The cDNA of the cis-acting CChMVd-H

The cDNA of the cis-acting CChMVd-HHR was PCR-amplified with
Taq DNA polymerase as described in Ztouti et al. [23] using 5′-GTCG
GCACCTGACGTCGGTGTCCTGATGAAGATCCATGAGAGGATCGAAACCTCT
TCTAG-3′ as template, and 5′-TAATACGACTCACTATAGGAAGAGGTCGG
CACCTGACGTCGG-3′ containing the T7 RNA polymerase promoter
(underlined), as sense primer and 5′-CTAGAAGAGGTTTCGATCCTCTC-
3′ as antisense primer. The CChMVd-HHR was synthesized by overnight
in vitro transcription of the PCR products. To avoid cleavage during transcription, a deoxyribonucleotide (5′-CATGGATCTTCATCAGGACACC
GAC-3′), complementary to a part of the HHR [15] was used in the transcription mixture at a concentration of 10 μM. The RNAs obtained were
purified by denaturing (7 M urea) 15% polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) and eluted from the gel overnight in 300 mM sodium
acetate, pH 5.2 at 4 °C. The RNAs were recovered from the solution by
filtration through 0.22 μm diameter micro-filters and precipitation
with ethanol. The purified ribozyme was finally resuspended in water
and stored at − 20 °C.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

CDNA ของ cis ฤทธิ์ CChMVd-HHR ถูกขยาย PCR ด้วยพอลิเมอเรส Taq DNA ตามที่อธิบายไว้ใน Ztouti et al. [23] โดยใช้ 5′-GTCGGCACCTGACGTCGGTGTCCTGATGAAGATCCATGAGAGGATCGAAACCTCTTCTAG-3′ เป็นแม่ และ 5′-TAATACGACTCACTATAGGAAGAGGTCGGCACCTGACGTCGG-3′ ที่ประกอบด้วยโปรโมเตอร์ T7 RNA พอลิเมอเรส(ขีดเส้นใต้), เป็นรู้สึกรองพื้นและ 5′-CTAGAAGAGGTTTCGATCCTCTC -3′ เป็นรองพื้น antisense CChMVd-HHR ถูกสังเคราะห์ โดยหลายการถอดรหัสในหลอดทดลองของผลิตภัณฑ์ PCR เพื่อหลีกเลี่ยงความแตกแยกระหว่างถอด deoxyribonucleotide (5′-CATGGATCTTCATCAGGACACCGAC-3′), การใช้เป็นส่วนหนึ่งของ HHR [15] ได้ถอดส่วนผสมที่ความเข้มข้น 10 Μm RNAs รับได้บริสุทธิ์ โดย denaturing (ยูเรีย 7 M) 15% polyacrylamide เจอิ (หน้า) และ eluted จากเจค้างคืนในโซเดียม 300 มม.อะซิเตท ค่า pH 5.2 ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส RNAs ถูกกู้คืนจากการแก้ปัญหาโดยกรองผ่าน 0.22 ไมครอนเส้นผ่าศูนย์กลางไมโคร-ตัวกรองและฝนด้วยเอทานอล ไรโบไซม์บริสุทธิ์ถูก resuspended ในน้ำสุดท้ายและเก็บไว้ที่− 20 องศาเซลเซียส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ซึ่งแปลของ CIS ที่ออกฤทธิ์ CChMVd-HHR เป็น PCR-amplified กับ
Taq DNA Polymerase ที่อธิบายไว้ใน Ztouti et al, [23] โดยใช้ 5'-GTCG
GCACCTGACGTCGGTGTCCTGATGAAGATCCATGAGAGGATCGAAACCTCT
TCTAG-3 'เป็นแม่แบบและ 5'-TAATACGACTCACTATAGGAAGAGGTCGG
CACCTGACGTCGG-3' ที่มีโพลิเมอร์โปรโมเตอร์ T7 RNA
(ขีดเส้นใต้) เช่นความรู้สึกไพรเมอร์และ 5'-CTAGAAGAGGTTTCGATCCTCTC-
3 'เป็น antisense ไพรเมอร์ CChMVd-HHR ถูกสังเคราะห์โดยค้างคืน
ถอดความในหลอดทดลองของผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ เพื่อหลีกเลี่ยงความแตกแยกระหว่างการถอดความเป็น deoxyribonucleotide (5'-CATGGATCTTCATCAGGACACC
GAC-3 ') ประกอบกับส่วนหนึ่งของ HHR a [15] ถูกใช้ในการถอดรหัสผสมที่ความเข้มข้น 10 ไมครอน RNAs ที่ได้ถูก
ทำให้บริสุทธิ์โดย denaturing (7 M ยูเรีย) 15% polyacrylamide gel electrophoresis (หน้า) และชะจากเจลค้างคืนใน 300 มิลลิเมตรโซเดียม
อะซิเตท, พีเอช 5.2 ที่ 4 ° C RNAs ถูกกู้คืนจากการแก้ปัญหาโดย
การกรองผ่าน 0.22 ไมโครเมตรเส้นผ่าศูนย์กลางไมโครฟิลเตอร์และฝน
กับเอทานอล ribozyme บริสุทธิ์ถูก resuspended ที่สุดในน้ำ
และเก็บไว้ที่ - 20 ° C

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีของ CIS ทำ cchmvd HHR คือ PCR ของตามที่อธิบายไว้ในแท็ก DNA polymerase ztouti et al . [ 23 ] ใช้ 5 ’ - gtcggcacctgacgtcggtgtcctgatgaagatccatgagaggatcgaaacctcttctag-3 นั้นเป็นแม่แบบ และ 5 ’ - taatacgactcactataggaagaggtcggcacctgacgtcgg-3 ได้รับประกอบด้วยการ * * 3 อาร์เอ็นเอพอลิเมอเรส( ขีดเส้นใต้ ) เป็นไพรเมอร์และได้รับ ctagaagaggtttcgatcctctc - 5 - ความรู้สึก3 นั้นเป็น antisense รองพื้น การ cchmvd HHR ถูกสังเคราะห์โดยค้างคืนการถอดความของผลิตภัณฑ์ PCR เพื่อหลีกเลี่ยงความแตกแยกในระหว่างการถอดความ , deoxyribonucleotide ( 5 ’ - catggatcttcatcaggacaccgac-3 School ) ซึ่งเป็นส่วนหนึ่งของ HHR [ 15 ] ถูกใช้ในการถอดรหัสผสมที่ความเข้มข้น 10 μเมตร RNAs ได้บริสุทธิ์โดยี่ ( 7 M ยูเรีย ) 15% polyacrylamide gel electrophoresis ( หน้า ) และตัวอย่างจากเจลค้างคืน 300 มิลลิเมตรโซเดียมอะซิเตท , 5.2 pH 4 ° C RNAs หายจากโซลูชั่นโดยการกรองผ่าน 0.22 เมตรμไมโครกรองและการตกตะกอนกับเอทานอล และเน็ตแวร์ก็ resuspended ในน้ำเก็บไว้ที่อุณหภูมิ− 20 ° C