแปลง
จำนวนสำเนาของรหัสรุ่นที่ดีที่สุดของยีน ( BTE ) บนพลาสมิดที่มีต้นกำเนิดที่แตกต่างกัน
ขนาดใหญ่ ในความพยายามเพื่อความสมดุลระดับของการใช้งาน โปรตีนกับ
ภาระที่เป็นไปได้และผลิตภัณฑ์สลายพิษ ( Jones et al . , 2000 ) การศึกษาก่อนหน้านี้
แสดง , ACP thioesterases ใน E . coli ที่ได้รับการดำเนินการที่ 30 ° C เนื่องจากความไม่แน่นอนการแสดงออกนี้
( ฟงกับโครแนน , 2009 ; Lu et al . , 2008 ) อย่างไรก็ตาม ไม่มีเพิ่มเติมการศึกษา
ได้รับการดำเนินการเพื่อตรวจสอบใดๆเหตุผลสำหรับความไม่มั่นคงนี้ จากข้อมูลนี้ , e .