ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF LOCAL YEAST
STRAINS FROM WASTE FRUIT JUICES, JAGGERY AND
DAHI SAMPLES
SOMDATTA CHATTERJEE, BARNITA GHOSH and RINA RANI RAY*
Microbiology Research Laboratory, Department of Zoology, Molecular Biology & Genetics,
Presidency University, KOLKATA – 700073 (W.B.) India
ABSTRACT
A total of 14 samples from different food sources viz., dahi, jaggery and different kinds of fruit
juices were collected randomly from different localities of Kolkata, West Bengal, India. Thirty-three yeast
strains were isolated using selective medium, Martin’s Rose Bengal Agar. Differential tests were applied
including morphological, cultural and biochemical characteristics, which facilitate the opportunity for
identification of the yeasts. The total number of isolated yeast strains was 12 from dahi, 2 each from apple
juice, pineapple juice, mango juice, musambi juice, grape juice, orange juice, jaggery and 7 from
sugarcane juice. These strains were found to produce various extra cellular enzymes and could ferment
various carbon sources for the production of alcohol.
Key words: Ethanol, Yeast, Fermentation, Isolation of yeast.
INTRODUCTION
The useful physiological properties of yeast have led to their use in the field of
biotechnology, fermentation of sugars by yeast being the oldest and largest application of
this technology. Many types of yeasts are used for making many foods: baker's yeast in
bread production; brewer's yeast in beer fermentation; yeast in wine fermentation and for
xylitol production. A worldwide interest in the utilization of bio-ethanol as an energy source
has stimulated studies on the cost and efficiency of industrial processes for ethanol
production. Intense research has been carried out for obtaining efficient fermentative
organisms, low-cost fermentation substrates and optimum environmental conditions for
fermentation to occur. Traditionally, ethanol production is usually accomplished by
microbial conversion of carbohydrates present in agricultural products1. As, few yeast strains
have been found to possess appreciable characteristics for ethanol production2,3, there is a
S. Chatterjee et 648 al.: Isolation and Characterization of….
dire need to explore the potential of indigenous strains of yeasts to meet the national
requirements and to save the foreign exchange. There are different sources for the isolation
of yeast species4. However their presence, were reported mostly from the citrus juice5, dahi6
and sugarcane juice7, molasses8, sugar mill effluents9 and fermented foods10 and fermented
pineapple juice11. As there is global emphasis in ethanol production by fermentation
process.
In the present study, several local samples of dahi, various fruit juices and jaggery
were analyzed for isolation and subsequent characterization of yeast strains, which may
further be utilized in alcohol production.
EXPERIMENTAL
Materials and methods
All the research work was carried out in the Microbiology Laboratory of the
Department of Zoology, Molecular Biology & Genetics, Presidency University, Kolkata,
India.
Collection of samples
Samples of dahi, waste juices of apple, pineapple, mango, musambi, grape,
sugarcane, orange and jaggery were collected randomly from local markets of different areas
of Kolkata in sterile bottles and kept at 4°C. These samples were screened for isolation of
the yeast strains.
Isolation of yeast strains
The samples were serially diluted, plated on a selective medium, Martins Rose
Bengal agar Medium (33.6 gm /liter) and were incubated at 28°C for 48 hours. The colonies
appeared were further purified. Pure colonies were isolated and tested for further
characterization.
Morphological characterization
The strains were stained by lactophenol-cotton blue, carbol fuchsin and seen under
phase contrast microscope. The colonies were checked for their colour, outline and other
features.
Determination of enzyme synthesizing ability
To detect their ability to assimilate various polysaccharides, the strains were grown
Int. J. Chem. Sci.: 9(2), 2011 649
in basal medium composed of (gL-1): peptone 0.9; (NH4)2HPO4 0.4; KCl 0.1;
MgSO4.7H2O (pH 7) at 28°C for 18 hours, supplemented with starch, carboxy methyl
cellulose, xylan and pectin (0.5) respectively. For in situ detection of amylase and cellulase
& xylanase activities, plates were flooded with iodine solution (I2 + KI) and congo red
solution respectively. The catalase activity was checked by dropping few drops of H2O2 on
the culture. The quantitative assay of cellulase, amylase, xylanase and pectinase was done by
dinitrosalicylic acid method12. For checking the efficacy of the strains to grow and produce
alcohol, each strain was cultivated in basal medium supplemented with various sugars and
organic and inorganic nitrogen sources.
Determination of alcohol producing ability
To detect their alcohol producing ability, quantitative estimation of ethanol by
potassium dichromate method13 was followed. The supernatant (1 mL) of centrifuged culture
broth of glucose-grown yeast strain was made up the volume to 5 mL with distilled water.
Then 1 mL of Potassium dichromate reagent was added. All the test tubes were kept in ice
water and 4 mL of conc. sulfuric acid added to each tube gently through the walls. Then the
optical density was measured at 660 nm. Alcohol standard was prepared by dissolving
absolute ethanol in water to get 10 mg/mL concentration.K2Cr2O7 solution was prepared by
dissolving 10 gm of K2Cr2O7 in distilled water in a 100 ml standard flask and make up the
volume to mark.
RESULTS AND DISCUSSION
Fourteen samples of dahi, jaggery and fruit juices were screened from where thirty
three yeast strains were isolated and purified (Table 1). Maximum yeast strains were isolated
from dahi samples, followed by sugarcane juice. Most of the isolated colonies exhibited
smooth surfaces with circular margins. The colour of the colonies showed a wide variation
of creamy white and pinkish. The cells were found to be of various shapes such as round;
oval, spherical and ellipsoidal (Table 2).
ISOLATION AND CHARACTERIZATION OF LOCAL YEAST
STRAINS FROM WASTE FRUIT JUICES, JAGGERY AND
DAHI SAMPLES
SOMDATTA CHATTERJEE, BARNITA GHOSH and RINA RANI RAY*
Microbiology Research Laboratory, Department of Zoology, Molecular Biology & Genetics,
Presidency University, KOLKATA – 700073 (W.B.) India
ABSTRACT
A total of 14 samples from different food sources viz., dahi, jaggery and different kinds of fruit
juices were collected randomly from different localities of Kolkata, West Bengal, India. Thirty-three yeast
strains were isolated using selective medium, Martin’s Rose Bengal Agar. Differential tests were applied
including morphological, cultural and biochemical characteristics, which facilitate the opportunity for
identification of the yeasts. The total number of isolated yeast strains was 12 from dahi, 2 each from apple
juice, pineapple juice, mango juice, musambi juice, grape juice, orange juice, jaggery and 7 from
sugarcane juice. These strains were found to produce various extra cellular enzymes and could ferment
various carbon sources for the production of alcohol.
Key words: Ethanol, Yeast, Fermentation, Isolation of yeast.
INTRODUCTION
The useful physiological properties of yeast have led to their use in the field of
biotechnology, fermentation of sugars by yeast being the oldest and largest application of
this technology. Many types of yeasts are used for making many foods: baker's yeast in
bread production; brewer's yeast in beer fermentation; yeast in wine fermentation and for
xylitol production. A worldwide interest in the utilization of bio-ethanol as an energy source
has stimulated studies on the cost and efficiency of industrial processes for ethanol
production. Intense research has been carried out for obtaining efficient fermentative
organisms, low-cost fermentation substrates and optimum environmental conditions for
fermentation to occur. Traditionally, ethanol production is usually accomplished by
microbial conversion of carbohydrates present in agricultural products1. As, few yeast strains
have been found to possess appreciable characteristics for ethanol production2,3, there is a
S. Chatterjee et 648 al.: Isolation and Characterization of….
dire need to explore the potential of indigenous strains of yeasts to meet the national
requirements and to save the foreign exchange. There are different sources for the isolation
of yeast species4. However their presence, were reported mostly from the citrus juice5, dahi6
and sugarcane juice7, molasses8, sugar mill effluents9 and fermented foods10 and fermented
pineapple juice11. As there is global emphasis in ethanol production by fermentation
process.
In the present study, several local samples of dahi, various fruit juices and jaggery
were analyzed for isolation and subsequent characterization of yeast strains, which may
further be utilized in alcohol production.
EXPERIMENTAL
Materials and methods
All the research work was carried out in the Microbiology Laboratory of the
Department of Zoology, Molecular Biology & Genetics, Presidency University, Kolkata,
India.
Collection of samples
Samples of dahi, waste juices of apple, pineapple, mango, musambi, grape,
sugarcane, orange and jaggery were collected randomly from local markets of different areas
of Kolkata in sterile bottles and kept at 4°C. These samples were screened for isolation of
the yeast strains.
Isolation of yeast strains
The samples were serially diluted, plated on a selective medium, Martins Rose
Bengal agar Medium (33.6 gm /liter) and were incubated at 28°C for 48 hours. The colonies
appeared were further purified. Pure colonies were isolated and tested for further
characterization.
Morphological characterization
The strains were stained by lactophenol-cotton blue, carbol fuchsin and seen under
phase contrast microscope. The colonies were checked for their colour, outline and other
features.
Determination of enzyme synthesizing ability
To detect their ability to assimilate various polysaccharides, the strains were grown
Int. J. Chem. Sci.: 9(2), 2011 649
in basal medium composed of (gL-1): peptone 0.9; (NH4)2HPO4 0.4; KCl 0.1;
MgSO4.7H2O (pH 7) at 28°C for 18 hours, supplemented with starch, carboxy methyl
cellulose, xylan and pectin (0.5) respectively. For in situ detection of amylase and cellulase
& xylanase activities, plates were flooded with iodine solution (I2 + KI) and congo red
solution respectively. The catalase activity was checked by dropping few drops of H2O2 on
the culture. The quantitative assay of cellulase, amylase, xylanase and pectinase was done by
dinitrosalicylic acid method12. For checking the efficacy of the strains to grow and produce
alcohol, each strain was cultivated in basal medium supplemented with various sugars and
organic and inorganic nitrogen sources.
Determination of alcohol producing ability
To detect their alcohol producing ability, quantitative estimation of ethanol by
potassium dichromate method13 was followed. The supernatant (1 mL) of centrifuged culture
broth of glucose-grown yeast strain was made up the volume to 5 mL with distilled water.
Then 1 mL of Potassium dichromate reagent was added. All the test tubes were kept in ice
water and 4 mL of conc. sulfuric acid added to each tube gently through the walls. Then the
optical density was measured at 660 nm. Alcohol standard was prepared by dissolving
absolute ethanol in water to get 10 mg/mL concentration.K2Cr2O7 solution was prepared by
dissolving 10 gm of K2Cr2O7 in distilled water in a 100 ml standard flask and make up the
volume to mark.
RESULTS AND DISCUSSION
Fourteen samples of dahi, jaggery and fruit juices were screened from where thirty
three yeast strains were isolated and purified (Table 1). Maximum yeast strains were isolated
from dahi samples, followed by sugarcane juice. Most of the isolated colonies exhibited
smooth surfaces with circular margins. The colour of the colonies showed a wide variation
of creamy white and pinkish. The cells were found to be of various shapes such as round;
oval, spherical and ellipsoidal (Table 2).
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)
การแยกและศึกษาคุณสมบัติของยีสต์สายพันธุ์จากผลไม้ท้องถิ่น
กาก
ดะฮี jaggery และตัวอย่าง chatterjee somdatta , และ barnita ghosh รินะราณีเรย์
จุลชีววิทยาปฏิบัติการวิจัย ภาควิชาสัตววิทยา ชีววิทยาระดับโมเลกุล&พันธุศาสตร์
ประธานมหาวิทยาลัย โกลกาตา – 700073 ( w.b . ) อินเดีย
บทคัดย่อจำนวน 14 คน จากที่แตกต่างกัน แหล่งอาหาร ได้แก่ ดะฮี , ,น้ำตาลโตนด และชนิดของผลไม้
ครั้งนี้สุ่มจากท้องถิ่นต่าง ๆ ของกัลกัต , รัฐเบงกอลตะวันตกอินเดีย สามสิบสามยีสต์สายพันธุ์ที่แยกใช้งาน
กลาง , มาร์ติน โรสเบงกอล วุ้น การทดสอบความแตกต่างถูก
รวมทั้งสัณฐานวิทยาและชีวเคมีประยุกต์ ลักษณะทางวัฒนธรรมที่เอื้อโอกาสให้
รหัสของยีสต์จำนวนของสายพันธุ์ของยีสต์ที่แยกได้จากดะฮี 2 แต่ละจากแอปเปิ้ล
น้ำส้ม สับปะรด มะม่วง musambi ผลไม้ , องุ่น , ส้ม , Jaggery และ 7 จาก
น้ำอ้อย สายพันธุ์ที่พบในการผลิตต่าง ๆเสริมเซลล์ เอนไซม์และสามารถหมัก
แหล่งคาร์บอนต่างๆสำหรับการผลิตแอลกอฮอล์ .
คำสำคัญ : เอทานอล , การหมักยีสต์ การแยกยีสต์
ความรู้เบื้องต้นทางสรีรวิทยา
คุณสมบัติที่มีประโยชน์ของยีสต์มี LED ที่ใช้ในเขตข้อมูลของ
เทคโนโลยีชีวภาพการหมักน้ำตาลโดยยีสต์เป็นโปรแกรมที่เก่าแก่ที่สุดและใหญ่ที่สุดของ
เทคโนโลยีนี้ หลายประเภทของยีสต์ที่ใช้สำหรับทำอาหารมากมาย : ยีสต์ขนมปังใน
การผลิตขนมปัง บริวเวอร์ยีสต์ในการหมักเบียร์ ; ยีสต์ในการหมักไวน์และ
การผลิตไซลิทอล .ความสนใจทั่วโลกในการใช้ไบโอเอธานอลเป็นแหล่งพลังงาน
ได้กระตุ้นการศึกษาต้นทุนและประสิทธิภาพของอุตสาหกรรมกระบวนการผลิตเอทานอล
การวิจัยที่รุนแรงได้ดําเนินการอย่างมีประสิทธิภาพวิศวกรรมเคมี
สิ่งมีชีวิต พื้นผิว หมักต้นทุนต่ำ และสภาวะแวดล้อมที่เหมาะสมสำหรับ
หมักเกิดขึ้น ผ้าการผลิตเอทานอลเป็นปกติได้ โดยจุลินทรีย์ที่มีอยู่ในแปลงคาร์โบไฮเดรต
products1 การเกษตร เป็นสายพันธุ์ยีสต์น้อย
ได้รับพบว่ามีลักษณะส่วนบุคคลสำหรับ production2,3 เอทานอลมี
S . chatterjee ET เมื่ออัล : การแยกและการศึกษาคุณสมบัติของ . . . . . . .
อาการหนักต้องสำรวจศักยภาพของสายพันธุ์พื้นเมืองของยีสต์เพื่อตอบสนองแห่งชาติ
ความต้องการและการบันทึกแลกเปลี่ยน มีแหล่งข้อมูลที่แตกต่างกันสำหรับการแยก species4
ของยีสต์ อย่างไรก็ตาม ตนมีรายงานมาจากส้ม juice5 dahi6
, และ juice7 molasses8 อ้อย , น้ำตาล , effluents9 และหมัก foods10
juice11 และหมักสับปะรด มีทั่วโลกเน้นในการผลิตเอทานอลโดยกระบวนการหมัก
.
ในการศึกษาปัจจุบันตัวอย่าง ท้องถิ่นหลายแห่งดะฮี น้ําผลไม้ต่างๆและน้ำตาลโตนด
วิเคราะห์แยกและศึกษาลักษณะของสายพันธุ์ยีสต์ที่ตามมา ซึ่งอาจนำไปใช้ในการผลิตแอลกอฮอล์
.
2
ทั้งหมดวัสดุและวิธีการวิจัยเป็นการทดลองในห้องปฏิบัติการจุลชีววิทยาของ
ภาควิชาสัตววิทยา ชีววิทยาระดับโมเลกุล&พันธุศาสตร์ , ประธานาธิบดี มหาวิทยาลัย ,
โกลกาตา , อินเดียคอลเลกชันของตัวอย่าง
ตัวอย่างดะฮีกากผลไม้ แอปเปิ้ล สับปะรด มะม่วง musambi , องุ่น ,
อ้อย ส้ม และน้ำตาลโตนด ศึกษาแบบสุ่มจากตลาดท้องถิ่นของพื้นที่ที่แตกต่างกัน
ของโกลกาตาในขวดฆ่าเชื้อและเก็บที่อุณหภูมิ 4 องศา กลุ่มตัวอย่างเหล่านี้คัดกรองแยก
การแยกยีสต์สายพันธุ์ สายพันธุ์ยีสต์
จำนวนอนุกรมเจือจางชุบบนสื่อเลือกเบงกอลกลางวุ้นกุหลาบ
มาร์ติน ( 33.6 กรัม / ลิตร ) และอุณหภูมิ 28 องศา C เป็นเวลา 48 ชั่วโมง อาณานิคม
ปรากฏได้บริสุทธิ์ อาณานิคมแยกบริสุทธิ์และทดสอบสมบัติทางสัณฐานวิทยาลักษณะต่อไป
.
สายพันธุ์ที่เปื้อนผ้าฝ้ายสีฟ้าแลคโตฟีนอลเท่า carbol , และเห็นภายใต้กล้องจุลทรรศน์ตรงกันข้าม
เฟส อาณานิคมถูกสี ของพวกเขาร่างและคุณสมบัติอื่น ๆ
.
หาเอนไซม์สังเคราะห์ความสามารถในการตรวจสอบความสามารถในการดูดซึม
polysaccharides ต่างๆ สายพันธุ์ ปลูก
Int . J . Chem . วิทย์ : 9 ( 2 ) 2011 649
ปานกลาง แรกเริ่มประกอบด้วย ( gl-1 ) : เปปโตน 0.9 ; ( NH4 ) 2hpo4 0.1 0.4 ; การเจริญเติบโต ;
mgso4.7h2o ( pH 7 ) ที่อุณหภูมิ 28 องศา C เป็นเวลา 18 ชั่วโมง เสริมด้วยแป้งคาร์บอกซีเมทิลเซลลูโลสและเพกตินเนส
, ( 0.5 ) ตามลำดับสำหรับในประเทศไทยการตรวจหาเอนไซม์อะไมเลสและเซลลูเลส
&เนสกิจกรรม , จานเต็มไปด้วยสารละลายไอโอดีน ( I2 กิ ) และคองโกเรด
แก้ปัญหาตามลำดับ กิจกรรมที่สามารถถูกตรวจสอบโดยวางไม่กี่หยด H2O2 ใน
วัฒนธรรม วิเคราะห์เชิงปริมาณของเอนไซม์อะไมเลส และเอนไซม์ไซแลนเนส , า
dinitrosalicylic กรด method12 .สำหรับการตรวจสอบประสิทธิภาพของสายพันธุ์ที่ปลูกและผลิต
เหล้าแต่ละสายพันธุ์ที่ปลูกในแรกเริ่มเติมน้ำตาลและสารอินทรีย์และสารอนินทรีย์ต่างๆ
แหล่งไนโตรเจน ปริมาณแอลกอฮอล์ ตรวจจับแอลกอฮอล์
ความสามารถในการผลิตของความสามารถในการผลิต การประมาณค่าเชิงปริมาณของโพแทสเซียมไดโครเมต method13 เอทานอลโดย
ถูกสะกดรอยตามและน่าน ( 1 มล. ) ของระดับวัฒนธรรม
ซุปของกลูโคสยีสต์สายพันธุ์ที่ปลูก พบว่า ปริมาณ 5 ml ด้วยน้ำกลั่น .
แล้ว 1 มิลลิลิตร โพแทสเซียมไดโครเมตต์ถูกเพิ่มเข้ามา หลอดทดสอบทั้งหมดถูกเก็บไว้ในน้ำน้ำแข็ง
4 ml เข้มข้น . กรดกำมะถันเพิ่มหลอดแต่ละเบา ๆผ่านผนัง จากนั้น
ซิกแซ็กถูกวัดที่ 660 นาโนเมตรมาตรฐานเครื่องดื่มแอลกอฮอล์ถูกเตรียมโดยละลายในน้ำเอทานอล
แน่นอน 10 mg / ml ในสารละลายที่เตรียมโดย concentration.k2cr2o7
การละลายของ k2cr2o7 น้ำกลั่นใน 100 ml ขวดมาตรฐาน 10 กรัมและให้ขึ้น
เสียงมาร์ค ผลลัพธ์ และการอภิปราย
14 ตัวอย่าง ดะฮี jaggery และน้ำผลไม้เพิ่มได้จากที่ไหน สามสิบ
3 สายพันธุ์ยีสต์ที่แยกได้บริสุทธิ์ ( ตารางที่ 1 ) สายพันธุ์ยีสต์ที่แยกได้จากตัวอย่าง ดะฮี
สูงสุด รองลงมาคือ น้ำอ้อย ที่สุดของกาเวียน )
ผิวเรียบกับขอบวงกลม สีของโคโลนีมีความหลากหลายของครีม
สีขาวและสีชมพู . เซลล์ที่พบเป็นรูปร่างต่าง ๆ เช่น รอบ ;
รีทรงกลม และทรงรี ( ตารางที่ 2 )
การแปล กรุณารอสักครู่..
![](//thimg.ilovetranslation.com/pic/loading_3.gif?v=b9814dd30c1d7c59_8619)