were screened for endoparasites. P. laeviswas the only enteric helminth
encountered in chub. Small pieces of themid-gut from 20 chub (10 uninfected
and 10 acanthocephalan-infected hosts with 12–15 P. laevis)
with similar total length (average 29.6 ± 0.4 cm, mean ± standard
error S.E., range 27.5–33 cm) were fixed in Bouin's fluid and subsequently
dehydrated, and paraffin wax embedded. In addition, pieces
of the mid-gut positioned more than 1 cm from the sites of parasite
attachment were also processed.
For histochemical studies, 6–7 μm-thick sections were taken from
each block and then stainedwith either alcian blue 8GX pH 2.5/periodic
acid-Schiff (AB/PAS) sequence [19] or with high iron diamine/alcian
blue 8GX pH 2.5 (HID/AB) reaction [20] and [21]. The AB/PAS method
was used to stain for acidic glyconjugates (staining blue) and periodate
reactive vicinal diols (staining purple), as well as visualising cells that
contain a mixture of both (staining violet). The HID/AB sequence was
used to differentiate the acidic glycoconjugates, i.e. those that are
sulphated and stain a brownish-black colour fromthose that are carboxylated,
non-sulphated and stain blue.
Sections were observed and photographed under an Olympus BX50
photomicroscope (Olympus, Italy), equipped with a digital camera and
image analysis software (DP-Soft 5.0, Olympus).
For quantitative histochemical studies, four sections of the mid-gut
from each of the 10 paraffin blocks prepared from the uninfected chub
were analysed, aswere four sections fromeach block taken frominfected
fish at the site of parasite attachment to its host and at a distance of
1 cmaway fromthe parasite. In the sections stainedwith the AB/PAS reaction,
intestinal mucous cells were counted on five intestinal folds
viewed at 100× magnification. Mucous cells containing acid (i.e. stain
blue with AB), neutral (i.e. stain purple with PAS) or a mix of both
acid and neutral glycoconjugates (i.e. stain violet with AB/PAS) were
distinguishable and counted in 200 intestinal folds (10 chub × 4 sections
× 5 intestinal folds in each group). In the sections stained with
the HID/AB sequence, the mucous cells containing either sulphated
(i.e. stained brown–black with HID) or non-sulphated (i.e. stained
blue with AB) glycoconjugates were counted in the same manner.
The values of the mean number of mucous cells per intestinal fold
(± S.E.) were analysed by a one-way analysis of covariance (ANCOVA)
using the open source software PAST version 2.17c to account for the
variable height of the intestinal folds in the different host groups (i.e.
uninfected, infected 1 cm from the site of parasite infection, and, at
the site of parasite attachment). Multiple comparisons among the
groups were performed using the Tukey-test and/or Student's t-test.
The level of significance was set at P=0.01.
were screened for endoparasites. P. laeviswas the only enteric helminthencountered in chub. Small pieces of themid-gut from 20 chub (10 uninfectedand 10 acanthocephalan-infected hosts with 12–15 P. laevis)with similar total length (average 29.6 ± 0.4 cm, mean ± standarderror S.E., range 27.5–33 cm) were fixed in Bouin's fluid and subsequentlydehydrated, and paraffin wax embedded. In addition, piecesof the mid-gut positioned more than 1 cm from the sites of parasiteattachment were also processed.For histochemical studies, 6–7 μm-thick sections were taken fromeach block and then stainedwith either alcian blue 8GX pH 2.5/periodicacid-Schiff (AB/PAS) sequence [19] or with high iron diamine/alcianblue 8GX pH 2.5 (HID/AB) reaction [20] and [21]. The AB/PAS methodwas used to stain for acidic glyconjugates (staining blue) and periodatereactive vicinal diols (staining purple), as well as visualising cells thatcontain a mixture of both (staining violet). The HID/AB sequence wasused to differentiate the acidic glycoconjugates, i.e. those that aresulphated and stain a brownish-black colour fromthose that are carboxylated,non-sulphated and stain blue.Sections were observed and photographed under an Olympus BX50photomicroscope (Olympus, Italy), equipped with a digital camera andimage analysis software (DP-Soft 5.0, Olympus).For quantitative histochemical studies, four sections of the mid-gutfrom each of the 10 paraffin blocks prepared from the uninfected chubwere analysed, aswere four sections fromeach block taken frominfectedfish at the site of parasite attachment to its host and at a distance of1 cmaway fromthe parasite. In the sections stainedwith the AB/PAS reaction,intestinal mucous cells were counted on five intestinal foldsviewed at 100× magnification. Mucous cells containing acid (i.e. stainblue with AB), neutral (i.e. stain purple with PAS) or a mix of bothacid and neutral glycoconjugates (i.e. stain violet with AB/PAS) weredistinguishable and counted in 200 intestinal folds (10 chub × 4 sections× 5 intestinal folds in each group). In the sections stained withthe HID/AB sequence, the mucous cells containing either sulphated(i.e. stained brown–black with HID) or non-sulphated (i.e. stainedblue with AB) glycoconjugates were counted in the same manner.The values of the mean number of mucous cells per intestinal fold(± S.E.) were analysed by a one-way analysis of covariance (ANCOVA)using the open source software PAST version 2.17c to account for thevariable height of the intestinal folds in the different host groups (i.e.uninfected, infected 1 cm from the site of parasite infection, and, atthe site of parasite attachment). Multiple comparisons among thegroups were performed using the Tukey-test and/or Student's t-test.The level of significance was set at P=0.01.
การแปล กรุณารอสักครู่..
ได้รับการคัดกรอง endoparasites P. laeviswas พยาธิลำไส้เท่านั้น
ที่พบในปลาน้ำจืด ชิ้นเล็ก ๆ ของ themid-gut จาก 20 ปลาน้ำจืด (10 ติดเชื้อ
และ 10 เจ้าภาพ acanthocephalan-ติดเชื้อ 12-15 P. laevis)
ที่มีความยาวรวมที่คล้ายกัน (เฉลี่ย 29.6 ± 0.4 เซนติเมตรหมายถึง±มาตรฐาน
ข้อผิดพลาด SE, ช่วง 27.5-33 เซนติเมตร) เป็น การแก้ไขในของเหลว Bouin และต่อมา
อบแห้งและขี้ผึ้งพาราฟินฝังตัว นอกจากนี้ชิ้นส่วน
ของกลางไส้ในตำแหน่งเกิน 1 ซม. จากเว็บไซต์ของปรสิต
ที่แนบมาถูกประมวลผลยัง.
สำหรับการศึกษาทางเคมีของเนื้อเยื่อส่วนที่ 6-7 ไมโครเมตรหนาถูกนำมาจาก
แต่ละบล็อกแล้ว stainedwith ทั้งด้วย Alcian blue 8GX ค่า pH 2.5 / ธาตุ
กรดชิฟฟ์ (AB / PAS) ลำดับ [19] หรือ diamine เหล็กสูง / ด้วย Alcian
blue 8GX พีเอช 2.5 (HID / AB) ปฏิกิริยา [20] และ [21] AB / วิธี PAS
ถูกใช้ในการเปื้อนสำหรับ glyconjugates ที่เป็นกรด (เปื้อนสีฟ้า) และ periodate
diols Vicinal ปฏิกิริยา (การย้อมสีสีม่วง) เช่นเดียวกับการแสดงเซลล์ที่
มีส่วนผสมของทั้งสอง (การย้อมสีม่วง) HID / ลำดับ AB ถูก
นำมาใช้เพื่อแยกความแตกต่าง glycoconjugates เป็นกรดคือผู้ที่มี
ซัลเฟตและคราบสีน้ำตาลสีดำ fromthose ที่มี carboxylated,
ที่ไม่ใช่ sulphated และคราบสีฟ้า.
ส่วนถูกตั้งข้อสังเกตและถ่ายภาพภายใต้โอลิมปั BX50
photomicroscope (โอลิมปั อิตาลี) พร้อมกับกล้องดิจิตอลและ
ซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ภาพ (DP-Soft 5.0, Olympus).
สำหรับการศึกษาเชิงปริมาณฮีสโตเคมี, สี่ส่วนของกลางทางเดินอาหาร
จากแต่ละ 10 บล็อกพาราฟินเตรียมจากปลาน้ำจืดที่ไม่ติดเชื้อ
ที่ได้มาวิเคราะห์, aswere สี่ ส่วน fromeach บล็อกนำ frominfected
ปลาที่เว็บไซต์ของสิ่งที่แนบปรสิตไปยังโฮสต์และที่ระยะทาง
1 cmaway fromthe ปรสิต ในส่วน stainedwith ปฏิกิริยา AB / PAS,
เซลล์เมือกในลำไส้นับห้าเท่าลำไส้
ดูได้ที่ 100 ×ขยาย เซลล์เมือกที่มีกรด (เช่นคราบ
สีฟ้าที่มี AB) เป็นกลาง (เช่นคราบสีม่วงกับ PAS) หรือส่วนผสมของทั้ง
กรดและ glycoconjugates เป็นกลาง (เช่นสีม่วงคราบ AB / PAS) มี
ความแตกต่างและนับ 200 เท่าลำไส้ (10 ×ปลาน้ำจืด ส่วน 4
× 5 เท่าในลำไส้ในแต่ละกลุ่ม) ในส่วนที่ย้อมด้วย
ลำดับ HID / AB, เซลล์เมือกบรรจุทั้ง sulphated
(เช่นการย้อมสีน้ำตาลสีดำกับ HID) หรือไม่ sulphated (เช่นการย้อม
สีฟ้าที่มี AB) glycoconjugates นับในลักษณะเดียวกัน.
ค่าเฉลี่ย จำนวนของเซลล์เมือกต่อลำไส้พับ
(± SE) วิเคราะห์ข้อมูลโดยการวิเคราะห์ทางเดียวของความแปรปรวนร่วม (ANCOVA)
โดยใช้ซอฟต์แวร์โอเพนซอร์ส 2.17c รุ่นที่ผ่านมาไปยังบัญชีสำหรับ
ความสูงของตัวแปรเท่าลำไส้ในกลุ่มโฮสต์ที่แตกต่างกัน (เช่น
ที่ไม่ติดเชื้อติดเชื้อ 1 ซม. จากเว็บไซต์ของการติดเชื้อปรสิตและใน
เว็บไซต์ของสิ่งที่แนบปรสิต) เปรียบเทียบหลายในหมู่
กลุ่มได้ดำเนินการโดยใช้ Tukey ทดสอบและ / หรือนักศึกษา t-test.
ระดับนัยสำคัญตั้งอยู่ที่ P = 0.01
การแปล กรุณารอสักครู่..