2.8. NO scavenging assayThe NO scav

2.8. NO scavenging assay

The NO scavenging assay was carried out according to the method reported by Sreejayan et al. [17]. In this assay, 200 μL of 10 mM sodium nitroprusside was mixed with 50–250 µg of the plant extract in 1 mL of water and incubated at room temperature for 150 min. Following incubation, 500 μL of Griess reagent (1% sulfanilamide in 5% orthophosphoric acid) and 0.1% N-(1-napthyl ethylenediaminedihydrochloride) in a ratio of 1:1 were added and incubated for 10 min at room temperature. Ascorbic acid was used as a standard. The absorbance was measured at 546 nm. Controls were run devoid of samples and the inhibition rate is calculated as follows:


View the MathML sourceNOscavengingeffect(Inhibitionrate(%))=O.D(blank)–O.D(sample)O.D(blank)×100%


2.9. Superoxide anion scavenging assay

Superoxide anion scavenging was carried out according to the method described by Liu et al. [18]. In this method, superoxide radicals were generated in 3 mL of Tris HCl buffer (16 mM, pH 8.0) containing 1 mL of nitroblue tetrazolium (NBT; 50 μM) solution and 1 mL of nictonamide adenine dihydrogen salts (NADH; 78 μM) solution and 50–250 µg of the plant extract in 1 mL of water. The reaction started by adding 1 mL of phenazonium methosulphate (PMS) solution (10 μM) to the mixture. The reaction mixture was incubated at 25 °C for 5 min and the absorbance at 560 nm was measured against blank samples. Decreased absorbance of the reaction mixture indicates increased superoxide anion scavenging activity.


View the MathML sourceSuperoxideanionscavengingeffect(Inhibitionrate(%))=O.D(blank)–O.D(sample)O.D(blank)×100%


2.10. Reducing power assessment

Reducing power was carried out using the method reported by Yildirim et al. [19]. One milliliter of the extract and its sub-fractions (final concentration 50–250 μg/mL) were mixed with 2.5 mL of phosphate buffer (0.2 M, pH 6.6) and 2.5 mL of potassium ferricyanide. The mixture was then incubated at 50 °C for 20 min. To this mixture, 2.5 mL of trichloroacetic acid was added, and centrifuged at 3000 rpm for 30 min. Finally, 2.5 mL of the supernatant solution was collected and mixed with 2.5 mL of distilled water and 0.5 mL of ferric chloride, and the absorbance was measured at 700 nm. Ascorbic acid was used as a standard and phosphate buffer as the blank solution.

2.11. HPTLC

For HPTLC fingerprinting analysis, 3, 6 and 9 µL of the plant samples were loaded in pre-coated HPTLC plates [silica gel 60F 254 (E. Merck KGaA) and plate size 5cm×10 cm]. The samples loaded plate was kept in TLC twin trough a developing chamber (after saturated with solvent vapor) with respective mobile phases (flavonoids and phenols), solvent system [chloroform:methanol:formic acid:acetic acid (80:15:2.5:2.5, v/v/v/v)], solvent front position 50.0 mm and volume 10 mL. The developed plate was dried by hot air at 60 °C to evaporate solvents from the plate. The plate was kept in a photodocumentation chamber (CAMAG TLC Scanner 3) and the images were captured at UV 254 nm and UV 366 nm. The retention factor (Rf) values at fingerprint data were recorded by WINCATS software.

2.12. Statistical analysis

Statistical analysis was carried out in triplicates (n=3) and standard error (SE) was calculated. All the data were analyzed using analysis of variance (ANOVA) with the statistical software Prism 5.0 version. The analyses were made with 95% confidence. The significance of differences (p

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8. scavenging assayการไม่มี scavenging assay ได้ดำเนินการตามวิธีการที่รายงานโดย Sreejayan et al. [17] ในการทดสอบนี้ μL 200 ของ nitroprusside โซเดียม 10 มม.ผสมกับ 50 – 250 µg ของสารสกัดจากพืชใน 1 มิลลิลิตรของน้ำ และอุณหภูมิห้อง 150 นาทีได้รับการกก ต่อไปนี้บ่ม 500 μL Griess รีเอเจนต์ (ซัลฟานิลา 1% ไมด์ในกรด orthophosphoric 5%) และ 0.1% N- (1-napthyl ethylenediaminedihydrochloride) ในอัตราส่วน 1:1 ถูกเพิ่ม และรับการกก 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง วิตามินซีถูกใช้เป็นมาตรฐาน ค่าที่ถูกวัดที่ 546 nm ควบคุมถูกเรียกใช้ไร้ตัวอย่าง และคำนวณอัตราการยับยั้งเป็นดังนี้:ดู MathML sourceNOscavengingeffect(Inhibitionrate(%)) =O.D (ว่าง) –O.D (ตัวอย่าง) O.D (ว่าง) × 100%2.9. ซูเปอร์ออกไซด์ไอออน scavenging assayซูเปอร์ออกไซด์ไอออน scavenging ได้ดำเนินการตามวิธีการอธิบายไว้โดย Liu et al. [18] ในวิธีนี้ ซูเปอร์ออกไซด์อนุมูลสร้างขึ้นในบัฟเฟอร์ทริสเรทติ้ง HCl (16 มม. ค่า pH 8.0) 3 มิลลิลิตร 1 มิลลิลิตร ของสารละลาย tetrazolium (NBT; 50 Μm) nitroblue และ 1 มิลลิลิตรของไฮโดรเจนคือ nictonamide ที่ประกอบด้วย 50 – 250 µg ของพืชและการแก้ไขปัญหาเกลือ (NADH μ m 78) สารสกัดใน 1 มิลลิลิตรของน้ำ ปฏิกิริยาเริ่มต้น โดยการเพิ่มส่วนผสม 1 มิลลิลิตรของสารละลาย methosulphate (PMS) phenazonium (10 ไมครอน) ส่วนผสมของปฏิกิริยา incubated ที่ 25 ° C เป็นเวลา 5 นาทีและค่าที่ 560 นาโนเมตรโดยวัดจากตัวอย่างที่ว่างเปล่า ค่าที่ลดลงของส่วนผสมของปฏิกิริยาบ่งชี้กิจกรรม scavenging ไอออนซูเปอร์ออกไซด์เพิ่มขึ้นดู MathML sourceSuperoxideanionscavengingeffect(Inhibitionrate(%)) =O.D (ว่าง) –O.D (ตัวอย่าง) O.D (ว่าง) × 100%2.10. ลดพลังงานประเมินลดพลังงานดำเนินการโดยใช้วิธีการรายงานโดย Yildirim et al. [19] หนึ่งมิลลิเมตรของสารสกัดและเศษส่วนย่อยของ (ความเข้มข้นสุดท้าย 50 – 250 μ/มิลลิลิตร) ถูกผสมกับฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.2 M, pH 6.6) 2.5 mL และโพแทสเซียม ferricyanide 2.5 mL ส่วนผสมแล้ว incubated ที่ 50 ° C 20 นาที การผสมนี้ 2.5 มล.กรด trichloroacetic เพิ่ม และผลิตภัณฑ์ที่ 3000 rpm 30 นาที ในที่สุด รวบรวม และผสมกับ 2.5 mL ของน้ำกลั่น และ 0.5 mL ของคคลอไรด์ 2.5 มล.ของโซลูชัน supernatant และค่าที่ถูกวัดที่ 700 nm วิตามินซีถูกใช้เป็นมาตรฐานและฟอสเฟตบัฟเฟอร์เป็นโซลูชันว่างเปล่า2.11. HPTLCสำหรับ HPTLC วิเคราะห์ลายพิมพ์ µL 3, 6 และ 9 ตัวอย่างพืชถูกโหลดในเคลือบแผ่น HPTLC [ซิลิก้าเจล 60F 254 (E. เมอร์คที่) และจานขนาด 5 cm × 10 cm] ตัวอย่างที่โหลดแผ่นถูกเก็บไว้ในรางคู่ TLC พัฒนาหอค้า (หลังจากที่อิ่มตัว ด้วยไอของตัวทำละลาย) กับเฟสเคลื่อนที่เกี่ยวข้อง (flavonoids และแอมโมเนียม), ระบบตัวทำละลาย [เมทานอล: คลอโรฟอร์ม: กรดฟอร์มิก: กรดอะซิติก (80:15:2.5:2.5, v/v/v/v)], ตัวทำละลายหน้าตำแหน่ง 50.0 มิลลิเมตรและปริมาณ 10 mL แผ่นพัฒนาแก้ไขแห้ง ด้วยลมร้อนที่อุณหภูมิ 60 ° C ระเหยตัวทำละลายจากแผ่น แผ่นถูกเก็บไว้ในห้อง photodocumentation (CAMAG TLC สแกนเนอร์ 3) และภาพถูกยึดที่ UV 254 nm และ UV 366 นาโนเมตร มีบันทึกเก็บข้อมูลปัจจัย (Rf) ค่าที่ข้อมูลลายนิ้วมือ โดยซอฟต์แวร์ WINCATS2.12. สถิติวิเคราะห์การวิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการใน triplicates (n = 3) และข้อผิดพลาดมาตรฐาน (SE) คำนวณ ข้อมูลทั้งหมดได้วิเคราะห์โดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) กับรุ่น 5.0 ปริซึมสถิติซอฟต์แวร์ การวิเคราะห์ที่ทำกับความเชื่อมั่น 95% ความสำคัญของความแตกต่าง (p < 0.05) หมายถึง กำหนดค่าที่ได้จากการทดลอง โดย Tukey ระหว่างทดสอบ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.8 ไม่มีการทดสอบการขับการวิเคราะห์ NO ขับได้ดำเนินการตามวิธีการที่รายงานโดย Sreejayan et al, [17] ในการทดสอบนี้ 200 ไมโครลิตร 10 มิลลิเมตรโซเดียม nitroprusside ผสมกับ 50-250 ไมโครกรัมของสารสกัดจากพืชใน 1 มิลลิลิตรของน้ำและบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 150 นาที ต่อไปนี้การบ่ม 500 ไมโครลิตรของ Griess น้ำยา (1% ซัลฟานิลาไมด์ในกรด orthophosphoric 5%) และ 0.1% N- (1-napthyl ethylenediaminedihydrochloride) ในอัตราส่วน 1: 1 ที่ถูกเพิ่มเข้ามาและบ่มเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิห้อง วิตามินซีที่ใช้เป็นมาตรฐาน ค่าการดูดกลืนวัดที่ 546 นาโนเมตร การควบคุมกำลังวิ่งไร้ตัวอย่างและอัตราการยับยั้งที่มีการคำนวณดังนี้View (Inhibitionrate (%)) = OD (ว่าง) -OD (ตัวอย่าง) OD MathML sourceNOscavengingeffect (ว่าง) × 100% 2.9 superoxide ไอออนขับทดสอบsuperoxide ไอออนขับได้ดำเนินการตามวิธีการอธิบายโดย Liu et al, [18] ในวิธีการนี้อนุมูล superoxide ถูกสร้างขึ้นใน 3 มลทริส HCl บัฟเฟอร์ (16 มิลลิค่า pH 8.0) ที่มี 1 มิลลิลิตรของ nitroblue tetrazolium (NBT 50 ไมครอน) วิธีการแก้ปัญหาและ 1 มิลลิลิตรของเกลือ adenine dihydrogen nictonamide (NADH; 78 ไมครอน) วิธีการแก้ปัญหา และ 50-250 ไมโครกรัมของสารสกัดจากพืชใน 1 มิลลิลิตรของน้ำ ปฏิกิริยาเริ่มต้นโดยการเพิ่ม 1 มิลลิลิตรของ phenazonium methosulphate (PMS) วิธีการแก้ปัญหา (10 ไมครอน) ส่วนผสม ผสมปฏิกิริยาถูกบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีและการดูดกลืนแสงที่ 560 นาโนเมตรวัดจากตัวอย่างของว่างเปล่า การลดลงของการดูดกลืนแสงของผสมปฏิกิริยาแสดงเพิ่มขึ้น superoxide กิจกรรมไอออนไล่. View (Inhibitionrate (%)) = OD (ว่าง) -OD (ตัวอย่าง) OD MathML sourceSuperoxideanionscavengingeffect (ว่าง) × 100% 2.10 ลดการประเมินการใช้พลังงานลดอำนาจได้ดำเนินการโดยใช้วิธีการรายงานโดย Yildirim et al, [19] หนึ่งมิลลิลิตรของสารสกัดและย่อยเศษส่วนของมัน (ความเข้มข้นสุดท้าย 50-250 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) ผสมกับ 2.5 มลฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (0.2 M ค่า pH 6.6) และ 2.5 มิลลิลิตรของโพแทสเซียม ferricyanide ส่วนผสมที่ถูกบ่มแล้วที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที ส่วนผสมนี้ 2.5 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโรถูกเพิ่มเข้ามาและหมุนเหวี่ยงที่ 3000 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 30 นาที สุดท้าย 2.5 มิลลิลิตรของสารละลายใสที่ถูกเก็บรวบรวมและผสมกับ 2.5 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นและ 0.5 มิลลิลิตรเฟอริกคลอไรด์และการดูดกลืนแสงที่ถูกวัดที่ 700 นาโนเมตร วิตามินซีใช้เป็นบัฟเฟอร์มาตรฐานและฟอสเฟตเป็นทางออกที่ว่างเปล่า. 2.11 โตกราฟีสำหรับการวิเคราะห์ลายนิ้วมือโตกราฟี, 3, 6 และ 9 ไมโครลิตรของตัวอย่างพืชที่ถูกโหลดใน Pre-เคลือบแผ่นกราฟี [ซิลิกาเจล 60F 254 (อี Merck KGaA) และขนาดแผ่น 5cm × 10 ซม.] กลุ่มตัวอย่างที่โหลดแผ่นถูกเก็บไว้ใน TLC แฝดรางห้องพัฒนา (หลังจากอิ่มตัวด้วยไอตัวทำละลาย) โดยมีขั้นตอนการมือถือตามลำดับ (flavonoids และฟีนอล) ระบบตัวทำละลาย [คลอโรฟอร์ม: เมทานอล: กรดกรดอะซิติก (80: 15: 2.5: 2.5 , v / V / v / v)] ตัวทำละลายด้านหน้าตำแหน่ง 50.0 มิลลิเมตรและปริมาณ 10 มิลลิลิตร จานพัฒนาถูกทำให้แห้งโดยลมร้อนที่ 60 องศาเซลเซียสจะระเหยตัวทำละลายจากแผ่น แผ่นถูกเก็บไว้ในห้อง photodocumentation (TLC CAMAG สแกนเนอร์ 3) และภาพที่ถูกจับรังสียูวี 254 นาโนเมตรและรังสียูวี 366 นาโนเมตร ปัจจัยการเก็บรักษา (RF) ค่าข้อมูลลายนิ้วมือที่ถูกบันทึกไว้โดยซอฟต์แวร์ WINCATS. 2.12 การวิเคราะห์สถิติการวิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการใน triplicates (n = 3) และข้อผิดพลาดมาตรฐาน (SE) ที่คำนวณได้ ข้อมูลทั้งหมดถูกนำมาวิเคราะห์โดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวน (ANOVA) ด้วยซอฟต์แวร์สถิติ Prism รุ่น 5.0 การวิเคราะห์ที่ถูกสร้างขึ้นด้วยความเชื่อมั่น 95% ความสำคัญของความแตกต่าง (p <0.05) ค่าเฉลี่ยที่ได้จากการทดลองถูกกำหนดโดยการทดสอบ Tukey

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.8 . ไม่มีการ การทดสอบไม่มีการใช้ข้อมูลตามแบบรายงาน โดย sreejayan et al . [ 17 ] ในการทดสอบนี้ μ 200 ลิตรโซเดียมไนโตรปรัสไซด์ 10 มิล มาผสมกับ 50 - 250 µกรัม สารสกัดจากพืชใน 1 มิลลิลิตรของน้ำและบ่มที่อุณหภูมิ 150 นาทีต่อ 1 , 500 μ l griess Reagent ( sulfanilamide 1% 5% ออร์โธฟอสฟอริกแอซิด ) และ 0.1 % N ( 1-napthyl ethylenediaminedihydrochloride ) ในอัตราส่วน 1 : 1 และ 10 นาทีและบ่มที่อุณหภูมิห้อง กรดแอสคอร์บิคถูกใช้เป็นมาตรฐาน นเป็นวัดที่ 546 นาโนเมตร วิ่งไร้การควบคุมของกลุ่มตัวอย่างและการยับยั้งอัตราที่คำนวณได้ดังนี้ :ดู sourcenoscavengingeffect MathML ( inhibitionrate ( % ) = o.d ( ว่าง ) – o.d ( ตัวอย่าง ) o.d ( ว่าง ) × 100 %2.9 . Superoxide anion scavenging assaySuperoxide anion การกระทำตามวิธีการที่อธิบายโดย Liu et al . [ 18 ] ในวิธีการนี้ ซุปเปอร์อนุมูลอิสระถูกสร้างขึ้นใน 3 มิลลิลิตร นอกจากนี้ ไอบัฟเฟอร์ ( 16 มม. , pH 8.0 ) ประกอบด้วย 1 มิลลิลิตร nitroblue tetrazolium ( NBT ; 50 μ M ) โซลูชั่นและ 1 มิลลิลิตร และได nictonamide เกลือ ( NADH ; 78 μ M ) โซลูชั่นและ 50 - 250 µกรัม สารสกัดจากพืชใน 1 มิลลิลิตรของน้ำ ปฏิกิริยาเริ่มต้นด้วยการเพิ่ม 1 มิลลิลิตร phenazonium methosulphate ( PMS ) โซลูชั่น ( 10 μ M ) ส่วนผสม ปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ 25 ° C ผสมเป็นเวลา 5 นาทีและค่าการดูดกลืนแสงที่ 560 nm วัดเทียบกับตัวอย่างที่ว่างเปล่า มีค่าการดูดกลืนแสงของปฏิกิริยาออกไซด์แอนไอออนเพิ่มขึ้น การผสม พบว่ากิจกรรมดู sourcesuperoxideanionscavengingeffect MathML ( inhibitionrate ( % ) = o.d ( ว่าง ) – o.d ( ตัวอย่าง ) o.d ( ว่าง ) × 100 %2.10 . การประเมินพลังงานลดการลดใช้พลังงานได้ โดยใช้วิธีการที่รายงานโดย ยิลดิริม และคณะ [ 19 ] หนึ่งมิลลิลิตรของสารสกัดและเศษส่วนย่อย ( สุดท้ายความเข้มข้น 50 - 250 μกรัม / มิลลิลิตรผสมกับ 2.5 มิลลิลิตร ( 0.2 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.6 ) และ 2.5 กรัมโพแทสเซียมเฟอร์ริกไซนาไนด์ . ส่วนผสมก็บ่มที่อุณหภูมิ 50 องศา C เป็นเวลา 20 นาที ให้ส่วนผสมนี้ 2.5 มิลลิลิตรของกรดไตรคลอโรอะซิติก ได้เพิ่ม และระดับที่ 3 , 000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 30 นาที สุดท้าย 2.5 มิลลิลิตรของสารละลายที่ถูกเก็บรวบรวมและ 2.5 มิลลิลิตรผสมกับน้ำกลั่นและ 0.5 มิลลิลิตร เฟอร์ริค คลอไรด์ และค่าวัดที่ 700 นาโนเมตร กรดแอสคอร์บิคถูกใช้เป็นมาตรฐานและฟอสเฟตบัฟเฟอร์เป็นโซลูชั่นที่ว่างเปล่า2.11 . hptlcสำหรับ hptlc การวิเคราะห์ลายพิมพ์ดีเอ็นเอ 3 , 6 และ 9 µ L ของพืชจำนวนโหลดก่อน hptlc ซิลิกาเจลเคลือบแผ่น [ 60f 254 ( เช่นกระตุ้นการท ) และจานขนาด 5 × 10 ซม. ) ตัวอย่างจานที่ถูกเก็บไว้ใน TLC โหลดคู่รางพัฒนาห้อง ( หลังจากอิ่มตัวด้วยไอตัวทำละลาย ) กับระยะเคลื่อนที่ตามลําดับ ( ฟลาโวนอยด์ และฟีนอล ) , ระบบตัวทำละลายคลอโรฟอร์ม : เมทานอล : [ กรด : กรดน้ำส้ม ( 80:15:2.5:2.5 , V / V / V / V ) ] , ตัวทำละลายตำแหน่งหน้า 50.0 มม. และปริมาณ 10 มล. การพัฒนาแผ่นแห้งด้วยลมร้อนที่อุณหภูมิ 60 องศา C เพื่อระเหยตัวทำละลายจากจาน จานที่ถูกเก็บไว้ใน photodocumentation ( ห้อง camag สแกนเนอร์ ( 3 ) และภาพที่ถูกจับในยูวี 254 nm และ UV 366 นาโนเมตร ปัจจัยการคงอยู่ ( RF ) ที่ค่าข้อมูลลายนิ้วมือที่ถูกบันทึกไว้โดย wincats ซอฟต์แวร์2.12 . สถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูลสถิติที่ใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูล คือ ทำ 3 ซ้ำ ( n = 3 ) และค่าความคลาดเคลื่อนมาตรฐาน ( SE ) คือการคำนวณ ข้อมูลทั้งหมดถูกวิเคราะห์โดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวน ( ANOVA ) ด้วยโปรแกรมสำเร็จรูปทางสถิติปริซึม 5.0 รุ่น การวิเคราะห์ได้ 95% ความเชื่อมั่น ความสำคัญของความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( P < 0.01 ) ระหว่างค่าเฉลี่ยที่ได้จากการทดลองได้ถูกกำหนดโดยทดสอบเป็นราย