2. Materials and methods2.1. Collec

2. Materials and methods
2.1. Collection of the plant materials
The leaves of plants, Tinospora cardifolia (Thunb.) Miers, Arum maculatum L. and Andrographis paniculata (Burm. f.) Wall ex Nees were collected from Pharmaceutical Garden, IMS, BHU, Varanasi, India, and submitted in the herbarium of Botanical Survey of India (BSI) under the voucher specimen no. 417577, 11177 and 414228, respectively.
2.2. Test organisms
The bacterial strains of Escherichia coli, ATCC 35218, and Pseu- domonas aeruginosa ATCC 27853, Mycobacterium tuberculosis H37Rv, S. aureus ATCC 25923, local isolates of methicillin resistant S. aureus BHU 011 and Enterococcus faecalis were used in this study. Antibiotic sensitivity pattern of these test or- ganisms were tested by using FDA recommended antibiotics and standard methodology.
2.3. Preparation of extracts from plant leaves
The freshly collected leaves were washed with distilled water and air-dried at 40 C and powdered. The powdered material was extracted with different solvents (Hexane, Methanol and water) by freeze- thaw method. The extracts were collected in sterile bottles, reduced to dryness and stored at 2e8 C until use.
2.4. Antibacterial assays
Qualitative antibacterial assays were performed by agar well diffusion method. Different volumes (50e300 ml) of extracts dissolvedin distilled water (10 mg/ml) were directly applied to
the wells made on surface of MHA containing bacterial lawn. Control wells received only distilled water. Positive control wells received streptomycin (10 mg) except in case of MRSA and E. faecalis, where streptomycin (300 mg) was used as pos- itive control.Afterdiffusion, plateswereincubatedat37Cfor 18 h and zones of growth inhibition were measured. Anti- mycobacterial activity of the plant extracts was tested by In- direct proportion method. The assay was performed on LJ medium with or without the plant extracts (05e20 mg ml1). The minimuminhibitoryconcentration(MIC)wasdetermined by agar dilution method. The concentration of plant extracts used were in the range of 0.25e08 mg ml1 and plates without any extracts were used as control for MIC determination.
2.5. Fractionation of active plant extract and its characterization
75% methanol extracts of A. paniculata leaves were subjected to thin layer chromatography (TLC) for separation of anti- bacterial fraction. Silica gel-60 was used as stationary phase whereas the mobile phase was the mixture of chloroform and methanol (7:3). The bands were visualized in a UV trans- illuminator and the position of bands was marked. The bands were scratched from TLC plates, dissolved in methanol, reduced to dryness, redissolved in deionized water and tested for its antibacterial activity against S. aureus ATCC 25923 by Macrobroth dilution method. The active fraction was sub- jected to various phytochemical tests according to conven- tional methods7 to determine its chemical nature.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 การเก็บวัสดุโรงงานใบของพืช Tinospora cardifolia (Thunb) Miers อารัม maculatum L. และทะลาย (Burm. f) ผนัง ex Nees ถูกรวบรวมไว้จาก สวนยา IMS บุหงา พาราณสี อินเดีย และส่งในหอพรรณไม้ของพฤกษศาสตร์สำรวจของอินเดีย (BSI) ภายใต้สำคัญตัวอย่างหมายเลข 417577, 11177 และ 414228 ตามลำดับ2.2 การทดสอบสิ่งมีชีวิตสายพันธุ์แบคทีเรีย Escherichia coli, ATCC 35218 และ Pseu domonas aeruginosa ATCC 27853 มัยโคแบคทีเรียวัณโรค H37Rv หมอเทศข้างลาย S. ATCC 25923 เครื่องแยกของหมอเทศข้างลาย S. methicillin ทน 011 บุหงาและ Enterococcus faecalis ใช้ในการศึกษานี้ รูปแบบความไวต่อยาปฏิชีวนะของการทดสอบเหล่านี้ หรือ-ganisms ทดสอบโดย FDA แนะนำยาและวิธีมาตรฐาน2.3 การเตรียมสารสกัดจากพืชใบใบไม้สดรวบรวมถูกล้าง ด้วยน้ำกลั่น และ air-dried ที่ 40 C และผง วัสดุผงที่สกัด ด้วยหรือสารทำละลายต่าง ๆ (โพลี เมทานอล และน้ำ) โดยวิธีการแช่แข็ง-thaw สารสกัดได้เก็บไว้ในขวดที่ฆ่าเชื้อ ลดความแห้งกร้าน และเก็บไว้ที่ 2e8 C จนใช้2.4. ยาปฏิชีวนะ assaysAssays ต้านเชื้อแบคทีเรียคุณภาพได้ดำเนินการ โดยวิธี agar แพร่ดี ไดรฟ์ข้อมูลอื่น (มล 50e300) สารสกัดจาก dissolvedin กลั่นน้ำ (10 mg/ml) ได้โดยตรงกับบ่อที่ทำบนพื้นผิวของ MHA ที่ประกอบด้วยสนามหญ้าที่แบคทีเรีย ควบคุมบ่อรับกลั่นน้ำเท่านั้น บ่อควบคุมบวกรับ streptomycin (10 มิลลิกรัม) ยกเว้นกรณี faecalis MRSA และ E. ที่ใช้ streptomycin (300 mg) เป็นตัวควบคุม pos itive Afterdiffusion, plateswereincubatedat37 Cfor 18 h และยับยั้งการเจริญเติบโตของที่วัด ต่อต้าน - mycobacterial กิจกรรมของสารสกัดจากพืชได้รับการทดสอบ โดยวิธีทางตรงในสัดส่วน การทดสอบที่ดำเนินการบนกลาง LJ มี หรือไม่ มีสารสกัดจากพืช (05e20 mg ml 1) Wasdetermined minimuminhibitoryconcentration (ไมค์) โดยวิธี agar เจือจาง ความเข้มข้นของสารสกัดที่ใช้อยู่ในช่วงของมล 0.25e08 mg 1 และแผ่นไม่มีสารสกัดจากพืชที่ใช้เป็นตัวควบคุมสำหรับไมค์กำหนด2.5 การแยกส่วนของสารสกัดจากพืชที่ใช้งานอยู่และสมบัติของสารสกัดเมทานอล 75% ของใบฟ้าทะลายโจรอ.ถูกต้องบางชั้น chromatography (TLC) สำหรับแยกเศษต่อต้านแบคทีเรีย ซิลิก้าเจล-60 ถูกใช้เป็นประจำระยะ โดยระยะการเคลื่อนผสมระหว่างคลอโรฟอร์มและเมทานอล (7:3) วงดนตรีที่มี visualized ในทรานส์-illuminator ที่ UV และตำแหน่งของวงถูกทำเครื่องหมาย วงดนตรีที่มีรอยขีดข่วนจากแผ่น TLC ละลายในเมทานอล ลดความแห้งกร้าน redissolved ในน้ำ deionized และทดสอบสำหรับกิจกรรมของสารต้านเชื้อแบคทีเรียกับหมอเทศข้างลาย S. ATCC 25923 โดยวิธีเจือจาง Macrobroth ส่วนงานย่อย jected เพื่อทดสอบสารพฤกษเคมีต่าง ๆ ตาม conven-tional methods7 เพื่อตรวจสอบลักษณะทางเคมีได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 คอลเลกชันของวัสดุพืชใบของพืช Tinospora cardifolia (Thunb.) Miers, Arum maculatum ลิตรและฟ้าทะลายโจร (Burm. f.) กำแพงอดีตโจรที่ถูกเก็บรวบรวมจากยาการ์เด้น IMS, BHU พารา ณ สีอินเดียและส่ง ในหอพรรณไม้สวนพฤกษศาสตร์ของการสำรวจของอินเดีย (BSI) ภายใต้ตัวอย่างบัตรกำนัลไม่มี
417,577, 11,177 และ 414,228 ตามลำดับ.
2.2 การทดสอบมีชีวิตสายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรียเชื้อ Escherichia coli, ATCC 35218 และ Pseu- domonas aeruginosa ATCC 27853, เชื้อวัณโรค H37Rv, aureus ATCC เอส 25923, สายพันธุ์ท้องถิ่นของ methicillin ทนเชื้อ S. aureus BHU 011 Enterococcus faecalis และถูกนำมาใช้ในการศึกษานี้
รูปแบบความไวของยาปฏิชีวนะ ganisms ทดสอบเป็นสีเหล่านี้ได้รับการทดสอบโดยองค์การอาหารและยาแนะนำการใช้ยาปฏิชีวนะและวิธีการมาตรฐาน.
2.3 การเตรียมความพร้อมของสารสกัดจากพืชใบใบสดที่เก็บรวบรวมได้ถูกล้างด้วยน้ำกลั่นและอากาศแห้งที่ 40 องศาเซลเซียสและผง
วัสดุผงถูกสกัดด้วยตัวทำละลายที่แตกต่างกัน (Hexane, เมทานอลและน้ำ) โดยวิธีการละลาย freeze- สารสกัดถูกเก็บไว้ในขวดผ่านการฆ่าเชื้อลดความแห้งกร้านและเก็บไว้ที่ 2e8 องศาเซลเซียสจนการใช้งาน.
2.4 การตรวจแบคทีเรียตรวจต้านเชื้อแบคทีเรียคุณภาพดำเนินการโดยวิธีการแพร่กระจายวุ้นดี
ปริมาณที่แตกต่างกัน (50e300 มล.) สารสกัดจาก dissolvedin น้ำกลั่น (10 mg / ml)
ถูกนำไปใช้โดยตรงไปยังหลุมที่ทำบนพื้นผิวของสนามหญ้าเลดที่มีเชื้อแบคทีเรีย หลุมควบคุมที่ได้รับน้ำกลั่นเท่านั้น หลุมควบคุมบวกได้รับ streptomycin (10 มก.) ยกเว้นในกรณีที่เชื้อ MRSA และ E. faecalis ที่ streptomycin (300 มก.) ถูกใช้เป็น pos- itive control.Afterdiffusion, plateswereincubatedat37? Cfor 18 ชั่วโมงและโซนของการยับยั้งการเจริญวัด กิจกรรมป้องกันเชื้อของสารสกัดจากพืชที่ได้รับการทดสอบโดยวิธี In-สัดส่วนโดยตรง การทดสอบที่ได้รับการดำเนินการในกลาง LJ มีหรือไม่มีสารสกัดจากพืช (05e20 มล. 1 มก.) minimuminhibitoryconcentration (MIC) wasdetermined โดยวิธีเจือจางวุ้น ความเข้มข้นของสารสกัดจากพืชที่ใช้อยู่ในช่วงของ 0.25e08 มก. มล. หรือไม่ 1 และแผ่นโดยไม่ต้องสารสกัดใด ๆ ที่ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมสำหรับการกำหนด MIC.
2.5 แยกของสารสกัดจากพืชที่ใช้งานและลักษณะของ
75% ของสารสกัดจากเมทานอลเอใบฟ้าทะลายโจรถูกยัดเยียดให้ชั้นบางโค (TLC) สำหรับการแยกส่วนการต่อต้านแบคทีเรีย ซิลิก้าเจล 60 ถูกใช้เป็นเฟสขณะที่เฟสเคลื่อนที่เป็นส่วนผสมของคลอโรฟอร์มและเมทานอล (7: 3) วงได้รับการมองเห็นในไฟทรานส์รังสียูวีและตำแหน่งของวงดนตรีที่ได้รับการทำเครื่องหมาย วงที่ได้รับจากรอยขีดข่วนแผ่น TLC, ละลายในเมทานอลลดความแห้งกร้าน, redissolved ในน้ำปราศจากไอออนและทดสอบฤทธิ์ต้านแบคทีเรียสำหรับต่อต้านเชื้อ S. aureus ATCC 25923 โดยวิธีเจือจาง Macrobroth ส่วนการใช้งานที่ถูกย่อย jected ทดสอบพฤกษเคมีต่างๆตามอนุสัญญาระหว่างประเทศ methods7 เพื่อตรวจสอบลักษณะทางเคมีของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . คอลเลกชันของพืช
ใบของพืช tinospora cardifolia ( Thunb . ) Miers อารัม maculatum , L . และฟ้าทะลายโจร ( Burm . F . ) Wall ex Nees เก็บตัวยาสวนตัว BHU เมืองพาราณสี ประเทศอินเดีย , , , และแสดงความคิดเห็นในการสำรวจพืชสมุนไพรของอินเดีย ( BSI ) ภายใต้คูปองตัวอย่างที่ไม่ 417577 11177 414228 , และ ตามลำดับ
2.2 . สิ่งมีชีวิตทดสอบ
สายพันธุ์ของเชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli ATCC 35218 และ pseu - domonas aeruginosa ATCC นำน้ำมันระเหยเชื้อวัณโรค , h37rv , S . aureus ATCC 25923 , ท้องถิ่นเชื้อ S . aureus เมทิซิลลินทนภู 011 เอ็นเทโรค็อกคัส faecalis และใช้แบบสอบถามแบบแผนความไวของการทดสอบยาปฏิชีวนะเหล่านี้หรือ - ganisms ทดสอบโดยใช้ FDA แนะนำยาปฏิชีวนะและวิธีการมาตรฐาน
2.3 การเตรียมสารสกัดจากใบพืช
เก็บใบสดล้างด้วยน้ำกลั่นและอากาศแห้งที่อุณหภูมิ 40 องศาเซลเซียส และ  ผง วัสดุผงที่สกัดด้วยตัวทำละลายที่แตกต่างกัน ( เฮกเซน เมทานอลและน้ำแข็ง - ละลายโดยวิธีสารสกัดถูกเก็บในขวดฆ่าเชื้อลดความแห้งกร้านและเก็บไว้ที่ 2e8 จนใช้  C .
2.4 . แบคทีเรียหรือแบคทีเรีย
คุณภาพใช้ได้ด้วยวิธี agar diffusion . ปริมาณที่แตกต่างกัน ( 50e300 ml ) สารสกัดจาก dissolvedin น้ำกลั่น ( 10 mg / ml ) มาใช้โดยตรง

บ่อทำบนพื้นผิวของสนามหญ้า MHA ที่มีเชื้อแบคทีเรียบ่อควบคุมที่ได้รับน้ำกลั่น บ่อควบคุมบวกได้รับยารักษา ( 10 mg ) ยกเว้นกรณีของ MRSA และ E . faecalis ที่สเตร็ปโตมัยซิน ( 300 มิลลิกรัม ) ใช้ POS - ควบคุม itive . afterdiffusion plateswereincubatedat37 ,  C เป็นเวลา 18 ชั่วโมง และโซนของการยับยั้งการเจริญเติบโต คือ วัด ต่อต้าน - เวลากิจกรรมของสารสกัดพืชทดสอบโดยวิธีสัดส่วนโดยตรง( คือใช้แอลเจ กลางมี หรือ ไม่มี สารสกัดจากพืช ( 05e20 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร  1 ) การพิจารณา minimuminhibitoryconcentration ( MIC ) โดยวิธี agar dilution . ความเข้มข้นของสารสกัดจากพืชที่ใช้ในช่วง 0.25e08 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร และ  1 แผ่น ไม่มีสารสกัดที่ใช้ควบคุมกำหนดไมค์
2.5 การใช้สารสกัดจากพืชและคุณสมบัติ
สารสกัดเมทานอล 75% ของ ฟ้าทะลายโจร ใบถูก Thin layer chromatography ( TLC ) สำหรับการแยกเศษส่วน ต่อต้านแบคทีเรีย ซิลิกา gel-60 ถูกใช้เป็นเครื่องเขียนเฟสและเฟสเคลื่อนที่เป็นส่วนผสมของคลอโรฟอร์ม และเมทานอล ( 7 : 3 ) วงดนตรี ) มองเห็นในทรานส์ - ไฟ UV และตำแหน่งของแถบเป็นเครื่องหมาย วงดนตรีที่ถูกข่วนจาก TLC แผ่นละลายในเมทานอล ลดการแห้งในน้ำ redissolved คล้ายเนื้อเยื่อประสานและทดสอบของ S . aureus ATCC 25923 กิจกรรมต่อต้านแบคทีเรียโดยวิธีเจือจาง macrobroth . ส่วนที่ใช้เป็น sub - jected การทดสอบพฤกษเคมีต่าง ๆ ตาม conven - tional methods7 ศึกษาธรรมชาติทางเคมีของ

.