recovery (data not shown). Signific

recovery (data not shown). Signi
fi
cant time savings can be achieved by
chaining eight sets of two microplates in different steps of the protocol,
using multichannel repetition pipettes and by storing strain collections
in microplates. DNA from 16 microwell plates (1536 yeast isolates) can
be obtained in one working day, which is an eight-fold increase com-
pared to the original method (
Lopez et al., 2001
). As shown in
Fig. 2
,
the average DNA concentrations of quadruplicate extractions from 12
S. cerevisiae
strains and 12 other non-
Saccharomyces
species grown in
microplates were 20 ng
μ
L
−
1
(ranging between 20 and 40 ng
μ
L
−
1
)
and 50 ng
μ
L
−
1
(ranging between 10 and 140 ng
μ
L
−
1
) respectively,
suitable for PCR-ampli
fi
cation without the need for further dilution.
When higher DNA concentrations are required, the protocol can be
modi
fi
ed by increasing overnight the culture volumes and decreasing
the volume of diluted TE buffer for DNA resuspension. For cells grown
in microtubes, DNA concentration values were inverted, since the aver-
age concentration of
S. cerevisiae
strainswashigher (830 ng
μ
L
−
1
,rang-
ing between 670 and 1110 ng
μ
L
−
1
)comparedtotheremainingyeast
species (430 ng
μ
L
−
1
ranging between 100 and 1010 ng
μ
L
−
1
). Values
obtained for the A260/A280 ratio were in the range of 1.8
–
2.2, indepen-
dent of the extraction scale or species (data not shown). To evaluate
I.
Overnight culture

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กู้คืน (ข้อมูลไม่แสดง) Signiไร้สายไม่ประหยัดเวลาสามารถทำได้โดยการกำหนดสายงาน 8 ชุดสอง microplates ในขั้นตอนต่าง ๆ ของโพรโทคอลใช้ pipettes แบบทำซ้ำ และจัดเก็บต้องใช้คอลเลกชันใน microplates ดีเอ็นเอจากแผ่น microwell 16 (แยกยีสต์ 1536) สามารถได้รับในหนึ่งวันทำการ ซึ่งเป็นการเพิ่ม eight-fold com -pared การ(วิธีการเดิมโลเปซและ al., 2001). ดังแสดงในFig. 2,ความเข้มข้นดีเอ็นเอเฉลี่ยของสกัด quadruplicate 12S. cerevisiaeสายพันธุ์และ 12 อื่น ๆ ใช่Saccharomycesพันธุ์ที่ปลูกในmicroplates มี 20 ngΜL−1(ช่วงระหว่าง 20 และ 40 ngΜL−1)และ 50 ngΜL−1(ช่วงระหว่าง 10 และ 140 ngΜL−1) ตามลำดับเหมาะสำหรับ PCR ampliไร้สายcation โดยไม่ต้องเจือจางเพิ่มเติมเมื่อความเข้มข้นของดีเอ็นเอสูงที่จำเป็น โพรโทคอลสามารถmodiไร้สายed โดยค้างคืนการเพิ่มไดรฟ์ข้อมูลวัฒนธรรม และลดปริมาตรของบัฟเฟอร์ TE แตกออกในการ resuspension ตะกอนดีเอ็นเอ สำหรับเซลล์ที่เติบโตขึ้นใน microtubes ค่าความเข้มข้นของดีเอ็นเอได้กลับ ตั้งแต่ aver-อายุความเข้มข้นของS. cerevisiaestrainswashigher (830 ngΜL−1ราง-กำลังระหว่าง 670 และ 1110 ngΜL−1) comparedtotheremainingyeastสปีชีส์ (430 ngΜL−1ระหว่าง 1010 และ 100 ngΜL−1). ค่ารับสำหรับอัตรา A260/A280 อยู่ในช่วง 1.8–2.2, indepen-เด็นท์แยกขนาดหรือชนิด (ข้อมูลไม่แสดง) ในการประเมินฉันวัฒนธรรมที่ค้างคืน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การกู้คืน (ไม่ได้แสดงข้อมูล) นัยสำคัญไฟประหยัดเวลาลาดเทสามารถทำได้โดยการผูกมัดแปดชุดสองmicroplates ในขั้นตอนที่แตกต่างกันของโปรโตคอลที่ใช้ปิเปตซ้ำหลายช่องและคอลเลกชันโดยการจัดเก็บสายพันธุ์ในmicroplates ดีเอ็นเอจาก 16 แผ่น microwell (1536 แยกยีสต์) สามารถรับได้ในหนึ่งวันทำการซึ่งเป็นเพิ่มขึ้นแปดเท่าสั่งเทียบกับวิธีการเดิม(โลเปซ, et al., 2001) ดังแสดงในรูปที่ 2, ความเข้มข้นเฉลี่ยของดีเอ็นเอสกัด quadruplicate ตั้งแต่วันที่ 12 เอส cerevisiae สายพันธุ์ 12 และอื่น ๆ ที่ไม่ใช่Saccharomyces สายพันธุ์ที่ปลูกในmicroplates 20 นาโนกรัมμ L - 1 (ระหว่าง 20 และ 40 ng μ L - 1) และ 50 ng μ L - 1 (ระหว่าง 10 และ 140 ng μ L - 1) ตามลำดับเหมาะสำหรับ PCR-ampli สายไอออนบวกโดยไม่จำเป็นต้องลดสัดส่วนต่อไป. เมื่อความเข้มข้นของดีเอ็นเอที่สูงขึ้นจะต้องโปรโตคอลสามารถModi สายเอ็ดโดยการเพิ่มปริมาณการค้างคืนวัฒนธรรมและการลดปริมาณการปรับลดบัฟเฟอร์TE สำหรับ resuspension ดีเอ็นเอ สำหรับเซลล์ที่ปลูกใน Microtubes ค่าความเข้มข้นของดีเอ็นเอถูกคว่ำตั้งแต่ aver- เข้มข้นอายุเอส cerevisiae strainswashigher (830 ng μ L - 1, rang- ไอเอ็นจีระหว่าง 670 และ 1110 นาโนμ L - 1) comparedtotheremainingyeast ชนิด (430 ng μ L - 1 ระหว่าง 100 และ 1010 นาโนμ L - 1) ค่าที่ได้รับสำหรับอัตราส่วน A260 / A280 อยู่ในช่วง 1.8 - 2.2 อิสระบุ๋มจากขนาดหรือการสกัดสายพันธุ์(ไม่ได้แสดงข้อมูล) การประเมินครั้งที่หนึ่งวัฒนธรรมค้างคืน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การกู้คืนข้อมูลไม่แสดง ) signiกง .สามารถประหยัดเวลาสามารถทำได้โดยแบบแปดชุดสอง microplates ในขั้นตอนที่แตกต่างกันของโปรโตคอลการใช้ซ้ำและการจัดเก็บคอลเลกชัน Pipettes Multichannel โดยความเครียดใน microplates . ดีเอ็นเอจาก microwell 16 แผ่น ( 1536 ยีสต์ไอโซเลท )ได้รับในหนึ่งวัน ซึ่งเป็นแปดพับเพิ่มข่าววิธีการเดิม ( สบายโลเปซ et al . , 2001) ตามที่แสดงในรูปที่ 2,ค่าเฉลี่ยความเข้มข้นของประกอบด้วยสี่ส่วนการสกัดดีเอ็นเอจาก 12S . cerevisiaeสายพันธุ์และ 12 - ไม่อื่น ๆกรดชนิดที่ปลูกในmicroplates 20 ของμlบริษัท เวสเทิร์น1( ช่วงระหว่าง 20 และ 40 ของμlบริษัท เวสเทิร์น1)และ 50 ของμlบริษัท เวสเทิร์น1( ช่วงระหว่าง 10 และ 140 นาโนμlบริษัท เวสเทิร์น1) ตามลำดับเหมาะสำหรับ ampli ดีเอ็นเอกง .การโดยไม่ต้องเจือจางเพิ่มเติมเมื่อความเข้มข้นสูงขึ้นเป็นดีเอ็นเอ , โปรโตคอลสามารถสมัครงานกง .เอ็ด โดยการเพิ่มปริมาณและลดคืนกระทรวงวัฒนธรรมปริมาณที่เจือจาง TE บัฟเฟอร์สำหรับ resuspension ดีเอ็นเอ สำหรับเซลล์โตใน microtubes ปริมาณดีเอ็นเอมีค่าคว่ำตั้งแต่ยืนยัน -อายุ ความเข้มข้นของสารละลายS . cerevisiaestrainswashigher ( 830 กรัมμlบริษัท เวสเทิร์น1รัง -ไอเอ็นจีระหว่าง 670 และ 1110 เทคμlบริษัท เวสเทิร์น1) comparedtotheremainingyeastชนิด ( 430 ของμlบริษัท เวสเทิร์น1ในช่วงระหว่าง 100 กว่าของμlบริษัท เวสเทิร์น1) ค่าส่วนอัตราส่วน a260 / a280 ในช่วง 1.8จำกัด2.2 indepen -รอยบุ๋มของการสกัดแบบชนิดหรือ ( ข้อมูลไม่แสดง ) เพื่อประเมินฉันวัฒนธรรมค้างคืน