Bacterial GFP tagging and analysis

Bacterial GFP tagging and analysis of rice root colonization
The isolates CT1 and CT2 were electro transformed with ca. 1 μg
of plasmid pBK-mini-Tn7 gfp1 (Koch et al., 2001) and plated onto
NA plates containing 25 μg/ml kanamycin. After 24 h of incubation
at 28°C, transformed colonies developed on the plates, and their cells
fluoresced green under the UV microscope. Colonization of the
CT6919 rice seedlings was studied in semisolid Farhåeus solution
(0.2%, w/v agar) or in vermiculite watered with Farhåeus solution.
The seedlings were inoculated for 5 days after husk removal and
surface sterilization, by dripping 100 μl of a cell suspension containing
105 cells/ml of GFP-tagged CT1 or CT2 isolates. The inoculated seedlings
were sampled at 5, 7, and 15 days after inoculation for inspection
under the fluorescence microscope (Nikon Alphaphot-2 YS2,
Japan). Roots were carefully separated with a scalpel, washed gently
with deionized water, and deposited on slides for visualization under
white or UV light using the appropriate excitation and emission filters
for GFP.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การแท็ก GFP แบคทีเรียและการวิเคราะห์ข้าวรากล่าอาณานิคมการแยก CT1 และ CT2 ถูกไฟฟ้าที่เปลี่ยนแปลงกับ ca. 1 μของ plasmid pBK-มินิ-Tn7 gfp1 (สาขา et al. 2001) และชุบลงบนนาแผ่นกานามัยซิน 25 μ/ml ที่มี หลังจาก 24 ชม.ของการกกไข่ที่ 28° C เปลี่ยนอาณานิคมที่พัฒนาบนแผ่น และเซลล์สีเขียวเรืองแสงภายใต้ UV กล้องจุลทรรศน์ ล่าอาณานิคมของต้นกล้าข้าว CT6919 เป็นศึกษาใน semisolid Farhåeus โซลูชัน(0.2% วุ้น w/v) หรือเวอร์มิคูไลท์ในการรดน้ำด้วย Farhåeusต้นกล้าถูก inoculated 5 วันหลังจากเอาแกลบ และฆ่าเชื้อพื้นผิว ด้วยแหมะ μl 100 ระงับเซลล์มี105 เซลล์/มล.ของแท็ก GFP CT1 หรือ CT2 แยก ต้นกล้า inoculatedได้ลิ้มลองที่ 5, 7 และ 15 วันหลังจากกักบริเวณสำหรับการตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง (Nikon Alphaphot-2 YS2ญี่ปุ่น) รากมีความระมัดระวังกับ scalpel ล้างเบา ๆความจุ ฝากบนสไลด์สำหรับการแสดงภายใต้สีขาวหรือแสงยูวีโดยใช้ตัวกรองการกระตุ้นและการปล่อยที่เหมาะสมสำหรับ GFP

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การติดแท็ก GFP แบคทีเรียและการวิเคราะห์การล่าอาณานิคมรากข้าว
แยก CT1 และ CT2 ถูกเปลี่ยน Electro กับแคลิฟอร์เนีย 1 ไมโครกรัม
ของพลาสมิด PBK มินิ Tn7 gfp1 (Koch et al., 2001) และชุบลงบน
แผ่น NA ที่มี 25 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรกานามัยซิ หลังจาก 24 ชั่วโมงของการบ่ม
ที่อุณหภูมิ 28 ° C, เปลี่ยนอาณานิคมพัฒนาบนจานและเซลล์ของพวกเขา
fluoresced สีเขียวภายใต้กล้องจุลทรรศน์ยูวี การล่าอาณานิคมของ
ต้นกล้าข้าว CT6919 ได้รับการศึกษาในการแก้ปัญหาFarhåeusการผสมสูตร
(0.2% w / v วุ้น) หรือในดินรดน้ำด้วยวิธีการแก้ปัญหาFarhåeus.
ต้นกล้าถูกเชื้อเป็นเวลา 5 วันหลังจากการกำจัดแกลบและ
ฆ่าเชื้อพื้นผิวโดยแหมะ 100 ไมโครลิตรของเซลล์ ระงับมี
105 เซลล์ / มิลลิลิตร GFP ติดแท็กหรือ CT1 CT2 ไอโซเลท ต้นกล้าเชื้อ
จากตัวอย่าง 5, 7 และ 15 วันหลังจากการฉีดวัคซีนสำหรับการตรวจสอบ
ภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง (Nikon Alphaphot-2 YS2,
ญี่ปุ่น) รากถูกแยกออกอย่างระมัดระวังด้วยมีดผ่าตัดล้างเบา ๆ
ด้วยน้ำปราศจากไอออนและวางลงบนสไลด์สำหรับการแสดงภายใต้
สีขาวหรือแสง UV ใช้ที่เหมาะสมกระตุ้นและการปล่อยฟิลเตอร์
สำหรับ GFP

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

แบคทีเรียชนิด GFP และการวิเคราะห์ของรากข้าวตั้งอาณานิคมการแยกและมี ct1 ct2 โรงอาหารประมาณ 1 μกรัมของพลาสมิด pbk-mini-tn7 gfp1 ( Koch et al . , 2001 ) และชุบลงบนนาแผ่นบรรจุ 25 μ g / ml ทั้งสอง หลังจากบ่ม 24 ชั่วโมงที่ 28 ° C เปลี่ยนอาณานิคมพัฒนาบนแผ่น และเซลล์ของพวกเขาfluoresced UV สีเขียวภายใต้กล้องจุลทรรศน์ การล่าอาณานิคมของต้นกล้าข้าว ct6919 เรียน semisolid ฟาร์หปีอียู โซลูชั่น( 0.2% w / v วุ้น ) หรือ Vermiculite รดน้ํากับฟาร์หปีอียูแก้ปัญหาต้นกล้าปลูกเชื้อ 5 วัน หลังจากเอาแกลบ และฆ่าเชื้อที่พื้นผิว โดยหยด 100 μชั้นของเซลล์แขวนลอยที่มี105 เซลล์ / มิลลิลิตร หรือ ct2 ct1 GFP ติดเชื้อ การปลูกต้นกล้าจำนวน 5 , 7 และ 15 วันหลังจากที่ได้รับการตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ( Nikon ys2 alphaphot-2 ,ญี่ปุ่น ) รากเป็นอย่างระมัดระวัง คั่น ด้วยมีด , ล้างเบา ๆคล้ายเนื้อเยื่อประสานกับน้ำ และฝากไว้บนภาพนิ่งแสดงภายใต้สีขาวหรือแสง UV ที่ใช้กระตุ้นที่เหมาะสมและการปล่อยตัวกรองสำหรับ GFP .