2.7. Extraction and assay of ACC sy

2.7. Extraction and assay of ACC synthase (ACS) activity
The homogenate (1 g pulp tissue) was prepared in extraction buffer as described as Kato et al. (2000). One gram frozen pulp tissue were homogenized with a mortar and pestle in 3 mL of extraction buffer (0.1 M EPPS-KOH buffer, pH 8.5, 10 mM 2-mercaptoethanol, and 10 mM pyridoxal phosphate) at 4 _C. The homogenate was centrifuged at 25,000 _ g for 20 min at 4 _C. The supernatant was desalted by passing through PD-10 column (Amersham Pharmacia Biotech) with 10 mM EPPS-KOH buffer, pH 8.5, containing 10 mM 2-mercaptoethanol and 10 mM pyridoxal phosphate. The eluent was assayed for ACC synthase activity in a reaction mixture consisting of 50 mM EPPS-KOH buffer, pH 8.5, 50 mM SAM, and the enzyme preparation with a total volume of 1 mL. The reaction mixture was incubated for 30 min at 30 _C and then the reaction was stopped by adding 0.2 mL of 10 mM HgCl2. ACC formed in the reaction was assayed by the method of Lizada and Yang (Concepcion et al., 1979). ACS activity was expressed as the ethylene production in the reaction (milligram per kilogram per second).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.7 การสกัดและวิเคราะห์กิจกรรมบัญชี synthase (ACS) Homogenate (เนื้อเยื่อเยื่อ 1 g) ถูกเตรียมไว้ในบัฟเฟอร์สกัดดังที่เป็นนายกาโตและ al. (2000) หนึ่งกรัมที่แช่แข็งเนื้อเยื่อเยื่อถูก homogenized เป็นกลุ่มกับเป็นโกร่งใน mL 3 แยกบัฟเฟอร์ (0.1 M EPPS-เกาะบัฟเฟอร์ pH 8.5, 10 มม. 2-mercaptoethanol และ 10 มม. pyridoxal ฟอสเฟต) ที่ 4 _C Homogenate ถูก centrifuged ที่ 25000 g _สำหรับ 20 นาทีที่ 4 _C Supernatant ถูก desalted โดยผ่าน PD-10 คอลัมน์ (Amersham Pharmacia ไบโอเทค) กับ 10 มม.เกาะ EPPS บัฟเฟอร์ pH 8.5 ฟอสเฟต pyridoxal 10 มม.และ 10 มม. 2-mercaptoethanol Eluent ถูก assayed สำหรับบัญชีกิจกรรม synthase ในปฏิกิริยาส่วนผสมประกอบด้วยบัฟเฟอร์ 50 มม. EPPS-เกาะ pH 8.5, SAM, 50 mM และเตรียมเอนไซม์กับปริมาตรรวมของ 1 mL ส่วนผสมปฏิกิริยาถูก incubated ใน 30 นาทีที่ 30 _C แล้ว หยุดปฏิกิริยา โดยเพิ่ม 0.2 mL ของ 10 mM HgCl2 การบัญชีเกิดขึ้นในปฏิกิริยาถูก assayed โดยวิธี Lizada และยาง (คอนเซปชั่นไดเอ็ด al., 1979) กิจกรรม ACS ถูกแสดงเป็นการผลิตเอทิลีนในปฏิกิริยา (milligram ต่อกิโลกรัมต่อวินาที)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.7 . การสกัดและวิเคราะห์ของ ACC synthase ( ACS )
1 G กิจกรรมแยกเนื้อเยื่อ ) ได้เตรียมการสกัดบัฟเฟอร์ตามที่อธิบายไว้เป็นคาโต้ et al . ( 2000 ) หนึ่งกรัมเนื้อเยื่อกระดาษแช่แข็งถูกบดด้วยครกและสากใน 3 มล. ของบัฟเฟอร์ที่แยก ( 0.1 M epps-koh บัฟเฟอร์ พีเอช 8.5 10 มม. อย่างเดียว และ 10 มม. pyridoxal ฟอสเฟต ) ใน 4 _c โดยแยกเป็นระดับที่ 25000 _ G สำหรับ 20 นาทีที่ 4 _c . นำกำลัง desalted โดยผ่าน pd-10 คอลัมน์ ( ที่มุ่งมั่น ไบโอเทค ) กับบัฟเฟอร์ pH 8.5 epps-koh 10 มม. ( 10 มม. และ 10 มม. อย่างเดียว pyridoxal ฟอสเฟต การแยกซีรั่มสำหรับกิจกรรมและบัญชีในปฏิกิริยาผสมประกอบด้วยบัฟเฟอร์ pH 8.5 epps-koh 50 mm , 50 mm แซมและการเตรียมเอนไซม์ที่มีปริมาณ 1 มิลลิลิตรปฏิกิริยาผสมบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 30 _c แล้วปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการเพิ่ม 0.2 มิลลิลิตร hgcl2 10 มิลลิเมตร บัญชีที่เกิดขึ้นในปฏิกิริยาซีรั่มโดยวิธี lizada และหยาง ( Concepci ó n et al . , 1979 ) กิจกรรม ACS คือแสดงเป็น การผลิตเอทิลีนในปฏิกิริยา ( มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมต่อวินาที )