3.5. Detection of iNOS, COX-2 and T

3.5. Detection of iNOS, COX-2 and TNF-α mRNA by semi-quantitative analysis of RT-PCR

The present study showed that the release of pro-inflammatory mediators (NO, PGE2), cytokine (TNF-α) and the expression of iNOS, COX-2 and TNF-α genes were stimulated by incubation with LPS (1 µg/ml) using murine RAW264.7 macrophages. Regulations of NO, TNF-α and PGE2 production have been reported at the level of transcription, translation and secretion. Transcriptional activation by LPS requires the activation of a distinct set of transcription factors binding to at least two regions of promoter which include NFκB and AP-1 binding sites (Kishore et al., 2004). From the result, it is indicated that the isolated compounds from the CHCl3 fraction which inhibited NO production might have a potential to inhibit iNOS, COX-2 and TNF-α mRNA expression. To clarify the anti-inflammatory mechanism of these active compounds, the effects of 2, 4, 8 and 11 on the expression of mRNA were also examined. Compound 2 dose-dependently inhibited the expression of iNOS and COX-2 mRNA level, but did not affect on TNF-α mRNA. The inhibitory effect of reference compound, indomethacin, showed dose-dependently decreased cellular COX-2 mRNA level and partly affected on that of iNOS and TNF-α mRNA (Fig. 5). Compound 4 dose-dependently suppressed iNOS and COX-2 mRNA level, but not affected on that of TNF-α. Compound 8 dose-dependently decreased cellular TNF-α and iNOS mRNA level and this compound also affected COX-2 and β-actin mRNA expression at concentration of 100 µM due to its toxicity. In addition, compound 11 dose-dependently suppressed iNOS mRNA level, while inhibitory effect on COX-2 and TNF-α was partly affected. However, at the concentration of 100 µM, it affected on β-actin mRNA (Fig. 5).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3.5 การตรวจสอบของ iNOS ค็อกซ์-2 และ TNF-α mRNA โดยวิเคราะห์เชิงกึ่งปริมาณของ RT-PCRการศึกษาปัจจุบันพบว่าการเปิดตัวของ pro-อักเสบ (NO, PGE2), อย่างไร cytokine (TNF-α) และนิพจน์ของ iNOS ค็อกซ์-2 และยีน TNF-αได้ถูกกระตุ้น โดยบ่มด้วย LPS (1 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/ml) ใช้ murine RAW264.7 บังเอิญ ระเบียบไม่ TNF-αและผลิต PGE2 มีการรายงานในระดับ transcription แปล และหลั่ง เปิดใช้งาน transcriptional โดย LPS ต้องเปิดใช้งานของชุดแตกต่างปัจจัย transcription ผูกกับโปรโมเตอร์น้อยสองภูมิภาคซึ่งรวมถึง NFκB และ AP 1 รวมไซต์ (Kishore et al., 2004) จากผล มันจะระบุว่า สารแยกจากเศษ CHCl3 ซึ่งห้ามผลิตไม่อาจมีศักยภาพยับยั้ง iNOS ค็อกซ์-2 และนิพจน์ mRNA TNF-α ชี้แจงกลไกแก้อักเสบของสารเหล่านี้ใช้งานอยู่ ผลของ 2, 4, 8 และ 11 การนิพจน์ของ mRNA ยังตรวจสอบ สารประกอบ 2 ยา-dependently ห้ามนิพจน์ของ iNOS และระดับ mRNA ค็อกซ์-2 แต่ไม่ได้ส่งผลกระทบต่อบน mRNA TNF-α ลิปกลอสไขผลของ indomethacin ผสม อ้างอิง แสดงให้เห็นว่ายา dependently ลดระดับ mRNA ค็อกซ์-2 เซล และบางส่วนได้รับผลกระทบในที่ของ iNOS และ TNF-α mRNA (Fig. 5) สารประกอบ 4 ยา-dependently ถูกระงับ iNOS และระดับ mRNA ค็อกซ์-2 แต่ไม่ได้รับผลกระทบบนของ TNF-α 8 ผสมยา dependently ลดลงเซลลูลาร์ TNF-α และระดับ mRNA iNOS และนี้ผสมยังกระทบค็อกซ์-2 และนิพจน์ mRNA β-แอกตินที่ความเข้มข้น 100 µM จากความเป็นพิษของ ผสม 11 ยา-dependently ปราบพยศ iNOS ระดับ mRNA ในขณะที่ลิปกลอสไขผลค็อกซ์-2 และ TNF-αมีบางส่วนได้รับผลกระทบ อย่างไรก็ตาม ที่ความเข้มข้นของ 100 µM ได้รับผลกระทบบน mRNA β-แอกติน (Fig. 5)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3.5 การตรวจหา iNOS, COX-2 และ mRNA TNF-αโดยการวิเคราะห์กึ่งเชิงปริมาณของ RT-PCR การศึกษาครั้งนี้แสดงให้เห็นว่าการเปิดตัวของผู้ไกล่เกลี่ย pro อักเสบ (NO, PGE2), ไซโตไคน์ (TNF-α) และการแสดงออกของ iNOS , COX-2 และยีน TNF-αถูกกระตุ้นโดยการบ่มด้วย LPS (1 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) โดยใช้ขนาดใหญ่ RAW264.7 หมา ข้อบังคับของ NO, TNF-αและการผลิต PGE2 ที่ได้รับรายงานในระดับของการถอดความแปลและการหลั่ง การเปิดใช้งานการถอดรหัสโดย LPS ต้องเปิดใช้งานของชุดที่แตกต่างของการถอดความปัจจัยที่มีผลผูกพันอย่างน้อยสองภูมิภาคของผู้ก่อการซึ่งรวมถึงNFκBและ AP-1 เว็บไซต์ผูกพัน (ชอร์ et al., 2004) จากผลที่ได้ก็จะแสดงให้เห็นว่าสารที่แยกจากส่วน CHCl3 ซึ่งยับยั้งการผลิตไม่อาจจะมีศักยภาพในการยับยั้งการ iNOS, COX-2 และแสดงออก TNF-α ชี้แจงกลไกการป้องกันการอักเสบของสารเหล่านี้มีผลกระทบของ 2, 4, 8 และ 11 ในการแสดงออกของ mRNA มีการตรวจสอบยัง Compound 2 ยา dependently ยับยั้งการแสดงออกของ iNOS และระดับ mRNA COX-2 แต่ไม่ได้ส่งผลกระทบต่อ mRNA TNF-α ผลการยับยั้งของสารอ้างอิง indomethacin แสดงให้เห็นว่ายา dependently ลดลงระดับ mRNA COX-2 โทรศัพท์มือถือและได้รับผลกระทบส่วนหนึ่งของ iNOS และ TNF-α mRNA (รูปที่. 5) 4 Compound ยา dependently ปราบปราม iNOS และระดับ mRNA COX-2 แต่ไม่ได้รับผลกระทบในเรื่องของ TNF-α Compound 8 ยา dependently ลดลง TNF-αเซลล์และระดับ mRNA iNOS และสารนี้ยังได้รับผลกระทบ COX-2 และแสดงออกβ-โปรตีนที่ระดับความเข้มข้น 100 ไมครอนเนื่องจากพิษของมัน นอกจากนี้ยังมีสารประกอบที่ 11 ยา dependently ปราบปรามระดับ iNOS mRNA ในขณะที่ผลยับยั้งการ COX-2 และ TNF-αได้รับผลกระทบบางส่วน แต่ที่ความเข้มข้น 100 ไมครอนมันได้รับผลกระทบใน mRNA β-โปรตีน (รูปที่. 5)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3.5 . การตรวจหา inos cox-2 , และ TNF - α mRNA โดยกึ่งปริมาณ การวิเคราะห์นี้

ผลการศึกษาพบว่า การปล่อย pro-inflammatory ไกล่เกลี่ย ( ไม่ pge2 ) , ไซโตไคน์ ( TNF - α ) และการแสดงออกของ inos cox-2 , และ TNF - αยีนถูกกระตุ้นโดยการบ่มด้วยสเปรย์หล่อลื่น ( 1 µกรัม / มิลลิลิตร ) โดยใช้ ~ raw264.7 macrophages . กฎระเบียบของไม่TNF - α pge2 และการผลิตได้รับการรายงานในระดับการถอดรหัส การแปล และการหลั่ง ลองกระตุ้นโดยหล่อลื่นต้องเปิดใช้งานของการตั้งค่าที่แตกต่างกันของปัจจัยการถอดความผูกอย่างน้อยสองภูมิภาคของโปรโมเตอร์ซึ่งรวมถึง NF κ B และ ap-1 เต็มเปี่ยม ( Kishore et al . , 2004 ) จากผลจากการทดลองพบว่าสารประกอบที่แยกได้จาก chcl3 เศษส่วนที่ไม่อาจยับยั้งการผลิตมีศักยภาพในการยับยั้ง inos cox-2 และ TNF - αยีน , การแสดงออก เพื่ออธิบายกลไกการอักเสบของสารประกอบที่ใช้งานเหล่านี้ ผลกระทบของ 2 , 4 , 8 และ 11 ในการแสดงออกของ mRNA ที่ถูกตรวจสอบสารประกอบ 2 dose dependently ยับยั้งการแสดงออกของ inos และระดับ mRNA cox-2 แต่ไม่ได้ส่งผลกระทบต่อ TNF - α mRNA . ผลยับยั้งของอ้างอิงประกอบ อินโด พบปริมาณ dependently ลดลงเซลล์ cox-2 ระดับ mRNA และบางส่วนของผลกระทบที่ inos และ TNF - α mRNA ( ภาพที่ 5 ) สารประกอบ 4 ขนาด dependently ปราบปรามและระดับ mRNA cox-2 inos ,แต่ไม่มีผลต่อของ TNF - α . สารประกอบ 8 ขนาด dependently ลดลงของเซลล์เม็ดเลือดขาวและα inos ระดับ mRNA และสารประกอบนี้ยังได้รับผลกระทบ cox-2 บีตา - actin mRNA และการแสดงออกที่ความเข้มข้น 100 µ เนื่องจากพิษค่ะ นอกจากนี้ สารประกอบ 11 ขนาด dependently ปราบ inos ระดับ mRNA ในขณะที่ผลยับยั้งใน cox-2 และ TNF - αบางส่วนได้รับผลกระทบ อย่างไรก็ตามที่ความเข้มข้น 100 µ M มันมีผลต่อบีตา - actin mRNA ( ภาพที่ 5 )