Reverse transcription (RT)-PCR was

Reverse transcription (RT)-PCR was employed to analyse the differential gene
expression at a transcriptional level. Total RNA was extracted from the liver samples
of the four groups using TRIzol (Invitrogen, USA). Aliquots of the total RNA (5 μg)
were reverse-transcribed with Super Script III (Invitrogen) according to the manufacturer’s
instructions. PCR was performed with an iCycler Thermal Cycler (Bio-
Rad, USA). cDNA (0.5 μL) were used for each PCR amplification in a total reaction
volume of 15 μL, and all reactions were performed in duplicate. The ubiquitin C transcript
was adopted as an internal control. The amplification was initiated by 4 min
of denaturation at 94 °C for one cycle, followed by 30 cycles at 94 °C for 30 s, 58 °C
for 30 s, and 72 °C for 1 min. After the last cycle of amplification, samples were
incubated for 7 min at 72 °C. The PCR products were examined in 1% agarose gels
stained with SYPRO Safe (1:100000; Invitrogen) and analysed using Quantity One
software (Bio-Rad).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กลับ transcription (RT) -PCR ได้รับการว่าจ้างการวิเคราะห์ยีนแตกต่างนิพจน์ที่อยู่ในระดับ transcriptional อาร์เอ็นเอทั้งหมดที่สกัดจากตัวอย่างตับกลุ่ม 4 ใช้ TRIzol (Invitrogen สหรัฐอเมริกา) Aliquots ของอาร์เอ็นเอทั้งหมด (5 μg)มีการทับศัพท์กลับกับซุปเปอร์สคริปต์ III (Invitrogen) ตามของผู้ผลิตคำแนะนำ ทำ PCR กับการ iCycler ความร้อน Cycler (ไบโอ-ราษฎร์ สหรัฐอเมริกา) cDNA (0.5 μL) ใช้สำหรับขยาย PCR แต่ละในปฏิกิริยารวมปริมาณของ 15 μL และปฏิกิริยาทั้งหมดถูกทำสำเนา เสียงบรรยาย ubiquitin Cถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมภายใน เริ่มที่ขยายจาก 4 นาทีของ denaturation ที่ 94 ° C สำหรับวงจรหนึ่ง ตามรอบ 30 ที่ 94 ° C สำหรับ 30 s, 58 ° Cสำหรับ 30 s, 72 ° C ใน 1 นาที หลังจากรอบสุดท้ายของการขยาย ตัวอย่างดีincubated ใน 7 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียส มีการตรวจสอบผลิตภัณฑ์ PCR ในเจ 1% agaroseสีกับ SYPRO ปลอดภัย (1:100000 Invitrogen) และ analysed โดยใช้ปริมาณหนึ่งซอฟต์แวร์ (ไบ-Rad)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ถอดความ Reverse (RT) -PCR ถูกใช้ในการวิเคราะห์ยีนที่แตกต่างกัน
การแสดงออกในระดับการถอดรหัส รวมอาร์เอ็นเอเป็นสารสกัดจากตัวอย่างตับ
ของสี่กลุ่มโดยใช้ Trizol (Invitrogen, ประเทศสหรัฐอเมริกา) ส่วนลงตัวของอาร์เอ็นเอทั้งหมด (5 ไมโครกรัม)
ถูกย้อนกลับคัดลอกกับซูเปอร์สคริปที่สาม (Invitrogen) ตามที่ผู้ผลิต
คำแนะนำ PCR ได้ดำเนินการกับปฏิทินสาธารณะ Thermal Cycler (Bio-
Rad, ประเทศสหรัฐอเมริกา) cDNA (0.5 ไมโครลิตร) ถูกนำมาใช้สำหรับแต่ละขยาย PCR ในการเกิดปฏิกิริยารวม
ปริมาณ 15 ไมโครลิตรและปฏิกิริยาทั้งหมดถูกดำเนินการในที่ซ้ำกัน หลักฐาน C ubiquitin
ถูกนำมาใช้เป็นระบบการควบคุมภายใน ขยายริเริ่มโดย 4 นาที
ของการสูญเสียสภาพธรรมชาติที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลาหนึ่งรอบตามด้วย 30 รอบที่ 94 ° C เป็นเวลา 30 วินาที, 58 ° C
เป็นเวลา 30 วินาที, และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที หลังจากรอบสุดท้ายของการขยายตัวอย่างถูก
บ่มเป็นเวลา 7 นาทีที่ 72 ° C ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการตรวจสอบใน 1% agarose เจล
ย้อมด้วย Sypro ปลอดภัย (1: 100000; Invitrogen) และวิเคราะห์โดยใช้จำนวนหนึ่ง
ซอฟต์แวร์ (Bio-Rad)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

reverse transcription ( RT - PCR ) มีวัตถุประสงค์เพื่อวิเคราะห์ความแตกต่างของยีน
การแสดงออกในระดับลอง . อาร์เอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากตัวอย่างของตับ
4 กลุ่มโดยใช้ trizol ( Invitrogen , USA ) เฉยๆของ RNA ทั้งหมด ( 5 μ g )
ถูกย้อนกลับด้วยซูเปอร์และสคริปต์ III ( Invitrogen ) ตามคำแนะนำของ
ผู้ผลิตซึ่งแสดงด้วย icycler Thermal cycler ( ไบโอ -
RAD , USA ) ยีน ( 0.5 μ L ) ใช้สำหรับแต่ละวิธี Amplification ในปริมาณปฏิกิริยา
รวม 15 μ L และปฏิกิริยาแสดงซ้ำ ที่ข้างนอก C .
ถูกประกาศใช้ การควบคุมภายใน เริ่มโดยการเพิ่มปริมาณของ 4 นาทีที่ 94 ° C (
1 รอบ ตามด้วย 30 รอบที่ 94 ° C เป็นเวลา 30 วินาที , 58 องศา C
30 , และ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาที หลังจากรอบสุดท้ายของการขยายจำนวน
บ่มเป็นเวลา 7 นาทีที่ 72 องศา ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกตรวจสอบใน 1% เจลโรส
เปื้อน sypro ปลอดภัย ( 1:100000 ; Invitrogen ) และวิเคราะห์การใช้ปริมาณหนึ่ง
ซอฟต์แวร์ ( ไบโอ ราด )