The large surface-exposed hydrophob

The large surface-exposed hydrophobic patch exhibited by BslA is a characteristic shared by the unrelated family of fungal proteins known as the hydrophobins (11). Hydrophobins are a conserved family of surface-active proteins that, among other functions, lower the surface tension of growth medium, allowing fungal hyphae to penetrate the air-water interface. The hydrophobins are divided into class I and class II; class I proteins form robust amyloid-like rodlets at the air-water interface, whereas class II proteins reduce surface tension by forming ordered lattices of native-like protein at the interface. In both classes, eight canonical cysteine residues form a highly conserved series of disulfide bridges that provide a rigid framework that restricts the mobility of the polypeptide chain (12, 13). In the class II hydrophobins, this framework is thought to stabilize the surface exposure of the large hydrophobic patch that mediates interfacial assembly (14). The presence of a large hydrophobic patch on the surface of BslA, combined with its biological function, caused us to classify BslA as a bacterial hydrophobin; however, it shares neither sequence nor structural similarity. An outstanding question remains, therefore: in the absence of a stabilizing disulfide-bonded network, how is the large surface-exposed hydrophobic patch of BslA stabilized sufficiently in aqueous environments to mediate the surface activity of the protein?
Here we use WT-BslA and a targeted mutation in the cap domain (L77K) to determine the mechanism that enables BslA to partition from the aqueous phase to the interface, where it decreases the interfacial tension and self-assembles to form an ordered rectangular 2D protein lattice. We chose the L77K mutation for further investigation as it exhibits one of the most dramatic changes in interfacial activity both in vivo and in vitro (10), thus enabling us to determine the mechanism of action. We show that BslA undergoes an environmentally responsive conformational change: the cap is stabilized in aqueous solution by

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขนาดใหญ่ผิวสัมผัส hydrophobic โปรแกรมปรับปรุงการจัดแสดง โดย BslA นั้นเป็นลักษณะที่ใช้ร่วมกันในครอบครัวไม่เกี่ยวข้องของโปรตีนเชื้อราที่เรียกว่า hydrophobins (11) Hydrophobins จะนำครอบครัวของโปรตีน surface-active ว่า ในฟังก์ชันอื่น ๆ ลดแรงตึงผิวของอาหารเลี้ยงเชื้อ ให้ hyphae เชื้อราบุกส่วนติดต่ออากาศน้ำ Hydrophobins การแบ่งคลาสฉันและคลาส II เรียนผมโปรตีนแบบฟอร์มแข็งแอมีลอยด์เหมือน rodlets ที่อินเทอร์เฟสน้ำอากาศ ในขณะที่คลาส II โปรตีนลดความตึงผิว โดย lattices สั่งขึ้นรูปพื้นเมืองเช่นโปรตีนที่อินเทอร์เฟซ ในชั้นเรียนทั้ง แปด cysteine มาตรฐานตกแบบชุดสูงนำสะพานไดซัลไฟด์ที่มีกรอบแข็งที่จำกัดการเคลื่อนไหวของโซ่ polypeptide (12, 13) ในชั้น II hydrophobins กรอบนี้เป็นความคิดการมุ่งสัมผัสผิวของแพทช์ hydrophobic ใหญ่ที่ mediates แอสเซมบลี interfacial (14) เกิดของแพทช์ hydrophobic ขนาดใหญ่บนพื้นผิวของ BslA รวมเข้ากับฟังก์ชันของชีวภาพ เราสามารถจัดประเภทเป็น hydrophobin แบคทีเรีย BslA อย่างไรก็ตาม มันหุ้นไม่มีลำดับหรือโครงสร้างคล้าย คำถามที่ค้างอยู่ ดังนั้น: ในการขาดงานของเครือข่ายที่ถูกผูกมัดไดซัลไฟด์สมัยมีเสถียรภาพ วิธีเป็นใหญ่ผิวสัมผัส hydrophobic โปรแกรมปรับปรุงของ BslA เสถียรเพียงพอในสภาพแวดล้อมอควีบรรเทากิจกรรมผิวของโปรตีน ที่นี่เราใช้ WT BslA และกลายพันธุ์เป้าหมายในโดเมนหมวก (L77K) เพื่อกำหนดกลไกที่ทำให้ BslA การแบ่งพาร์ติชันจากระยะอควีอินเตอร์เฟซ ที่จะลดความตึงเครียด interfacial และตนเอง assembles ฟอร์มเป็นโครงตาข่ายประกอบโปรตีน 2D สี่เหลี่ยมสั่ง เราเลือกการกลายพันธุ์ L77K การสืบสวนเพิ่มเติม ตามที่จัดแสดงหนึ่งเปลี่ยนแปลงสุด interfacial กิจกรรมทั้งในสัตว์ทดลอง และเพาะเลี้ยง (10), จึง ทำให้เราสามารถกำหนดกลไกในการดำเนินการ แสดงว่า BslA ผ่านการตอบสนองต่อสิ่งแวดล้อมเปลี่ยนแปลง conformational: หมวกจะเสถียรในละลายโดย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แพทช์ไม่ชอบน้ำพื้นผิวสัมผัสขนาดใหญ่แสดงโดย BslA เป็นลักษณะที่ใช้ร่วมกันโดยครอบครัวของโปรตีนที่ไม่เกี่ยวข้องกับเชื้อราที่รู้จักกันเป็น hydrophobins (11) Hydrophobins เป็นครอบครัวที่ป่าสงวนของโปรตีนพื้นผิวที่ใช้งานที่หมู่ฟังก์ชั่นอื่น ๆ ลดแรงตึงผิวของสื่อการเจริญเติบโตที่ช่วยให้เส้นใยของเชื้อราที่จะเจาะอินเตอร์เฟซที่อากาศน้ำ hydrophobins จะแบ่งออกเป็นชั้นที่หนึ่งและชั้นสอง; ผมระดับโปรตีน amyloid rodlets รูปแบบเหมือนที่แข็งแกร่งที่อินเตอร์เฟซที่อากาศน้ำในขณะที่ระดับที่สองโปรตีนลดแรงตึงผิวโดยการโปรยรับคำสั่งของโปรตีนพื้นเมืองเหมือนที่อินเตอร์เฟซ ในชั้นเรียนทั้งแปด cysteine ​​ตกค้างที่ยอมรับในรูปแบบชุดอนุรักษ์สูงของสะพานซัลไฟด์ที่ให้แข็งกรอบที่ จำกัด การเคลื่อนไหวของห่วงโซ่ polypeptide (12, 13) ในชั้นเรียนครั้งที่สอง hydrophobins กรอบนี้เป็นความคิดที่จะรักษาเสถียรภาพของการสัมผัสพื้นผิวของแพทช์ไม่ชอบน้ำขนาดใหญ่ที่ประกอบไกล่เกลี่ยสัมผัส (14) การปรากฏตัวของแพทช์ไม่ชอบน้ำขนาดใหญ่บนพื้นผิวของ BslA รวมกับฟังก์ชั่นทางชีวภาพของมันทำให้เราจะจัด BslA เป็น hydrophobin แบคทีเรีย แต่ก็ถือหุ้นลำดับที่คล้ายคลึงกันหรือโครงสร้างไม่ คำถามที่ยังคงโดดเด่นดังนั้น: ในกรณีที่ไม่มีการรักษาเสถียรภาพของเครือข่ายซัลไฟด์ถูกผูกมัดวิธีคือแพทช์ไม่ชอบน้ำพื้นผิวสัมผัสที่มีขนาดใหญ่ของ BslA เสถียรภาพเพียงพอในสภาพแวดล้อมที่มีน้ำเป็นสื่อกลางในกิจกรรมพื้นผิวของโปรตีน
ที่นี่เราใช้ WT-BslA และ การกำหนดเป้าหมายการกลายพันธุ์ในโดเมนหมวก (L77K) เพื่อกำหนดกลไกที่ช่วยให้ BslA พาร์ทิชันจากเฟสน้ำอินเตอร์เฟซที่จะลดความตึงเครียด interfacial และประกอบตัวเองในรูปแบบ 2D โปรตีนตาข่ายสี่เหลี่ยมรับคำสั่ง เราเลือกที่กลายพันธุ์ L77K สำหรับการตรวจสอบต่อไปในขณะที่มันเป็นหนึ่งในการจัดแสดงนิทรรศการการเปลี่ยนแปลงอย่างมากที่สุดในกิจกรรมสัมผัสทั้งในร่างกายและในหลอดทดลอง (10) จึงทำให้เราสามารถตรวจสอบกลไกของการกระทำ เราแสดงให้เห็นว่า BslA ผ่านการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างการตอบสนองต่อสิ่งแวดล้อม: หมวกมีเสถียรภาพในการแก้ปัญหาน้ำโดย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พื้นผิวสัมผัส Patch ขนาดใหญ่ ) แสดงโดย bsla เป็นคุณลักษณะที่ใช้ร่วมกันโดยครอบครัวที่ไม่เกี่ยวข้องกับโปรตีนของเชื้อราที่เรียกว่า hydrophobins ( 11 ) hydrophobins เป็นป่าสงวน ครอบครัวของโปรตีนที่ผิวงาน ในหมู่ฟังก์ชั่นอื่น ๆ , ลดแรงตึงผิวของอาหารเลี้ยงเชื้อให้เส้นใยราที่จะเจาะอากาศและน้ำในอินเตอร์เฟซการ hydrophobins แบ่งเป็นชั้นและชั้น 2 รูปแบบทนทานสนใจเหมือน rodlets ในอากาศและน้ำในอินเตอร์เฟซชั้นโปรตีน และโปรตีน คลาส สอง ลดแรงตึงผิว โดยเป็นคำสั่ง lattices พื้นเมืองเหมือนกับโปรตีนที่เชื่อมต่อ ทั้งชั้นเรียนตกค้าง 8-12 Canonical แปดแบบฟอร์มที่มีการอนุรักษ์ชุดสะพานซัลไฟด์ที่ให้แข็งกรอบที่จำกัดการเคลื่อนย้ายของ polypeptide โซ่ ( 12 , 13 ) ในชั้นเรียน 2 hydrophobins กรอบนี้เป็นความคิดที่จะทำให้ผิวสัมผัสของแพทช์ที่ mediates ( ขนาดใหญ่ ) ประกอบ ( 14 )การปรากฏตัวของแพทช์ใหญ่ ) บนพื้นผิวของ bsla รวมกับฟังก์ชันทางชีวภาพของมัน ทำให้เราแยก bsla เป็น hydrophobin แบคทีเรีย อย่างไรก็ตาม หุ้นไม่ดับหรือความคล้ายคลึงกันของโครงสร้าง เป็นคำถามที่ยังคงอยู่ ดังนั้น ในการขาดเสถียรภาพไดซัลไฟด์บอนด์ เครือข่ายมีขนาดใหญ่ ผิวสัมผัสของแพทช์ ) bsla เสถียรภาพเพียงพอในสภาพแวดล้อมของสารละลายไกล่เกลี่ยพื้นผิวกิจกรรมของโปรตีน
ที่นี่เราใช้ bsla WT และเป้าหมายการกลายพันธุ์ในหมวกโดเมน ( l77k ) เพื่อกำหนดกลไกที่ช่วยให้ bsla ไปยังพาร์ทิชันจากขั้นตอนในการติดต่อที่ลดความตึงเครียดระหว่างและตนเองประกอบกับฟอร์มการสั่งแบบ 2D โปรตีน ตุงตาข่าย เราเลือกการกลายพันธุ์ l77k สอบสวนต่อไปตามที่แสดงหนึ่งของการเปลี่ยนแปลงที่น่าทึ่งที่สุดในกิจกรรมระหว่างทั้งสองชนิดในหลอดทดลอง ( 10 ) จึงทำให้เราสามารถระบุกลไกของการกระทำเราแสดงให้เห็นว่า bsla ผ่านการเปลี่ยนแปลงโครงสร้างการตอบสนองต่อสิ่งแวดล้อม : ฝาครอบมีเสถียรในสารละลาย โดย