Cell transplantation into hemophili

Cell transplantation into hemophilia A mice

Liver injury was induced in hemophilia A mice using a method similar to that described for WT-mice. For perioperative hemostatic management, all hemophilia A mice were intraperitoneally administered with 500 μL normal mouse plasma 30 min before cell transplantation [18]. Mice were sacrificed on Day 10, and plasma FVIII:C and hFVIII:Ag levels were evaluated (Fig. 1, lower panel). Liver samples were harvested on Day 10 and embedded in Tissue-Tek OCT compound (Sakura Finetek, Tokyo, Japan) with liquid nitrogen. Liver tissue sections were incubated with a human-specific polyclonal anti-FVIII antibody (Affinity Biologicals) and then with an Alexa Fluor 488-conjugated anti-sheep immunoglobulin G (Molecular Probes, Eugene, OR, USA). Cell nuclei were counterstained using the ProLong-Gold Antifade reagent with 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI; Invitrogen, Carlsbad, CA). Negative controls were prepared using untreated mouse livers from hemophilia A mice. Fluorescent detection of the hFVIII protein and cell nuclei was performed using a FluoView FV1000 confocal microscope (Olympus, Tokyo, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การปลูกถ่ายเซลล์เป็น hemophilia A หนูถูกทำให้เกิดบาดเจ็บตับในหนู hemophilia A โดยใช้วิธีการคล้ายกับที่อธิบายไว้สำหรับ WT-หนู Perioperative จัดการห้ามเลือด เมาส์ A hemophilia ทั้ง intraperitoneally ขึ้นกับพลาสม่าเมาส์ปกติ 500 μL 30 นาทีก่อนการปลูกถ่ายเซลล์ [18] หนูได้เสียสละใน 10 วัน และระดับ FVIII:C และ hFVIII:Ag พลาสม่าถูกประเมิน (รูป 1 แผงล่าง) อย่างตับถูกเก็บเกี่ยวใน 10 วัน และฝังตัวในเนื้อเยื่อ-Tek OCT (Sakura Finetek โตเกียว ญี่ปุ่น) ด้วยไนโตรเจนเหลว ส่วนเนื้อเยื่อของตับได้รับการกก กับแอนติบอดีที่เฉพาะมนุษย์โพลีแอนติป้องกัน-FVIII (ความสัมพันธ์ Biologicals) และจากนั้นการผัน Alexa ฟลูออ 488 แกะต่อต้านอิมมูโน G (Probes โมเลกุล ยูจีน หรือ สหรัฐอเมริกา) นิวเคลียสเซลล์ถูก counterstained ใช้น้ำยาทอง ProLong Antifade กับ 4′, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI Invitrogen คาร์ลบาด CA) ลบตัวควบคุมถูกเตรียมใช้เมาส์ไม่ผ่านตับจากหนู hemophilia A ตรวจจับการเรืองแสงของ hFVIII โปรตีนและเซลล์นิวเคลียสถูกดำเนินการโดยใช้คอนโฟคอกล้องจุลทรรศน์ FluoView FV1000 (Olympus โตเกียว ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปลูกถ่ายเซลล์ลงในฮีโมฟีเลียหนูบาดเจ็บที่ตับถูกชักนำในหนูฮีโมฟีเลียโดยใช้วิธีการคล้ายกับที่อธิบาย WT-หนู สำหรับการจัดการห้ามเลือดห้องผ่าตัดฮีโมฟีเลียหนูทั้งหมดเป็นยา intraperitoneally 500 ไมโครลิตรเมาส์ปกติพลาสม่า 30 นาทีก่อนที่จะปลูกถ่ายเซลล์ [18] หนูถูกเสียสละในวันที่ 10 และพลาสม่า FVIII: C และ hFVIII: Ag ระดับได้รับการประเมิน (Fig. 1 แผงล่าง) ตัวอย่างตับเก็บเกี่ยวในวันที่ 10 และฝังตัวอยู่ในเนื้อเยื่อ-Tek ตุลาคม Punch (ซากุระ FineTek โตเกียวประเทศญี่ปุ่น) ด้วยไนโตรเจนเหลว ส่วนเนื้อเยื่อตับถูกบ่มกับโพลีแอนติบอดีมนุษย์เฉพาะป้องกัน FVIII (Affinity Biologicals) แล้วกับ Alexa Fluor 488-ผันป้องกันแกะอิมมูโน G (วัดระดับโมเลกุล, Eugene, OR, สหรัฐอเมริกา) นิวเคลียสของเซลล์ถูก counterstained ใช้น้ำยายืดทอง Antifade กับ 4 '6 diamidino-2-phenylindole (DAPI; Invitrogen, Carlsbad, CA) การควบคุมเชิงลบได้จัดทำขึ้นโดยใช้เมาส์ตับได้รับการรักษาจากหนูฮีโมฟีเลีย การตรวจสอบการเรืองแสงของ hFVIII โปรตีนและเซลล์นิวเคลียสถูกดำเนินการโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ confocal FluoView FV1000 (Olympus, กรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การปลูกถ่ายในหนูและเซลล์การบาดเจ็บที่ตับนำและหนูโดยใช้วิธีการคล้ายกับที่อธิบายไว้โดยน้ำหนักของหนู จัดการห้ามเลือดผ่าตัดทั้งหมด และหนูต่อการได้รับ 500 μ L ปกติเมาส์พลาสม่า 30 นาทีก่อนการปลูกถ่ายเซลล์ [ 18 ] หนูก็ถวายในวันที่ 10 และพลาสมา VWF : C และ hfviii : ประเมินระดับ AG ( รูปที่ 1 , แผงล่าง ) ตัวอย่างตับถูกเก็บเกี่ยวในวันที่ 10 และฝังอยู่ในเนื้อเยื่อ เต็กต.ค. สารประกอบ ( ญี่ปุ่น finetek ซากุระ , โตเกียว ) กับไนโตรเจนเหลว เนื้อเยื่อตับบางส่วนถูกบ่มกับมนุษย์เฉพาะแอนติบอดีโพลีต่อต้านเอ็กซอน ( Affinity ทุกอย่าง ) แล้วกับ Alexa Fluor 488 conjugated anti แกะอิมมูโนโกลบูลินแกรม ( โมเลกุลโพรบ ยูจีน หรือ สหรัฐอเมริกา ) เซลล์นิวเคลียสมีการขยายเวลา counterstained รีเอเจนต์ antifade ทอง 4 นั้น 6-diamidino-2-phenylindole ( dapi ; Invitrogen , Carlsbad , CA ) การควบคุมเชิงลบที่เตรียมไว้ใช้ตับดิบจากเมาส์และเมาส์ . การเรืองแสงของ hfviii โปรตีนและเซลล์ นิวเคลียสมีการใช้ fluoview fv1000 ด้วยกล้องจุลทรรศน์ ( Olympus , โตเกียว , ญี่ปุ่น )