HIV-protease assay kits (Bachem Fei

HIV-protease assay kits (Bachem Feinchemikalien AG, Bubendorf,
Switzerland) were used. Twenty five microliter of HIV-protease
assay buffer (50 mM NaOAc, pH 4.9) containing 2.5 lg of the
substrate [His-Lys-Ala-Arg-Val-Leu-(pNO2-Phe)-Glu-Ala-Nle-Ser-
NH2] was mixed with 2 ll of a compound solution (using DMSO
as a solvent), then 8 ll of recHIV-protease (0.01 mg/ml) was added.
The reaction mixture was incubated for 30 min at 37 C and then
terminated by addition of 3.0 ll of 10% trifluoroacetic acid (TFA).
The hydrolysate (pNO2-Phe-Glu-Ala-Nle-Ser-NH2) and the remaining
substrate were quantitatively analyzed by reversed-phase
HPLC. HPLC conditions: column, COSMOSIL Packed 5C18-MS-II,
4.6  150 mm NACALAI TESQUE.INC. Kyoto, Japan; solvent, gradient
CH3CN: H2O (containing 0.1% TFA) (20–40%); flow rate,
1.0 ml/min; detector, UV 208 nm. The substrate and the hydrolysate
were eluted at 8.1 and 3.5 min, respectively. The HIV-protease
inhibitory activity of a compound was calculated as follows:
% inhibition ¼ ðAcontrol  AsampleÞ  100=Acontrol
where A is relative peak area of the hydrolysate.
Oleanolic acid was used as a positive control, its IC50 being
24.8 lg/ml.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชุดทดสอบรติเอสเอชไอวี (Bachem Feinchemikalien AG, Bubendorfสวิตเซอร์แลนด์) ใช้ ไมโครลิตรยี่สิบห้ารติเอสเอชไอวีassay lg 2.5 มีบัฟเฟอร์ (50 mM NaOAc, pH 4.9) ของการพื้นผิว [His-Lys-Ala-Arg-Val-Leu-(pNO2-Phe)-Glu-Ala-Nle-Ser-NH2] ถูกผสมกับ 2 จะแก้ไขปัญหาผสม (ใช้ DMSOเป็นเป็นตัวทำละลาย), 8 แล้วจะ recHIV รติเอส (0.01 mg/ml) ถูกเพิ่มเข้ามาผสมปฏิกิริยาถูก incubated ใน 30 นาทีที่ 37 C แล้วยกเลิก โดยเพิ่ม 3.0 จะ 10% trifluoroacetic กรด (TFA)ด้วย (pNO2-Phe-Glu-Ala-Nle-Ser-NH2) และเหลือพื้นผิวถูก quantitatively วิเคราะห์ตามขั้นตอนย้อนกลับHPLC HPLC เงื่อนไข: คอลัมน์ Packed COSMOSIL 5C 18-MS-II4.6 150 มม. NACALAI TESQUE.INC. เกียวโต ญี่ปุ่น ตัวทำละลาย ไล่ระดับสีCH3CN: H2O (ประกอบด้วย 0.1% TFA) (20-40%), อัตราการไหล1.0 ml/min เครื่องตรวจจับ UV 208 nm กับพื้นผิวและด้วยการมี eluted ที่ 8.1 และ 3.5 นาที ตามลำดับ รติเอสเอชไอวีลิปกลอสไขกิจกรรมของสารประกอบถูกคำนวณดังนี้:ðAcontrol ยับยั้ง¼% AsampleÞ 100 = Acontrolซึ่งเป็นพื้นที่สูงสุดสัมพัทธ์ด้วยใช้เป็นตัวควบคุมบวก กรด Oleanolic IC50 มันอยู่lg 24.8/ml

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เอชไอวีโปรติเอสชุดทดสอบ (BACHEM Feinchemikalien AG, ลีสตาล,
วิตเซอร์แลนด์) ถูกนำมาใช้ ยี่สิบห้าไมโครลิตรของเอชไอวีโปรติเอส
บัฟเฟอร์ทดสอบ (50 มิลลิ NaOAc ค่า pH 4.9) ที่มี 2.5 LG ของ
พื้นผิว [ของเขาลี-Ala-Arg-Val-Leu- (pNO2 เพ) -Glu-Ala-Nle-Ser-
NH2] ผสมกับ 2 LL ของการแก้ปัญหาสาร (ใช้ DMSO
เป็นตัวทำละลาย) แล้ว 8 LL ของ recHIV-โปรติเอส (0.01 mg / ml) ถูกเพิ่มเข้ามา.
ผสมปฏิกิริยาถูกบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสและจากนั้น
สิ้นสุดลง โดยนอกเหนือจาก 3.0 LL 10% กรด Trifluoroacetic (TFA).
ไฮโดรไล (pNO2 เพ-Glu-Ala-Nle-Ser-NH2) และส่วนที่เหลือ
พื้นผิวที่ได้มาวิเคราะห์เชิงปริมาณโดยย้อนกลับเฟส
HPLC เงื่อนไข HPLC: คอลัมน์ COSMOSIL บรรจุ 5C18-MS-II,
4.6? 150 มิลลิเมตร Nacalai TESQUE.INC เกียวโตประเทศญี่ปุ่น ตัวทำละลายลาด
CH3CN: H2O (ที่มี 0.1% TFA) (20-40%); อัตราการไหล
1.0 มิลลิลิตร / นาที; เครื่องตรวจจับรังสียูวี 208 นาโนเมตร พื้นผิวและไฮโดรไล
ถูกชะที่ 8.1 และ 3.5 นาทีตามลำดับ เอชไอวีโปรติเอส
ยับยั้งของสารประกอบที่คำนวณได้ดังต่อไปนี้:
การยับยั้ง% ¼ðAcontrol? AsampleÞ? 100 = Acontrol
ที่เป็นพื้นที่ยอดญาติของไฮโดรไล.
กรด Oleanolic ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมบวก IC50 มันเป็น
24.8 LG / ml

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เอชไอวีการทดสอบชุดโปรติเอส ( bachem feinchemikalien AG , bubendorf
, สวิตเซอร์แลนด์ ) สถิติที่ใช้ ยี่สิบห้าไมโครลิตรเอชไอวีติ
( บัฟเฟอร์ ( 50 มม. naoac pH 4.9 ) ที่มี 2.5 LG ของ
( [ ของเขา . เอ๋ arg วาลลิว - ( pno2 เพ ) - ซึ่งเอ๋ nle เซอร์ --
nh2 ] ผสมกับสารละลายของสารประกอบ 2 จะใช้ DMSO
เป็นตัวทำละลาย ) แล้ว 8 จะ rechiv ติ ( 0.01 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร )
ถูกเพิ่มเข้ามาปฏิกิริยาผสมบ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที  แล้ว
ยกเลิกโดยเพิ่มของ 3.0 จะ 10% กรดไตรฟลูออโรอะซิติก ( กรดไขมัน )
( pno2-phe-glu-ala-nle-ser-nh2 ตามลำดับ ) และพื้นผิวที่เหลือ
เชิงปริมาณวิเคราะห์โดย HPLC reversed-phase
. เงื่อนไขที่ 2 : คอลัมน์ cosmosil บริการ 5c18-ms-ii
4.6 ,  150 มม. nacalai tesque.inc . เกียวโต ประเทศญี่ปุ่น ตัวทำละลาย สี
ch3cn :H2O ( ที่มีระดับ 0.1% ) ( 20 – 40 % ) ; อัตราการไหล
1.0 มล. / นาที ; เครื่องตรวจจับยูวี , 208 nm . พื้นผิวและจากตัวอย่างที่ 8.1
เป็น 3.5 นาที ตามลำดับ
ติเอชไอวียับยั้งกิจกรรมของสารประกอบที่คำนวณได้ดังนี้ :
% ยับยั้ง¼ðๆ ละ 15  จำนวนÞ  100 =
ที่เป็นญาติๆ ละ 15 พื้นที่สูงสุดของเอนไซม์ กรด
oleanolic ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวกic50 ของมันถูก
24.8 LG / ml